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过表达前列腺凋亡反应因子-4对NIT-1细胞的影响
1
作者
吴绮楠
甘霞光
+2 位作者
邓武权
张玲
陈兵
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期931-934,共4页
目的:构建携带前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,PAR-4)基因PRKC apoptosis WT1 regulator(pawr)表达的重组腺病毒载体,研究PAR-4对胰岛β细胞株NIT-1的影响。方法:利用Oligo Designer3.0设计Pawr模版引物,通过RT-PC...
目的:构建携带前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,PAR-4)基因PRKC apoptosis WT1 regulator(pawr)表达的重组腺病毒载体,研究PAR-4对胰岛β细胞株NIT-1的影响。方法:利用Oligo Designer3.0设计Pawr模版引物,通过RT-PCR扩增出pawr基因片段,使用双酶切克隆至腺病毒载体ADV1,构建重组载体质粒p Ad Track-pawr-CMV。线性化p Ad Track-pawr-CMV和p Ad-Easy-1共同转化到感受态大肠杆菌构建重组腺病毒载体质粒p Ad Track-pawr。将NIT-1细胞分为4组:低糖组、高糖对照组、低糖+PAR-4过表达组以及高糖+PAR-4过表达组,Western blot检测各组PAR-4蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,ELISA检测经葡萄糖刺激后的各组细胞胰岛素分泌功能。结果:克隆的pawr基因片段测序正确。高纯度质粒中量抽提试剂盒抽提重组腺病毒载体质粒成功,单酶切鉴定,质粒转染HEK293细胞后有GFP表达,扩增48 h后出现细胞病变效应,病毒滴度测定为1×109 pfu/ml,低糖和高糖过表达PAR-4后均较相应对照组PAR-4表达明显升高,高糖培养+过表达PAR-4组细胞增殖能力均较低糖(P=0.000)和高糖对照组细胞(P=0.000)明显下降,较低糖(P=0.003)和高糖对照组细胞(P=0.001)胰岛素分泌明显下降。结论:成功构建高滴度pawr基因表达的重组腺病毒载体并转染NIT-1细胞,转染PAR-4后高糖培养的NIT-1细胞增殖能力和胰岛素分泌功能明显下降。
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关键词
前列腺凋亡反应因子-4
腺病毒载体
2型糖尿病
在线阅读
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职称材料
Par-4对胰岛β细胞凋亡的影响
被引量：
3
2
作者
甘霞光
吴绮楠
+2 位作者
邓武权
张玲
陈兵
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期6-11,共6页
目的:通过抑制前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)的表达,观察并探讨Par-4对高糖高脂干预的胰岛细胞凋亡的影响及其机制。方法:将小鼠胰岛β细胞株NIT-1随机分成正常对照组、Par-4阻断组、高糖高脂干预组、高...
目的:通过抑制前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)的表达,观察并探讨Par-4对高糖高脂干预的胰岛细胞凋亡的影响及其机制。方法:将小鼠胰岛β细胞株NIT-1随机分成正常对照组、Par-4阻断组、高糖高脂干预组、高糖高脂+Par-4阻断组,TUNEL法检测各组细胞凋亡,Western印迹检测各组细胞Par-4和葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein 78,GRP78)的表达水平。结果:与正常对照组[凋亡率为(3.14±1.08)%]比较,高糖高脂干预组胰岛β细胞凋亡率[(33.82±3.15)%]明显增加,Par-4和GRP78表达明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05);与高糖高脂干预组比较,高糖高脂+Par-4抑制组细胞凋亡率[(18.34±2.11)%]明显下降,Par-4和GRP78表达明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:抑制Par-4表达可改善高糖高脂诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡,其机制可能与降低了β细胞内质网应激水平有关。
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关键词
胰岛Β细胞
凋亡
PAR-4
糖尿病
内质网应激
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职称材料
题名
过表达前列腺凋亡反应因子-4对NIT-1细胞的影响
1
作者
吴绮楠
甘霞光
邓武权
张玲
陈兵
机构
第三军医大学
第一
附属
医院
内分泌科
第三军医大学第一附属医院门诊部
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期931-934,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:81370885)
重庆市教委研究生科研创新资助项目(编号:CYB14097)
第三军医大学青年人才基金资助项目(编号:SWH2013QN02)
文摘
目的:构建携带前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,PAR-4)基因PRKC apoptosis WT1 regulator(pawr)表达的重组腺病毒载体,研究PAR-4对胰岛β细胞株NIT-1的影响。方法:利用Oligo Designer3.0设计Pawr模版引物,通过RT-PCR扩增出pawr基因片段,使用双酶切克隆至腺病毒载体ADV1,构建重组载体质粒p Ad Track-pawr-CMV。线性化p Ad Track-pawr-CMV和p Ad-Easy-1共同转化到感受态大肠杆菌构建重组腺病毒载体质粒p Ad Track-pawr。将NIT-1细胞分为4组:低糖组、高糖对照组、低糖+PAR-4过表达组以及高糖+PAR-4过表达组,Western blot检测各组PAR-4蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,ELISA检测经葡萄糖刺激后的各组细胞胰岛素分泌功能。结果:克隆的pawr基因片段测序正确。高纯度质粒中量抽提试剂盒抽提重组腺病毒载体质粒成功,单酶切鉴定,质粒转染HEK293细胞后有GFP表达,扩增48 h后出现细胞病变效应,病毒滴度测定为1×109 pfu/ml,低糖和高糖过表达PAR-4后均较相应对照组PAR-4表达明显升高,高糖培养+过表达PAR-4组细胞增殖能力均较低糖(P=0.000)和高糖对照组细胞(P=0.000)明显下降,较低糖(P=0.003)和高糖对照组细胞(P=0.001)胰岛素分泌明显下降。结论:成功构建高滴度pawr基因表达的重组腺病毒载体并转染NIT-1细胞,转染PAR-4后高糖培养的NIT-1细胞增殖能力和胰岛素分泌功能明显下降。
关键词
前列腺凋亡反应因子-4
腺病毒载体
2型糖尿病
Keywords
prostate apoptosis response-4
adenovirus vector
type 2 diabetes mellitus
分类号
R58 [医药卫生—内分泌]
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职称材料
题名
Par-4对胰岛β细胞凋亡的影响
被引量：
3
2
作者
甘霞光
吴绮楠
邓武权
张玲
陈兵
机构
第三军医大学
第一
附属
医院
内分泌科
第三军医大学第一附属医院门诊部
出处
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期6-11,共6页
基金
国家自然科学基金(81370885)
重庆市教委研究生科研创新项目(CYB14097)
第三军医大学青年人才基金(SWH2013QN02)~~
文摘
目的:通过抑制前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)的表达,观察并探讨Par-4对高糖高脂干预的胰岛细胞凋亡的影响及其机制。方法:将小鼠胰岛β细胞株NIT-1随机分成正常对照组、Par-4阻断组、高糖高脂干预组、高糖高脂+Par-4阻断组,TUNEL法检测各组细胞凋亡,Western印迹检测各组细胞Par-4和葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein 78,GRP78)的表达水平。结果:与正常对照组[凋亡率为(3.14±1.08)%]比较,高糖高脂干预组胰岛β细胞凋亡率[(33.82±3.15)%]明显增加,Par-4和GRP78表达明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05);与高糖高脂干预组比较,高糖高脂+Par-4抑制组细胞凋亡率[(18.34±2.11)%]明显下降,Par-4和GRP78表达明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:抑制Par-4表达可改善高糖高脂诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡,其机制可能与降低了β细胞内质网应激水平有关。
关键词
胰岛Β细胞
凋亡
PAR-4
糖尿病
内质网应激
Keywords
islet β cell
apoptosis
Par-4
diabetes
endoplasmic reticulum stress
分类号
R587.1 [医药卫生—内分泌]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
过表达前列腺凋亡反应因子-4对NIT-1细胞的影响
吴绮楠
甘霞光
邓武权
张玲
陈兵
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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职称材料
2
Par-4对胰岛β细胞凋亡的影响
甘霞光
吴绮楠
邓武权
张玲
陈兵
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
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