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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位DNA结合能力的测定被引量：2: 1; 作者申晓冬张克斌 +6 位作者李明周莹冰蹇锐胡晓梅陈志瑾饶贤才胡福泉《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第22期2205-2208,共4页; 目的检测铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位与噬菌体基因组末端cos位点的结合能力。方法通过PCR扩增出末端酶大亚单位编码基因tls,经pMD-T18载体克隆至表达载体pQE31上,IPTG诱导表达,获得包涵体蛋白,用包涵体裂解液溶解包涵体,通过N... 展开更多; 关键词末端酶大亚单位噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

推定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位的DNA结合能力检测被引量：2: 2; 作者申晓冬张克斌 +4 位作者李明胡晓梅周莹冰陈志瑾胡福泉《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期379-382,共4页; 目的检测理论推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位(pap3p01基因)编码蛋白对特异性DNA的结合能力。方法通过PCR从噬菌体PaP3基因组扩增出pap3p01基因,克隆至表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109后,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌... 展开更多; 关键词末端酶小亚单位噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

铜绿假单胞菌PAO1株基因组中2个SOS盒序列的初步鉴定: 3; 作者张克斌周世文 +4 位作者光丽霞何晓梅盛哈雷张国斌钱桂生《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1032-1036,共5页; 目的鉴定铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)PAO1株基因组中的SOS盒序列。方法挑选铜绿假单胞菌PAO1株基因组中16个可能含有SOS盒序列的DNA片段,经PCR扩增后,用纯化的LexA表达蛋白做凝胶滞后实验;将获得的2个阳性DNA片段进一步用D... 展开更多; 关键词铜绿假单胞菌PAO1株 SOS盒 LexA蛋白回文序列凝胶滞后实验 DNASE Ⅰ足纹法; 在线阅读下载PDF 职称材料

体外转录法制备SARS冠状病毒RNA片段: 4; 作者张克斌戢福云 +2 位作者光丽霞周世文钱桂生《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第24期2472-2474,共3页; 目的通过体外转录获得SARS冠状病毒RNA片段,为建立RTPCR和荧光定量PCR诊断方法提供阳性对照。方法根据GenBank登录SARS冠状病毒Tor2株基因组序列,选择基因组中18138-18327nt作为目的扩增序列,并将其分解为首尾重叠的3个片段,人工合成对... 展开更多; 关键词 SARS冠状病毒 RNA片段体外转录 RT-PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位DNA结合能力的测定被引量：2: 1; 作者申晓冬张克斌李明周莹冰蹇锐胡晓梅陈志瑾饶贤才胡福泉; 机构第三军医大学基础医学部微生物学教研室第三军医大学新桥医院医学实验技术中心; 出处《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第22期2205-2208,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(30470082)~~; 文摘目的检测铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位与噬菌体基因组末端cos位点的结合能力。方法通过PCR扩增出末端酶大亚单位编码基因tls,经pMD-T18载体克隆至表达载体pQE31上,IPTG诱导表达,获得包涵体蛋白,用包涵体裂解液溶解包涵体,通过Ni-NTA亲和层析,分离出重组目的蛋白rTLS,透析复性后,与生物素标记的基因组末端cos片段进行结合反应,通过EMSA检测DNA滞后现象。结果成功构建了表达载体pQE-tls,获得了纯化的具有生物学活性的重组末端酶大亚单位rTLS,EMSA结果证实结合rTLS后的cos片段与无蛋白加入的对照组相比明显滞后。结论重组噬菌体PaP3末端酶大亚单位在体外可与基因组末端cos片段发生特异性结合,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。; 关键词末端酶大亚单位噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达; Keywords terminase large subunit bacteriophage PAP3 EMSA protein expression; 分类号 Q55 [生物学—生物化学] Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名推定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位的DNA结合能力检测被引量：2: 2; 作者申晓冬张克斌李明胡晓梅周莹冰陈志瑾胡福泉; 机构第三军医大学基础医学部微生物学教研室第三军医大学新桥医院医学实验技术中心; 出处《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期379-382,共4页; 基金国家自然科学基金(30470082)~~; 文摘目的检测理论推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位(pap3p01基因)编码蛋白对特异性DNA的结合能力。方法通过PCR从噬菌体PaP3基因组扩增出pap3p01基因,克隆至表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109后,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后发现目的蛋白质H6-PaP3P01存在于上清中,进而利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白。利用PCR与酶切方法获取可能含有末端酶小亚单位结合位点的DNA片段,并对其3′端进行生物素标记。最后采用凝胶迁移率改变实验检测H6-PaP3P01的DNA结合能力。结果成功构建了pQE-PaP3P01表达载体,获得的融合蛋白H6-PaP3P01表达量较高且全部存在于菌体超声后的上清中。经亲和层析初步纯化及脱盐处理后,H6-PaP3P01可与263 bp特异性DNA片段结合。结论成功构建并表达了推定的PaP3末端酶小亚单位重组蛋白H6-PaP3P01,并且检测到了该蛋白质对特异DNA的结合能力,初步证实了理论推定的正确性,为完善PaP3噬菌体包装机制的研究奠定了基础。; 关键词末端酶小亚单位噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达; Keywords terminase small subunit bacteriophage PaP3 electrophoretic mobility shift assay protein ex pression and purification; 分类号 Q75 [生物学—分子生物学] Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名铜绿假单胞菌PAO1株基因组中2个SOS盒序列的初步鉴定: 3; 作者张克斌周世文光丽霞何晓梅盛哈雷张国斌钱桂生; 机构第三军医大学新桥医院医学实验技术中心第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所; 出处《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1032-1036,共5页; 基金重庆市自然科学基金(2007BB5023) 第三军医大学新桥医院人才基金(2007-2012)~~; 文摘目的鉴定铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)PAO1株基因组中的SOS盒序列。方法挑选铜绿假单胞菌PAO1株基因组中16个可能含有SOS盒序列的DNA片段,经PCR扩增后,用纯化的LexA表达蛋白做凝胶滞后实验;将获得的2个阳性DNA片段进一步用DNaseⅠ足纹法进行LexA蛋白结合序列即SOS盒的鉴定;分析所获得的2个SOS盒中的回文序列,以此回文序列在PAO1基因组中进行检索,初步分析出可能的SOS盒序列和可能的调控基因。结果通过DNaseⅠ足纹法初步鉴定了PAO1基因组中2个SOS盒序列,即位于基因组4 052 647～4 052 662 bp位置的CTGTCTACTTATACAG序列和5 349 888～5 349 903 bp位置的CTGTATAAATAACCAG序列,分析其回文结构为"CTG…CAG",以此回文序列在基因组中进行检索,共获得了10个候选的SOS盒序列。结论初步证实了PAO1基因组中的2个SOS盒,并获得了10条SOS盒候选序列。; 关键词铜绿假单胞菌PAO1株 SOS盒 LexA蛋白回文序列凝胶滞后实验 DNASE Ⅰ足纹法; Keywords Pseudomonas aeruginosa PAO1 SOS box LexA protein palindrome sequence electrophoretic mobility shift assay DNase I foot printing; 分类号 Q503 [生物学—生物化学] Q755 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名体外转录法制备SARS冠状病毒RNA片段: 4; 作者张克斌戢福云光丽霞周世文钱桂生; 机构第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所第三军医大学新桥医院医学实验技术中心; 出处《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第24期2472-2474,共3页; 基金重庆市攻关课题(2003年紧急启动项目)~~; 文摘目的通过体外转录获得SARS冠状病毒RNA片段,为建立RTPCR和荧光定量PCR诊断方法提供阳性对照。方法根据GenBank登录SARS冠状病毒Tor2株基因组序列,选择基因组中18138-18327nt作为目的扩增序列,并将其分解为首尾重叠的3个片段,人工合成对应的单链DNA序列,通过退火延伸获得全长dsDNA片段,PCR扩增该片段后,连接至载体pMD18T上,筛选含目的插入片段的阳性重组质粒pMD18TSARS,用BamHⅠ和HindⅢ切出目的片段,连接至线性化表达性质粒pGEM上;筛选阳性重组质粒pGEMSARS,测序鉴定后,经HindⅢ酶切线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,得到含SARS冠状病毒目的序列的RNA片段,转录产物经电泳观察后,用RTPCR验证。结果获得含SARS冠状病毒目的基因序列的RNA片段。结论该RNA片段可用于SARS冠状病毒RTPCR和荧光定量RTPCR诊断方法的阳性对照。; 关键词 SARS冠状病毒 RNA片段体外转录 RT-PCR; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位DNA结合能力的测定	申晓冬张克斌李明周莹冰蹇锐胡晓梅陈志瑾饶贤才胡福泉	《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	推定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位的DNA结合能力检测	申晓冬张克斌李明胡晓梅周莹冰陈志瑾胡福泉	《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	铜绿假单胞菌PAO1株基因组中2个SOS盒序列的初步鉴定	张克斌周世文光丽霞何晓梅盛哈雷张国斌钱桂生	《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	体外转录法制备SARS冠状病毒RNA片段	张克斌戢福云光丽霞周世文钱桂生	《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2005	0	在线阅读下载PDF 职称材料