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线粒体DNA缺失肝癌细胞内活性氧、线粒体膜电位变化实验研究 被引量:4
1
作者 张国桥 凌贤龙 陈正堂 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期711-713,共3页
目的比较活性氧、线粒体膜电位在线粒体DNA缺失肝癌细胞株SK-Hep1(ρ0SK-Hep1)与亲本细胞中的差别。方法采用溴化乙锭诱导制备ρ0SK-Hep1细胞株;荧光探针标记、流式细胞计数及激光共聚焦显微镜方法检测细胞内活性氧和线粒体膜电位。结果... 目的比较活性氧、线粒体膜电位在线粒体DNA缺失肝癌细胞株SK-Hep1(ρ0SK-Hep1)与亲本细胞中的差别。方法采用溴化乙锭诱导制备ρ0SK-Hep1细胞株;荧光探针标记、流式细胞计数及激光共聚焦显微镜方法检测细胞内活性氧和线粒体膜电位。结果ρ0SK-Hep1细胞内活性氧荧光强度显著高于其亲本SK-Hep1细胞株(P<0.01),ρ0SK-Hep1肝癌细胞平均计数35.5,而SK-Hep1肝癌细胞平均计数15.9。ρ0SK-Hep1细胞线粒体膜电位显著低于亲本细胞(P<0.01),ρ0SK-Hep1细胞平均计数55.0,而SK-Hep1细胞平均计数65.9。结论线粒体DNA缺失后细胞内活性氧水平增加,而线粒体膜电位有所减低。 展开更多
关键词 线粒体DNA 活性氧 膜电位 肿瘤
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MMP-7反义寡核苷酸抑制肺腺癌A549细胞体外增殖活性的实验研究 被引量:4
2
作者 杨波 王志新 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期250-252,共3页
目的观察基质溶解素(matrilysin,MMP-7)反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞体外增殖活性的影响。方法采用硫代磷酸修饰的MMP-7反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN),通过脂质体导入肺腺癌A549细胞后免疫组化法检测A549细胞MMP-... 目的观察基质溶解素(matrilysin,MMP-7)反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞体外增殖活性的影响。方法采用硫代磷酸修饰的MMP-7反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN),通过脂质体导入肺腺癌A549细胞后免疫组化法检测A549细胞MMP-7表达,MTT法检测A549细胞增殖,FCM检测A549细胞周期。结果相差显微镜下观察A549细胞转染ASODN后细胞体积变小,数目减少。MTT法测细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制A549细胞的增殖,抑制作用在48h最强。免疫组化SABC法检测提示转染ASODN后A549细胞MMP-7蛋白表达水平明显降低。FCM检测显示MMP-7ASODN可以抑制A549由G0/G1期进入S期。结论MMP-7ASODN可以特异性地抑制肺腺癌A549细胞株MMP-7蛋白的表达,调控细胞周期,抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 基质溶解素 反义寡核苷酸 肺腺癌A549细胞
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线粒体DNA HVR区Ⅰ序列突变与肺鳞癌关系的研究 被引量:1
3
作者 刘丽红 胡义德 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期652-654,共3页
目的 分析肺鳞癌患者外周血白细胞及其癌组织线粒体DNA(mitochondrialDNA ,mtDNA)非编码区(又称D 环)高变区Ⅰ(hypervariableregionⅠ,HVRⅠ)序列的突变情况并探讨其意义。方法 应用改良一步法制备13例肺鳞癌患者外周血白细胞及肺鳞... 目的 分析肺鳞癌患者外周血白细胞及其癌组织线粒体DNA(mitochondrialDNA ,mtDNA)非编码区(又称D 环)高变区Ⅰ(hypervariableregionⅠ,HVRⅠ)序列的突变情况并探讨其意义。方法 应用改良一步法制备13例肺鳞癌患者外周血白细胞及肺鳞癌组织mtDNA ,PCR产物直接测序,对比分析HVRⅠ区序列突变情况。结果 13例肺鳞癌患者癌组织mtDNAHVRⅠ区中,有8例出现了突变,占61 5 4% ;在2 5个不同位点上共发现3 0个突变,其中点突变占5 6 67% (17/3 0 ) ,插入和缺失突变占43 3 3 % (13 /3 0 ) ,并发现1例肺鳞癌病人存在10bp片段的缺失。结论 肺鳞癌患者癌组织细胞mtDNAHVRⅠ区突变发生率高,其中点突变占有重要地位,插入和缺失突变也不可忽视。 展开更多
关键词 肺鳞癌 线粒体DNA D-环区 高变区Ⅰ 突变
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EWS-FLI1介导DTA基因在尤文肉瘤移植瘤裸鼠模型体内特异表达研究
4
作者 赵忠全 冯岗 王东林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期53-55,共3页
目的观察EW S-FLI1介导的白喉毒素A链基因(d iphtheria toxin A cha in gene,DTA)在尤文肉瘤裸鼠移植瘤模型体内特异表达情况。方法采用尾静脉注射给药,将含有EW S-FLI1特异结合序列ACCGGAAGT和白喉毒素A链基因的真核表达载体pS2-DTA导... 目的观察EW S-FLI1介导的白喉毒素A链基因(d iphtheria toxin A cha in gene,DTA)在尤文肉瘤裸鼠移植瘤模型体内特异表达情况。方法采用尾静脉注射给药,将含有EW S-FLI1特异结合序列ACCGGAAGT和白喉毒素A链基因的真核表达载体pS2-DTA导入尤文肉瘤裸鼠移植瘤模型体内,通过免疫组化及RT-PCR检测DTA的表达情况。结果DTA在肿瘤组织中有高表达,肝组织中有弱表达,心肌组织中表达结果为阴性。结论EW S-FLI1介导的DTA可在尤文肉瘤裸鼠移植瘤内特异表达。 展开更多
关键词 尤文肉瘤 白喉毒素A链(DTA) 裸鼠 基因治疗
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不同活化表型的巨噬细胞对Lewis肺癌细胞增殖和侵袭的影响 被引量:5
5
作者 章必成 王俊 +3 位作者 赵勇 高建飞 郭燕 陈正堂 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1013-1016,共4页
目的探讨不同活化表型的小鼠巨噬细胞对小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞增殖和侵袭的影响。方法分别以mr IFN-γ+LPS、mr IL-4处理小鼠RAW264.7巨噬细胞,24h后以RT-PCR鉴定它们表达经典活化的巨噬细胞(caMphi)或替代性活化的巨噬细胞(aaMphi)的... 目的探讨不同活化表型的小鼠巨噬细胞对小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞增殖和侵袭的影响。方法分别以mr IFN-γ+LPS、mr IL-4处理小鼠RAW264.7巨噬细胞,24h后以RT-PCR鉴定它们表达经典活化的巨噬细胞(caMphi)或替代性活化的巨噬细胞(aaMphi)的标识iNOS或Fizz1的情况。采用Transwell系统共培养活化的巨噬细胞(分为4组:空白对照组、caMphi组、aaMphi组、RAW264.7组)和LLC细胞,绘制LLC细胞生长曲线,并以免疫细胞化学法检测LLC细胞表达血管内皮生长因子-C(VEGF-C)情况,以硝酸还原酶法检测培养液上清中NO含量。分别采用3H-TdR掺入法和Tran-swell侵袭模型观察活化的巨噬细胞对LLC细胞增殖和侵袭的影响。结果成功地建立了小鼠caMphi和aaMphi模型。在4个共培养组中,aaMphi组的LLC细胞生长最快,表达VEGF-C最强,RAW264.7组次之;caMphi组大量分泌NO,其余3组未见NO分泌。通过3H-TdR掺入法和Transwell侵袭模型观察到,aaMphi组的LLC细胞增殖速度最快,侵袭能力最强;RAW264.7组次之;caMphi组的LLC细胞的增殖和侵袭则受到抑制。结论aaMphi能够促进LLC细胞的增殖和侵袭,与其上调后者表达VEGF-C有关;caMphi能够抑制LLC细胞的增殖和侵袭,与其大量分泌NO有关。在与LLC细胞共培养后,RAW264.7细胞的功能朝着aaMphi的方向极化。 展开更多
关键词 巨噬细胞 活化表型 LEWIS肺癌 增殖 侵袭
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pSiRNA-Notch1逆转录病毒载体的构建及对恶性脑胶质瘤细胞的作用 被引量:4
6
作者 尹昌林 吕胜青 +3 位作者 黄轶 李光辉 唐莉 杨辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1211-1214,共4页
目的建立逆转录病毒介导的人Notch1基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用。方法将人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer5.1-H1Retro中,构建成携带人Notch1基因RNAi逆转录病毒载体pSiRNA-Not... 目的建立逆转录病毒介导的人Notch1基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用。方法将人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer5.1-H1Retro中,构建成携带人Notch1基因RNAi逆转录病毒载体pSiRNA-Notch1,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染U251和CHG-5恶性脑胶质瘤细胞,用WST-8、RT-PCR和Western blot分别检测对转染细胞活性、人Notch1 mRNA和蛋白表达的影响。结果重组pSiRNA-Notch1质粒经测序鉴定正确。重组逆转录病毒滴度可达224×104cfu/ml,感染U251和CHG-5恶细胞后3d能明显抑制细胞生长,RT-PCR和Western blot检测人Notch1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论携带人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段的逆转录病毒有明显的抑制恶性脑胶质瘤细胞生长作用,为下一步开展基因治疗恶性脑胶质瘤奠定了基础。 展开更多
关键词 pSiRNA—Notch1逆转录病毒载体 恶性脑胶质瘤 基因治疗
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PIAS3在人脑胶质瘤中的表达 被引量:4
7
作者 纪华 王东林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1240-1242,共3页
目的通过观察PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)在不同级别胶质瘤中的表达,研究PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系。方法运用免疫组织化学法对50例胶质瘤标本及5例正常脑组织中PIAS3的表达进行对照研究。结果正常脑组织中未见... 目的通过观察PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)在不同级别胶质瘤中的表达,研究PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系。方法运用免疫组织化学法对50例胶质瘤标本及5例正常脑组织中PIAS3的表达进行对照研究。结果正常脑组织中未见PIAS3表达,胶质瘤标本中的总阳性率为56%(28/50),两者之间差异有显著性(P<0·01);不同病理级别的阳性率和标记指数随着肿瘤恶性程度的升高而增加,但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤PIAS3阳性率无明显差异(P>0·05),Ⅰ~Ⅲ级与Ⅳ级阳性率之间有显著差异(P<0·01);Ⅰ级与Ⅱ级的标记指数之间、Ⅲ级与Ⅳ级的标记指数之间均无明显差异(P>0·05),低度恶性组(Ⅰ~Ⅱ级)与高度恶性组(Ⅲ~Ⅳ级)之间有显著差异(P<0·05)。结论PIAS3在胶质瘤中有表达,并与肿瘤的病理分级和恶性程度密切相关,提示其可能参与了胶质瘤的发生、发展。 展开更多
关键词 胶质瘤 PIAS3 免疫组织化学
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正常大鼠视网膜感光细胞超微结构在视觉发育关键期中的变化 被引量:2
8
作者 杨永峰 孙汉军 胡义德 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第14期1467-1469,共3页
目的观察出生后大鼠视网膜感光细胞超微结构在视觉发育关键期(7~30d)中的变化特点。方法10只正常健康Wistar大鼠,8只为新生大鼠,2只为成年大鼠。新生大鼠随机分为4组,每组2只,正常饲养,分别于出生后0、15、20、25d摘取眼球进行... 目的观察出生后大鼠视网膜感光细胞超微结构在视觉发育关键期(7~30d)中的变化特点。方法10只正常健康Wistar大鼠,8只为新生大鼠,2只为成年大鼠。新生大鼠随机分为4组,每组2只,正常饲养,分别于出生后0、15、20、25d摘取眼球进行视网膜电镜观察。2只成年大鼠亦进行视网膜电镜观察。结果出生后0d大鼠,视网膜感光细胞超微结构幼稚且细胞层次不清,关键期内感光细胞的细胞器逐步丰富发育成熟,层次渐显清晰。结论大鼠视网膜感光细胞在视觉发育关键期内逐渐发育、成熟。 展开更多
关键词 视网膜 视觉发育 感光细胞 超微结构
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大肠癌新型CEA疫苗重组杆状病毒的表达与鉴定 被引量:1
9
作者 辇伟奇 吴玉章 王志新 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期66-68,共3页
目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,构建新型CEA融合表位疫苗(以HPV16L1为蛋白载体)的重组杆状病毒。方法构建含有HPV16L1片段和CEA-PADRE合成片段的表达载体pFastBac1-V,转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统,将该基因... 目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,构建新型CEA融合表位疫苗(以HPV16L1为蛋白载体)的重组杆状病毒。方法构建含有HPV16L1片段和CEA-PADRE合成片段的表达载体pFastBac1-V,转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统,将该基因重组至杆状病毒穿梭质粒bacm id中,转染昆虫细胞sf9,获得新型CEA疫苗的重组杆状病毒。结果限制性内切酶酶切和DNA序列分析表明目的片断正确克隆到杆状病毒转移载体pFastBac1中;重组杆状病毒感染昆虫细胞后,PCR检测可以扩增出相应大小的片段。结论利用杆状病毒表达系统,成功构建了CEA融合表位疫苗的重组杆状病毒,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 癌胚抗原 疫苗 大肠癌 杆状病毒
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小鼠MIP-3α基因在Lewis肺癌中的放射诱导表达
10
作者 邹岚 朱波 +2 位作者 陈敬 杜剑平 陈正堂 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第24期2188-2190,共3页
目的 构建pEgr 1 MIP 3α(pEM)质粒 ,探讨辐射对被转染的Lewis肺癌细胞中MIP 3α表达的影响。方法 用定向克隆方法 ,构建pEM重组表达质粒 ,脂质体介导转染Lewis肺癌细胞 ,用RT PCR和ELISA方法检测不同剂量电子线照射后的MIP 3α表达... 目的 构建pEgr 1 MIP 3α(pEM)质粒 ,探讨辐射对被转染的Lewis肺癌细胞中MIP 3α表达的影响。方法 用定向克隆方法 ,构建pEM重组表达质粒 ,脂质体介导转染Lewis肺癌细胞 ,用RT PCR和ELISA方法检测不同剂量电子线照射后的MIP 3α表达水平。结果 本实验构建的重组质粒pEM中MIP 3αcDNA正确插入表达载体 ;各照射组在不同剂量电子线照射后 ,MIP 3α表达均高于未转染组和假照射组。结论 Egr 1启动子具有辐射启动和诱导下游MIP 3α基因在Lewis肺癌中增强表达的功能 ,为pEM用于放射 -基因治疗的体内研究 ,提供了实验基础。 展开更多
关键词 巨噬细胞炎症蛋白-3α 早期生长反应-1启动子 树突状细胞 放射基因治疗
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信号肽重组hβD2在A549细胞中表达纯化及抗菌活性测定
11
作者 张青 杜剑平 陈正堂 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期298-301,共4页
目的 通过构建在A5 49细胞中高表达人防卫素hβD2的表达体系 ,获得人源化hβD2。 方法 构建pLNCX2 CEA信号肽 hβD2成熟肽逆转录病毒表达载体 ,经逆转录包装细胞PT67包装后获得含融合基因的侵袭性病毒 ,该病毒感染宿主细胞A5 49后... 目的 通过构建在A5 49细胞中高表达人防卫素hβD2的表达体系 ,获得人源化hβD2。 方法 构建pLNCX2 CEA信号肽 hβD2成熟肽逆转录病毒表达载体 ,经逆转录包装细胞PT67包装后获得含融合基因的侵袭性病毒 ,该病毒感染宿主细胞A5 49后将融合基因整合入宿主基因组中 ,收集培养基上清 ,分离纯化获得目的蛋白hβD2 ,测定目的蛋白的抗菌活性。结果 收集转染有融合基因的A5 49细胞培养基上清 ,经WesternBlot和质谱仪分析 ,纯化后的目的蛋白为hβD2 ,具有较强的抗菌活性。结论 将CEA信号肽重组hβD2基因转染A5 49细胞后 ,细胞具有表达分泌型hβD2的功能。 展开更多
关键词 A549细胞 融合基因 表达 抗菌活性 蛋白 CEA 纯化 信号肽 宿主基因组 防卫
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小鼠FasL全长cDNA的克隆、真核表达载体构建及其在树突状细胞中的表达
12
作者 王彦 卓文磊 +3 位作者 王长征 钱桂生 毕玉田 吴奎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期28-31,共4页
目的克隆小鼠FasL(mouse FasL,mFasL)全长cDNA,构建其真核表达载体,并验证其在小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)中的表达。方法采用RT-PCR和TA克隆技术,从激活的小鼠脾脏T淋巴细胞中扩增mFasL全长cDNA,亚克隆到T载体中,再... 目的克隆小鼠FasL(mouse FasL,mFasL)全长cDNA,构建其真核表达载体,并验证其在小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)中的表达。方法采用RT-PCR和TA克隆技术,从激活的小鼠脾脏T淋巴细胞中扩增mFasL全长cDNA,亚克隆到T载体中,再克隆到pIRES2EGFP载体中。转染小鼠DC后,用RT-PCR、免疫荧光及W estern blot检测mFasL mRNA和蛋白表达。结果测序证实所得的mFasL cDNA序列与其在GenBank中的序列完全一致。mFasL真核表达载体转染小鼠DC后,能表达mFasL mRNA和蛋白。结论成功克隆了mFasL基因,构建其真核表达载体,并证明能有效表达于DC中。 展开更多
关键词 FASL 克隆 载体构建 树突状细胞
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