目的探讨第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromo-some ten,PTEN)对大鼠原代海马神经元牵张损伤后AMPA受体GluR2亚单位定位表达的调节作用。方法选用新生SD大鼠培养原代海马神经元,...目的探讨第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromo-some ten,PTEN)对大鼠原代海马神经元牵张损伤后AMPA受体GluR2亚单位定位表达的调节作用。方法选用新生SD大鼠培养原代海马神经元,建立神经元牵张损伤模型,利用RNAi慢病毒载体敲减神经元中PTEN基因的表达。采用Tunel染色评估神经元牵张各时相点的损伤情况。采用Western blot检测牵张各时相点AMPA受体GluR2亚单位在细胞中的表达定位变化。结果慢病毒介导的RNAi能有效下调PTEN基因的表达。PTEN基因表达下调后,0、2、6h细胞凋亡比例无明显差异,但24h细胞凋亡比例由(68.7%±5.1%)下降至(39.3%±3.5%),48h细胞凋亡比例由(76.7%±5.3%)下降至(52.0%±4.3%)。神经元细胞膜中的AMPA受体GluR2亚单位含量在牵张损伤6、24、48h明显降低。下调PTEN基因的表达后,神经元细胞膜中的AMPA受体GluR2亚单位含量在牵张损伤6h无明显降低,牵张损伤24、48h后降低。细胞损伤6、24、48h时,下调PTEN基因的表达能够明显上调神经元细胞膜中的AMPA受体GluR2亚单位含量。结论海马神经元受到机械性牵张损伤后,下调PTEN的表达能够有效地阻止AMPA受体GluR2亚单位在细胞膜上定位的降低,降低凋亡细胞比例。PTEN对AMAP受体的调节作用可能为预防和治疗脑创伤提供一条新途径。展开更多
文摘目的探讨第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromo-some ten,PTEN)对大鼠原代海马神经元牵张损伤后AMPA受体GluR2亚单位定位表达的调节作用。方法选用新生SD大鼠培养原代海马神经元,建立神经元牵张损伤模型,利用RNAi慢病毒载体敲减神经元中PTEN基因的表达。采用Tunel染色评估神经元牵张各时相点的损伤情况。采用Western blot检测牵张各时相点AMPA受体GluR2亚单位在细胞中的表达定位变化。结果慢病毒介导的RNAi能有效下调PTEN基因的表达。PTEN基因表达下调后,0、2、6h细胞凋亡比例无明显差异,但24h细胞凋亡比例由(68.7%±5.1%)下降至(39.3%±3.5%),48h细胞凋亡比例由(76.7%±5.3%)下降至(52.0%±4.3%)。神经元细胞膜中的AMPA受体GluR2亚单位含量在牵张损伤6、24、48h明显降低。下调PTEN基因的表达后,神经元细胞膜中的AMPA受体GluR2亚单位含量在牵张损伤6h无明显降低,牵张损伤24、48h后降低。细胞损伤6、24、48h时,下调PTEN基因的表达能够明显上调神经元细胞膜中的AMPA受体GluR2亚单位含量。结论海马神经元受到机械性牵张损伤后,下调PTEN的表达能够有效地阻止AMPA受体GluR2亚单位在细胞膜上定位的降低,降低凋亡细胞比例。PTEN对AMAP受体的调节作用可能为预防和治疗脑创伤提供一条新途径。
