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题名骨形成蛋白4条件性RNA干扰小鼠的建立
被引量：3
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作者
李福兵
杜晓兰
余瑛
赵玲
何启芬
陈林
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机构
第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军创伤中心 创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室
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出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期341-346,共6页
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基金
国家重点基础研究发展规划资助项目(973项目)(编号:2005CB522604)
国家自然基金杰出青年基金(编号:30425023)
国家自然基金重点项目(编号:30530410)资助~~
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文摘
为研究骨形成蛋白4(Bone morphogenetic protein 4,BMP4)在骨骼发育中的作用,我们以含有LoxPneo的pBSK/U6载体为骨架,构建小鼠BMP4条件性RNAi(conditional RNA interference),CRNA;载体(BMP4CRNAi),经KpnⅠ和AflⅢ双酶切获取针对bmp4并含neo基因的目的干扰片段,纯化后的目的片段显微注射入0.5d的FVB/NJ小鼠受精卵,并植入同期发情的假孕母鼠中,获取G0代转基因小鼠;利用PCR对G0代转基因小鼠基因型进行鉴定,PCR阳性的小鼠与FVB/NJ小鼠交配,最终获取稳定传代的BMP4CRNAi小鼠。稳定传代的BMP4CRNAi小鼠与成骨和软骨前体细胞表达Cre的转基因小鼠(Col2a1-Cre)交配,获取BMP4Col2a1-CRNAi小鼠。分离BMP4Col2a1-CRNAi小鼠原代软骨细胞,提取总RNA,利用半定量RT-PCR检测RNA干扰效率。小鼠基因型鉴定结果表明:成功获得条件性RNAi转基因小鼠;BMP4干扰效率检测结果表明:在软骨细胞中BMP4的干扰效率为81%。以上结果表明,我们成功制备了BMP4CRNAi小鼠和BMP4Col2a1-CRNAi小鼠,BMP4CRNAi小鼠与不同Cre转基因小鼠交配,可以研究BMP4在不同细胞、组织和器官的功能,BMP4Col2a1-CRNAi小鼠的获得为研究BMP4在软骨发育中的作用提供了合适的动物模型。
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关键词
骨形成蛋白4
条件性RNA干扰
条件性敲低
转基因
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Keywords
bone morphogenetic protein 4
conditional RNAi
conditional knockdown
transgenic
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
Q522
[生物学—生物化学]
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