原位杂交检测斯氏肺吸虫童虫半胱氨酸蛋白酶的基因表达部位

1

作者 王晓丽 张健 +2 位作者 许颖 段建华 王英 《四川动物》 CSCD 北大核心 2005年第2期157-158,F002,共3页

目的—从基因水平研究半胱氨酸蛋白酶基因在斯氏肺吸虫童虫的表达,并进行虫体定位。方法—利用地高辛标记原位杂交技术检测半胱氨酸蛋白酶基因在斯氏肺吸虫童虫的表达并定位。结果—在斯氏肺吸虫童虫的肠管上皮细胞中呈强阳性着色,在虫... 目的—从基因水平研究半胱氨酸蛋白酶基因在斯氏肺吸虫童虫的表达,并进行虫体定位。方法—利用地高辛标记原位杂交技术检测半胱氨酸蛋白酶基因在斯氏肺吸虫童虫的表达并定位。结果—在斯氏肺吸虫童虫的肠管上皮细胞中呈强阳性着色,在虫体皮层细胞中有弱阳性着色。结论—半胱氨酸蛋白酶主要在斯氏肺吸虫童虫的肠管上皮细胞中表达,在虫体皮层细胞中也有弱表达。 展开更多

关键词 斯氏肺吸虫 半胱氨酸蛋白酶 原位杂交 童虫 基因表达部位 寄生虫

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巫山、奉节县肺吸虫病的流行及46例患者误诊分析 被引量：3

2

作者 张敬如 王英 +1 位作者 杨松 张锡林 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期163-164,共2页

关键词 巫山县 肺吸虫病 误诊 奉节县 诊断 流行病学

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改进实验教学方法,提高教学质量 被引量：6

3

作者 张敬如 张锡林 段建华 《四川动物》 CSCD 2003年第2期128-128,共1页

关键词 实验教学 教学质量 教学方法 人体寄生虫学

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大劣按蚊丝氨酸蛋白酶cDNA克隆和表达 被引量：2

4

作者 徐文岳 黄复生 +1 位作者 夏莉莎 段建华 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期92-95,共4页

目的　克隆、表达大劣按蚊丝氨酸蛋白酶。方法　根据已报道昆虫的前酚氧化酶激活酶 (prophenoloxidase -acti vatingenzyme,PPAE)的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板 ,进行RT -PCR扩增 ,克隆和测定插入片段 ;所... 目的　克隆、表达大劣按蚊丝氨酸蛋白酶。方法　根据已报道昆虫的前酚氧化酶激活酶 (prophenoloxidase -acti vatingenzyme,PPAE)的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板 ,进行RT -PCR扩增 ,克隆和测定插入片段 ;所得序列进行BLAST查询 ,并原核表达其中的两种PPAE样丝氨酸蛋白酶cDNA ,通过SDS -PAGE和Westernblotting检测表达产物。结果和结论　获得了 3种大劣按蚊血细胞丝氨酸蛋白酶cDNA部分序列 ,即AdsP1(5 12bp) ,AdsP2(488bp)和AdsP3(5 12bp)。AdsP1和AdsP3与冈比亚按蚊sP14D1、sP14D2、3种昆虫PPAE和黑腹果蝇Easter很相似 ,推测AdsP1和AdsP3可能是大劣按蚊的PPAE ,起调节大劣按蚊黑化包裹约氏疟原虫反应的作用。另外 ,成功表达了AdsP1和Ad sP3部分cDNA序列。 展开更多

关键词 大劣按蚊 丝氨酸蛋白酶 CDNA克隆 表达

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大劣按蚊和斯氏按蚊核糖体基因内转录第二间隔区序列分析 被引量：2

5

作者 孙恩涛 张锡林 秦志辉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期445-448,452,共5页

目的分析对约氏疟原虫不易感的大劣按蚊和易感的斯氏按蚊核糖体基因内转录第二间隔区(rDNA ITS2)的基因特征。方法对大劣按蚊和斯氏按蚊ITS2基因进行PCR扩增,PCR产物进行限制性片断长度多态性分析(RFLP)和基因测序,并采用相关在线程序... 目的分析对约氏疟原虫不易感的大劣按蚊和易感的斯氏按蚊核糖体基因内转录第二间隔区(rDNA ITS2)的基因特征。方法对大劣按蚊和斯氏按蚊ITS2基因进行PCR扩增,PCR产物进行限制性片断长度多态性分析(RFLP)和基因测序,并采用相关在线程序及软件进行序列分析。测序结果与GenBank数据库中其它传疟按蚊的ITS2序列进行多序列比对,构建分子系统树。结果大劣按蚊和斯氏按蚊的ITS2基因PCR产物经限制性内切酶XhoI消化,产生不同的酶切图谱;测序结果表明大劣按蚊和斯氏按蚊ITS2序列分别为715bp和466bp,且两种按蚊ITS2序列的GC含量和简单重复序列等特征存在明显差异,两者碱基差异水平为53.5%;分子进化树显示,大劣按蚊和斯氏按蚊形成单独的支系。结论大劣按蚊和斯氏按蚊ITS2基因具有不同的基因特征,其遗传多态性可能与产生对约氏疟原虫的易感性不同有关,为进一步研究按蚊与疟原虫之间的相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 按蚊 疟原虫 遗传多态性 ITS2

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斯氏按蚊血细胞对约氏疟原虫卵囊黑化的影响 被引量：2

6

作者 时超美 黄复生 +1 位作者 段建华 况明书 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第1期16-20,共5页

目的　探讨斯氏按蚊血细胞及血细胞PPO对疟原虫卵囊黑化的影响。方法　利用电镜观察蚊血细胞在卵囊黑化中的作用、RT -PCR检测蚊血细胞、蚊胃中PPOmRNA的表达、原位杂交检测血细胞中PPOmRNA的表达。结果　通过RT -PCR和原位杂交 ,发现... 目的　探讨斯氏按蚊血细胞及血细胞PPO对疟原虫卵囊黑化的影响。方法　利用电镜观察蚊血细胞在卵囊黑化中的作用、RT -PCR检测蚊血细胞、蚊胃中PPOmRNA的表达、原位杂交检测血细胞中PPOmRNA的表达。结果　通过RT -PCR和原位杂交 ,发现斯氏按蚊PPOmRNA在血细胞中有表达 ,颗粒细胞可能是其主要的表达细胞 ;硝喹可使约氏疟原虫卵囊发生退行性变 ,卵囊黑化比率明显增加。结论　说明血细胞能够合成PPO ,进一步证实了蚊血细胞 ,特别是硝喹对卵囊的发育有抑制和阻断作用时 ,颗粒细胞在疟原虫卵囊黑化中起重要作用。 展开更多

关键词 斯氏按蚊 约氏疟原虫 卵囊 黑化

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斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶差异表达与疟原虫卵囊黑化关系的研究 被引量：1

7

作者 杨松 黄复生 +1 位作者 况明书 段建华 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期307-310,共4页

目的　探讨斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶与疟原虫卵囊黑化的相互关系。方法　斯氏按蚊分吸糖水组、吸正常小白鼠血组、吸约氏疟原虫感染血组和吸硝喹糖水组 ,挤压法收集雌斯氏按蚊血淋巴 ,解剖后取吸硝喹糖水蚊第 1、2和 3天斯氏按蚊中肠 ... 目的　探讨斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶与疟原虫卵囊黑化的相互关系。方法　斯氏按蚊分吸糖水组、吸正常小白鼠血组、吸约氏疟原虫感染血组和吸硝喹糖水组 ,挤压法收集雌斯氏按蚊血淋巴 ,解剖后取吸硝喹糖水蚊第 1、2和 3天斯氏按蚊中肠 ,超声提取中肠蛋白 ,Bradford法检测血淋巴总蛋白浓度 ,继而对血淋巴和中肠蛋白进行SDS -PAGE ,Western印迹电转移后检测前酚氧化酶。结果　四组血淋巴前酚氧化酶和用药后中肠前酚氧化酶均呈现一条阳性蛋白带 ,分子量分别均约 6 6kDa,与吸糖水组比较 ,吸正常小白鼠血组血淋巴前酚氧化酶表达增强 ,而感染后血淋巴前酚氧化酶表显著增强。硝喹诱导黑化后血淋巴前酚氧化酶表达水平呈逐日下调趋势 ,而硝喹诱导黑化过程中中肠前酚氧化酶量逐渐增加。结论　斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶参与疟原虫卵囊黑化反应。 展开更多

关键词 斯氏按蚊 血淋巴 前酚氧化酶 差异表达 疟原虫 卵囊黑化

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约氏疟原虫子孢子胞内游离钙的检测方法研究 被引量：1

8

作者 张锡林 段建华 +1 位作者 况明书 黄复生 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第1期94-96,共3页

目的　研究疟原虫子孢子的胞内Ca2 + 的检测方法。方法　应用共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM )观察约氏疟原虫子孢子的胞内游离Ca2 + 分布、变化和检测的实验条件。结果　 3μmol/LFluo - 3/Am同时加入 1μl/ml2 5 %PluronicF - 12 7在37... 目的　研究疟原虫子孢子的胞内Ca2 + 的检测方法。方法　应用共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM )观察约氏疟原虫子孢子的胞内游离Ca2 + 分布、变化和检测的实验条件。结果　 3μmol/LFluo - 3/Am同时加入 1μl/ml2 5 %PluronicF - 12 7在37℃恒温下 ,孵育分离的子孢子 6 0min即可达到最佳的负载效果。Fluo - 3/Am浓度的提高和孵育时间延长只能增加背景染色 ,若降低孵育浓度和缩短孵育时间则难以达到最佳的负载效果。静息时子孢子胞内Ca2 + 分布均匀 ,均值为 71 2± 4 8nmol/L。结论　应用Fluo - 3/AM和PluronicF - 12 7结合CLSM技术是研究疟原虫子孢子胞浆内游离Ca2 + 的准确、灵敏的方法之一。 展开更多

关键词 约氏疟原虫 子孢子 胞内CA^2+ 共聚焦激扫描显微镜 CLSM 检测

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正常和病理骨髓基质细胞对K562细胞增殖和凋亡的影响 被引量：1

9

作者 邓均 周桃莉 +3 位作者 李招权 黄辉 陈晓莉 蒲晓允 《医学研究生学报》 CAS 2006年第9期777-779,共3页

目的:研究正常和病理骨髓基质细胞(BMSC)在与K562细胞接触和隔离培养条件下对该细胞株增殖与凋亡的影响。方法:将慢性髓细胞白血病(CML)患者和正常人BMSC各自分为单独培养的对照组、K562与BMSC直接接触的接触培养组和隔离培养组,分别于... 目的:研究正常和病理骨髓基质细胞(BMSC)在与K562细胞接触和隔离培养条件下对该细胞株增殖与凋亡的影响。方法:将慢性髓细胞白血病(CML)患者和正常人BMSC各自分为单独培养的对照组、K562与BMSC直接接触的接触培养组和隔离培养组,分别于第2、4、7和12 d观察K562细胞生长增殖情况;以末端标记技术(TUNEL)检测K562细胞的凋亡。结果:正常BMSC培养条件下与对照组比较,接触培养组和隔离培养组K562细胞数量在培养第4 d后显著升高(P<0.05),接触培养组显著快于隔离培养组(P<0.05);在CML BMSC培养条件下,K562的生长速度显著加快,4 d以后与对照组比较的差异有显著性意义(P<0.01)。K562细胞凋亡在正常BMSC培养条件下显著减少,隔离培养组在第7 d、接触培养组在第4 d与对照组比较的差异有显著性意义(P<0.05);在CML BMSC培养条件下,隔离培养组在4 d后、接触培养组在2 d后凋亡减少,与对照组比较差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:BMSC可通过间接因素(调节因子作用)保护K562细胞,直接接触因素(由黏附分子介导的直接作用)能加强这种保护作用,导致K562细胞生长增快,凋亡减少。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 K562细胞 凋亡

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按蚊TEP1基因的原核表达及鉴定

10

作者 张健 黄复生 +3 位作者 宋鹏 段建华 徐文岳 邱宗文 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1184-1186,共3页

目的原核表达斯氏按蚊TEP1蛋白。方法PCR方法从斯氏按蚊扩增TEP1基因,并插入原核表达载体pQE-80L,构建重组表达质粒pQE-80L/TEP1。转化DH5α菌,IPTG诱导表达融合蛋白及质谱鉴定。结果成功表达重组质粒,经过质谱鉴定为斯氏按蚊TEP1分子... 目的原核表达斯氏按蚊TEP1蛋白。方法PCR方法从斯氏按蚊扩增TEP1基因,并插入原核表达载体pQE-80L,构建重组表达质粒pQE-80L/TEP1。转化DH5α菌,IPTG诱导表达融合蛋白及质谱鉴定。结果成功表达重组质粒,经过质谱鉴定为斯氏按蚊TEP1分子。结论成功表达了按蚊TEP1蛋白为后续的抗体制备及TEP1功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 按蚊 含硫脂蛋白 原核表达 质谱

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约氏疟原虫感染后大劣按蚊血淋巴的初步分析

11

作者 王英 张锡林 +3 位作者 段建华 许颖 张健 黄复生 《四川动物》 CSCD 北大核心 2006年第1期185-186,共2页

关键词 大劣按蚊 血淋巴 SDS-PAGE电泳 BCA法

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共聚焦激光扫描显微镜对约氏疟原虫卵囊、子孢子胞内Ca^(2+)的检测方法研究

12

作者 张锡林 段建华 +2 位作者 王英 况明书 黄复生 《四川动物》 CSCD 2001年第3期115-118,共4页

本文报告建立用共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM)观察约氏疟原虫卵囊、子孢子胞内游离Ca2 + 的分布和实验检测方法。以荧光染料Fluo 3作胞内Ca2 + 指示剂 ,结果显示 3μ、 4μmol/LFluo 3/Am同时加入 1μl/ml 2 5 %PluronicF 12 7在 37℃恒... 本文报告建立用共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM)观察约氏疟原虫卵囊、子孢子胞内游离Ca2 + 的分布和实验检测方法。以荧光染料Fluo 3作胞内Ca2 + 指示剂 ,结果显示 3μ、 4μmol/LFluo 3/Am同时加入 1μl/ml 2 5 %PluronicF 12 7在 37℃恒温下 ,分别孵育分离的约氏疟原虫子孢子、卵囊 6 0min即可达到最佳的负载效果。Fluo 3/Am浓度的提高和孵育时间延长只能增加背景染色 ,若降低孵育浓度和缩短孵育时间则难于达到最佳的负载效果。子孢子胞内游离Ca2 + 分布均匀 ;而卵囊内游离Ca2 + 分布不均匀 ,成块状分布 ,囊壁无荧光。研究表明应用Fluo 3/AM和PluronicF 12 7结合CLSM技术是研究疟原虫卵囊、子孢子胞浆内游离Ca2 + 的准确。 展开更多

关键词 约氏疟原虫 卵囊 子孢子 CA^2+ 共聚焦激光扫描显微镜

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宁国有螺无病地区和芜湖有螺有病地区湖北钉螺基因组RF-RAPD序列分析

13

作者 孙恩涛 王英 张锡林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期351-357,共7页

目的比较分析不同血吸虫病流行区湖北钉螺基因组DNA的遗传多态性。方法采用RF-RAPD技术对安徽省宁国市有螺无病地区和芜湖市有螺有病地区的湖北钉螺基因组DNA进行分析,进而从其扩增的多态性图谱中选择相近迁移率的RF-RAPD序列进行克隆... 目的比较分析不同血吸虫病流行区湖北钉螺基因组DNA的遗传多态性。方法采用RF-RAPD技术对安徽省宁国市有螺无病地区和芜湖市有螺有病地区的湖北钉螺基因组DNA进行分析,进而从其扩增的多态性图谱中选择相近迁移率的RF-RAPD序列进行克隆、测序,采用DNAsis进行序列比较和转录因子的预测。结果两地区湖北钉螺基因组RF-RAPD谱带中有4对相近迁移率的条带,序列分析显示4对DNA条带在序列长度和碱基组成上存在差异,序列相似性介于48%～53%之间。利用DNAsis软件在两地湖北钉螺相近迁移率的DNA条带序列发现转录因子的种类及个数均具有明显的差异。结论不同日本血吸虫病流行区湖北钉螺基因组虽然在RF-RAPD带型上存在一定的相似,但相近RF-RAPD谱带在基因水平上存在明显的差异,此差异是否与湖北钉螺对日本血吸虫的遗传易感性相关,尚待进一步研究。 展开更多

关键词 湖北钉螺 日本血吸虫 遗传多态性 RF-RAPD

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斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平分析 被引量：1

14

作者 王曼 张锡林 +4 位作者 黄玉清 陈文碧 佘俊萍 向丽 王光西 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1187-1191,共5页

目的研究斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb(cytochrome B)基因在不同虫期的转录水平以更深入了解该吸虫的物质代谢途径,探索药物作用的药靶。方法分别提取斯氏狸殖吸虫5个虫期的总RNA,并反转录为cDNA。将目的基因质粒作为标准品制作标准曲线,以5... 目的研究斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb(cytochrome B)基因在不同虫期的转录水平以更深入了解该吸虫的物质代谢途径,探索药物作用的药靶。方法分别提取斯氏狸殖吸虫5个虫期的总RNA,并反转录为cDNA。将目的基因质粒作为标准品制作标准曲线,以5个虫期的cDNA为模板,特异引物为实验组引物,卫氏并殖吸虫的18SrDNA基因引物作为内参引物做实时荧光定量PCR,分析斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因分别在5个虫期的转录水平。结果标准曲线线性关系良好,回归系数γ=0.994。产物熔解曲线分析结果均显示为单一波峰。定量分析结果显示,斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb转录主要在囊蚴期、30d幼虫期及60d童虫期,并且是逐步升高趋势,但成虫期转录较少,虫卵期没有转录。结论斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平有差别,在60d童虫期高转录,提示Cytb基因在幼虫的发育和移行中起着重要作用。 展开更多

关键词 斯氏狸殖吸虫 线粒体Cytb基因 REALTIME PCR 转录水平

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约氏疟原虫红外期yir基因保守区的克隆、表达与表位分析

15

作者 吕杨 张锡林 段建华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期395-399,403,共6页

目的对红外期的yir基因进行克隆和表达,探讨疟原虫在红外期的抗原变异。方法针对yir基因家族的保守区设计特异引物,以约氏疟原虫BY265株红外期的mRNA为模板,进行RT-PCR扩增,克隆和测定插入片段,所得序列进行BLAST查询,证实其为yir基因,... 目的对红外期的yir基因进行克隆和表达,探讨疟原虫在红外期的抗原变异。方法针对yir基因家族的保守区设计特异引物,以约氏疟原虫BY265株红外期的mRNA为模板,进行RT-PCR扩增,克隆和测定插入片段,所得序列进行BLAST查询,证实其为yir基因,然后构建表达质粒pQE80L/YIR,并转染到宿主菌DH5α中,对获得的yir保守区进行原核表达,经IPTG诱导后,以SDS-PAGE和WesternBlotting检测表达产物。结果从红外期获得了yir基因的保守区cDNA序列,证实红外期存在yir基因的表达;成功构建了表达质粒pQE80L/YIR,对YIR蛋白的保守区片段进行了表达。结论约氏疟原虫红外期存在yir基因的表达,该基因与红外期抗原变异的关系有待进一步研究;约氏疟原虫红外期yir基因保守区原核表达的成功,为疟原虫的红外期阻断疫苗提供了研究基础。 展开更多

关键词 约氏疟原虫 yir基因 CDNA克隆 表达

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