目的观察青蒿素(artemisinin,ART)对脓毒症大鼠肺组织损伤的影响。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)制作大鼠脓毒症模型,动物分为正常对照组、CLP组和青蒿素治疗(ART)组,分别于CLP术后2、6、12、24、48、72h活...目的观察青蒿素(artemisinin,ART)对脓毒症大鼠肺组织损伤的影响。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)制作大鼠脓毒症模型,动物分为正常对照组、CLP组和青蒿素治疗(ART)组,分别于CLP术后2、6、12、24、48、72h活杀大鼠取肺组织,匀浆后动态浊度鲎试验法检测内毒素(lipopolysaccharide,LPS)水平,ELISA法检测TNF-α和IL-6的含量,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测肺组织TNF-α和IL-6 mRNA的表达,光镜下观察肺组织的病理改变。结果CLP术后,ART组大鼠肺组织匀浆LPS、TNF-α和IL-6含量较CLP组明显降低(P<0.05,P<0.01),TNF-α和IL-6 mRNA的表达也显著低于CLP组(P<0.05,P<0.01),24h肺组织的病理损伤明显减轻。结论青蒿素可能通过降低脓毒症大鼠肺组织局部的LPS水平,抑制和减少了TNF-α和IL-6等促炎细胞因子的表达和释放,进而减轻肺组织的损伤。展开更多
目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并...目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并在BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,W estern b lot对表达蛋白进行鉴定。用N i-NTA亲和柱对目的蛋白进行纯化,并通过细胞黏附与伸展实验对其生物学活性进行检测。结果成功克隆了hLNα4LG1的cDNA片段,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG1总蛋白中出现一条分子量为26×103的新蛋白带。与对照组相比,N i-NTA亲和层析纯化的目的蛋白有明显促进A549细胞伸展与黏附的作用。结论克隆并原核表达了hLNα4LG1蛋白,目的蛋白具有促进细胞黏附与伸展的活性,为深入研究hLNα4LG1的功能奠定了基础。展开更多
文摘目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并在BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,W estern b lot对表达蛋白进行鉴定。用N i-NTA亲和柱对目的蛋白进行纯化,并通过细胞黏附与伸展实验对其生物学活性进行检测。结果成功克隆了hLNα4LG1的cDNA片段,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG1总蛋白中出现一条分子量为26×103的新蛋白带。与对照组相比,N i-NTA亲和层析纯化的目的蛋白有明显促进A549细胞伸展与黏附的作用。结论克隆并原核表达了hLNα4LG1蛋白,目的蛋白具有促进细胞黏附与伸展的活性,为深入研究hLNα4LG1的功能奠定了基础。
