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题名基因捕获成体干细胞及鉴定的初步研究
被引量：2
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作者
王明科
邹仲敏
罗成基
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机构
第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室
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出处
《山西医科大学学报》
CAS
2008年第2期112-115,F0003,共5页
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基金
军队"十一五"归国人员基金资助项目(06H029)
国家重点基础研究发展规划资助项目(973项目)(2005CB522605)
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文摘
目的探讨基因捕获技术应用于成体干细胞的可行性。方法线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY,利用Lipofectamine2000转染包装细胞PA317,LacZ染色证明转染效率后,收集病毒上清,感染种植于24孔板的小鼠成肌干细胞系C2C12、人骨髓间充质干细胞(hBMSC)。为排除潮霉素B筛选的假阳性干细胞,以C2C12、hBMSC细胞基因组DNA为模板,PCR扩增ROSAFARY上LacZ部分序列(560 bp)进行鉴定。结果ROSAFARY脂质体转染PA317细胞后LacZ染色,400倍镜下可见2-5个蓝色细胞/视野。病毒上清感染种植于24孔板的C2C12和hBMSC,4 d后经LacZ染色,C2C12可见6个蓝色细胞/孔,400倍镜下hBMSC可见4-5个蓝色细胞/视野。最佳PCR鉴定参数为基因组模板量2μg,退火温度55.5℃,Mg2+浓度3 mmol/L。结论逆转录病毒基因捕获载体感染多种成体干细胞后LacZ染色显示可成功捕获激活状态启动子驱动的基因,为基因捕获应用于成体干细胞分化及恶性转化分子机制的研究奠定了基础。
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关键词
基因捕获
成体干细胞
聚合酶链反应
Β-半乳糖苷酶
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Keywords
gene trapping
adult stem cells
polymerase chain reaction
β-Gal
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分类号
R321
[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R329.2
[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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