TNP-470联合重组人内皮抑素抑制小鼠肺腺癌生长的研究 被引量：8

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作者 夏虎 骆利敏 +1 位作者 文金序 佟万成 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第2期79-83,共5页

目的 :观察TNP 4 70和重组人内皮抑素 (recombinanthumanendostatin ,rhES)联合治疗对小鼠肺腺癌LA795肿瘤生长的抑制作用。方法 :用甲醇诱导能高效分泌表达重组人内皮抑素 (rhES)的毕赤酵母菌株分泌表达rhES ,将皮下接种LA795肺腺癌细... 目的 :观察TNP 4 70和重组人内皮抑素 (recombinanthumanendostatin ,rhES)联合治疗对小鼠肺腺癌LA795肿瘤生长的抑制作用。方法 :用甲醇诱导能高效分泌表达重组人内皮抑素 (rhES)的毕赤酵母菌株分泌表达rhES ,将皮下接种LA795肺腺癌细胞的T739雄性近交系小鼠随机分成 3组 ,每组各 10只 ,分别给予PBS ,rhES及TNP 4 70 +rhES皮下注射 ,每日 1次 ,连续 14d ;观察各组小鼠肿瘤生长情况 ,游标卡尺测量肿瘤体积大小。断颈处死小鼠 ,原位肿瘤免疫组化观察肿瘤内部微血管密度 (microvesseldensity ,MVD)。结果 :经甲醇诱导 ,毕赤酵母重组菌分泌表达rhES ,并应用肝素亲和层析将其纯化 ;动物试验显示与PBS对照组比较 ,rhES治疗组及rhES +TNP 4 70治疗组均明显抑制小鼠肿瘤的生长 (P <0 .0 1) ,TNP 4 70 +rhES组与rhES组比较亦有显著性差异 (P <0 .0 1)。原位肿瘤免疫组化显示联合治疗组抑制血管生成更显著 (P <0 .0 1)。结论 :TNP 4 70联合rhES治疗对小鼠肺腺癌LA795生长的抑制效果比单独使用rhES的治疗效果更佳 ,具有良好的协同治疗作用。 展开更多

关键词 TNP-470 重组人内皮抑素 抑制 小鼠 肺腺癌 联合治疗

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乙型肝炎病毒多表位抗原DNA疫苗的免疫原性 被引量：5

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作者 骆利敏 李明 +3 位作者 夏虎 陈百虹 王萍 郝文波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期517-521,共5页

目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测... 目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测和淋巴细胞增殖试验 ,检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平 ,并观察其对免疫小鼠的毒副作用。结果 :用重组质粒pcDNA3.1/BPT免疫BALB/c小鼠后 ,在效靶比为 10 0∶1时 ,可诱导显著地特异性CTL应答 (P <0 .0 5 )。ELISA检测免疫小鼠血清特异性IgG的水平明显升高 (P <0 .0 5 )。在BPT基因原核表达蛋白的刺激下 ,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖显著 (P <0 .0 5 )。RT PCR分析表明 ,IL 12mRNA的水平亦明显升高。结论 :HBV多表位基因疫苗可诱发特异性免疫应答 ,为预防。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 多表位抗原 基因免疫 免疫应答

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抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ单链抗体库的构建及筛选 被引量：5

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作者 侯云霞 董文其 +3 位作者 徐伟文 王萍 陈白虹 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期241-244,共4页

目的构建抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRP-Ⅱ）单链抗体库，并筛选出阳性克隆。方 法用噬菌体抗体库技术构建抗恶性疟原虫ＨＲＰ－Ⅱ单链抗体库，并以ＨＲＰ－Ⅱ为靶抗原对该库进行了三轮“亲和吸附 一援... 目的构建抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRP-Ⅱ）单链抗体库，并筛选出阳性克隆。方 法用噬菌体抗体库技术构建抗恶性疟原虫ＨＲＰ－Ⅱ单链抗体库，并以ＨＲＰ－Ⅱ为靶抗原对该库进行了三轮“亲和吸附 一援救一感染扩增”的富集，挑取单菌落筛选并鉴定阳性克隆。结果获得目的基因并成功构建抗恶性疟原虫 ＨＲＰ－Ⅱ的 单链抗体库，库容为 １０６，并从中筛选出８株阳性克隆。结论 噬菌体抗体库技术具有高效的筛选性能，抗 ＨＲＰ－Ⅱ单链 抗体的制备为其在恶性疟的免疫快速诊断方法中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 恶性疟原虫 富含组氨酸蛋白Ⅱ

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噬菌体抗体库技术应用中的几个问题及其对策 被引量：5

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作者 侯云霞 董文其 王萍 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第4期366-368,共3页

噬菌体抗体库技术已广泛应用于抗体工程研究领域,但在几个主要环节中(如构建、筛选及表达)仍存在一些尚待解决的具体问题,本文旨在探讨所遇问题及其解决方案。

关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 构建 筛选

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恶性疟原由海南株cDNA克隆FMPf01分析 被引量：2

5

作者 王萍 李明 +5 位作者 谢毅 王燕妮 毕惠祥 殷明 叶韫辉 李英杰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第3期40-42,53,共4页

目的对我室构建恶性疟原虫海南株（FCC／HN）红内期cDNA表达文库阳性克隆（FMPf01）进行分析研究，确定其性质。方法通过计算机软件和免疫印迹法分析FMU01的减基构成、同源性及编码多肽的免疫反应性。结果核苷酸序列分析显示其A＋T构成... 目的对我室构建恶性疟原虫海南株（FCC／HN）红内期cDNA表达文库阳性克隆（FMPf01）进行分析研究，确定其性质。方法通过计算机软件和免疫印迹法分析FMU01的减基构成、同源性及编码多肽的免疫反应性。结果核苷酸序列分析显示其A＋T构成比高于G＋C，为3．14：1，与基因资料库中疟原虫基因的同源性较低，其最高值为63．8％，Westernblot分析证实其编码多肽可被抗疟原虫免疫血清识别，反应性较强。结论FMPf01编码多肽有望成为疟疾免疫学诊断和疫苗的候选抗原。 展开更多

关键词 疟疾 恶性疟 CDNA 疟原虫 克隆 序列分析

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恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)乳酸脱氢酶基因的分子克隆及序列分析 被引量：2

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作者 吴英松 李明 +1 位作者 董文其 李英杰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第1期44-47,共4页

目的　了解恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)乳酸脱氢酶基因全编码区核苷酸序列变异情况。方法　PCR扩增恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)LDH基因全编码区 ,产物经EcoRⅠ +SalⅠ酶切后 ,定向克隆至pGEX - 4T - 1表达质粒 ,采用Sanger双脱氧链末端... 目的　了解恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)乳酸脱氢酶基因全编码区核苷酸序列变异情况。方法　PCR扩增恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)LDH基因全编码区 ,产物经EcoRⅠ +SalⅠ酶切后 ,定向克隆至pGEX - 4T - 1表达质粒 ,采用Sanger双脱氧链末端终止法测序 ,与其它生物LDH进行同源性分析。 结果　成功地扩增了恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)LDH编码基因 ,大小为 95 1bp ,无内含子 ,与Honduras株LDH基因相比 ,两者有 5个碱基不同 ,推导的氨基酸序列有 4个氨基酸残基不同 ,与刚地弓形虫、隐孢子虫和芽孢杆菌的同源性分别为 49.0 6 % (15 6 / 318)、42 .5 8% (132 / 310 )、31.6 1% (98/310 )。与人的LDH -A、LDH -B和LDH -C的同源性分别为 30 .19% (93/ 30 8)、2 9.5 5 % (91/ 30 8)和 33.44 % (10 4/ 311)。结论　FCC1/HN株与Honduras株LDH高度同源 。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 乳酸脱氢酶 序列 分子克隆

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稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株的筛选与鉴定 被引量：2

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作者 田泽维 董文其 刘朝霞 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第11期1174-1176,1180,共4页

目的建立稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株。方法将以HBV多表位复合基因取代脊区基因的杂合HBc真核表达质粒转染NS-1细胞,经G418及亚克隆筛选高表达阳性细胞株,并以RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blottin... 目的建立稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株。方法将以HBV多表位复合基因取代脊区基因的杂合HBc真核表达质粒转染NS-1细胞,经G418及亚克隆筛选高表达阳性细胞株,并以RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测、鉴定重组细胞表达产物。结果筛选所得稳定表达细胞株经RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测均呈阳性反应,而阴性对照及空白对照未出现相应阳性反应。结论筛选获得稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组细胞株,命名为NS/HBc-Mep。为建立HBc-Mep特异的cELISA及CTL活性测定等实验方法提供可靠的靶细胞。 展开更多

关键词 重组NS-1细胞株 筛选 鉴定 乙型肝炎病毒核心抗原 多表位复合基因 杂合HBc颗粒

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间日疟原虫荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立 被引量：1

8

作者 江晓玲 李明 +2 位作者 徐伟文 毕惠祥 程钢 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期80-82,共3页

目的　建立间日疟原虫荧光定量聚合酶链式反应 (FQ -PCR)检测方法 ,为快速、准确定量检测间日疟原虫奠定基础。方法　根据间日疟原虫SSURNA基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针 ,将PCR扩增的间日疟原虫SSURNA基因片段克隆入载体 ,... 目的　建立间日疟原虫荧光定量聚合酶链式反应 (FQ -PCR)检测方法 ,为快速、准确定量检测间日疟原虫奠定基础。方法　根据间日疟原虫SSURNA基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针 ,将PCR扩增的间日疟原虫SSURNA基因片段克隆入载体 ,对重组质粒进行筛选、鉴定后 ,作为阳性模板 ,用于标准曲线的判定和样品检测。结果　应用重组质粒制作的定量曲线 ,循环阈值与模板浓度具有良好的线形关系 ,12 7份疟区血样和 30份正常血样的检测 ,显示此法有较高的灵敏度和特异度 ,定量检测结果与镜检感染率呈直线相关 ,相关系数为 0 95 9。 展开更多

关键词 荧光定量 PCR 间日疟原虫 小亚单位核糖体核糖核酸 聚合酶链反应 疟疾

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恶性疟原虫乳酸脱氢酶活性测定及在药物疗效监测方面的初步观察 被引量：1

9

作者 吴英松 李明 +2 位作者 陆家海 毕惠祥 李英杰 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第1期25-27,共3页

目的探讨疟原虫乳酸脱氢酶(Plasmodiumlactate dehydrogenase,pLDH)活性与原虫密度、培养时间的关系,以及在监测药物疗效等方面的作用.方法利用酶比色法对不同原虫密度、不同培养时间以及药物治疗前后患者的血样进行pLDH活性检测.结果p... 目的探讨疟原虫乳酸脱氢酶(Plasmodiumlactate dehydrogenase,pLDH)活性与原虫密度、培养时间的关系,以及在监测药物疗效等方面的作用.方法利用酶比色法对不同原虫密度、不同培养时间以及药物治疗前后患者的血样进行pLDH活性检测.结果pLDH的活性随恶性疟原虫感染率的提高、培养时间的增加而明显地升高,最大活性是在虫体培养36～48 h之间,虫体主要处在裂殖体期和滋养体期;混合感染(恶性疟原虫和间日疟原虫)患者经药物治疗后血液中pLDH活性明显降低,治疗5 d后已检测不到pLDH的活性.结论pLDH活性检测对于疟原虫克隆株鉴定、药物的疗效监测等方面具有一定的应用价值. 展开更多

关键词 恶性疟原虫 乳酸脱氢酶 活性测定

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科技发展与社会需求——抗体工程发展进程的启示 被引量：1

10

作者 徐伟文 《医学与哲学》 1999年第12期40-42,共3页

关键词 抗体工程 发展 科技发展 社会需求

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抗恶性疟原虫HRP-II单链抗体的筛选与特性分析

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作者 侯云霞 董文其 +5 位作者 王萍 陈白虹 高洋 吴英松 郝文波 李明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期486-488,490,共4页

目的　筛选抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白 2 (HRP II)单链抗体 (ScFv)并对其进行鉴定。方法从抗恶性疟原虫HRP IIScFv库中 ,挑取单菌落鉴定重组噬粒 ,采用ELISA法筛选能与重组抗原HRP II结合的阳性克隆 ,并选其中 2株强阳性克隆进行序列... 目的　筛选抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白 2 (HRP II)单链抗体 (ScFv)并对其进行鉴定。方法从抗恶性疟原虫HRP IIScFv库中 ,挑取单菌落鉴定重组噬粒 ,采用ELISA法筛选能与重组抗原HRP II结合的阳性克隆 ,并选其中 2株强阳性克隆进行序列分析。结果筛选到 8株具有HRP II结合活性的阳性克隆 ,所测 2株克隆的基因序列一致 ,其重链及轻链分别属于鼠抗体基因家族中第I及κVI亚群。结论从抗体库中成功地筛选出阳性克隆 。 展开更多

关键词 筛选 噬菌体抗体库 单链抗体 恶性疟原虫 富含组氨酸蛋白2

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抗恶性疟HRP-11单链抗体的筛选和鉴定(英文)

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作者 徐伟文 董文其 +3 位作者 李明 毕惠祥 陈白虹 王萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期185-188,共4页

目的　研究开发简便、快速和有效的疟疾诊断技术。方法　利用噬菌体抗体库技术 ,在构建抗恶性疟原虫红内期噬菌体抗体库的基础上 ,经 3轮“吸附 -洗脱 -扩增”的富集反应后 ,筛选抗HRPII阳性克隆株并进行可溶性诱导表达 ,最后用ELISA和W... 目的　研究开发简便、快速和有效的疟疾诊断技术。方法　利用噬菌体抗体库技术 ,在构建抗恶性疟原虫红内期噬菌体抗体库的基础上 ,经 3轮“吸附 -洗脱 -扩增”的富集反应后 ,筛选抗HRPII阳性克隆株并进行可溶性诱导表达 ,最后用ELISA和Westernblot等进行鉴定。结果　筛选出 6株抗HRPII阳性克隆株 ,表达的单链抗体Mr 为 310 0 0左右 ,能与HRPII抗原起特异性结合反应。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 富组胺酸蛋白 恶性疟

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抗恶性疟SERA噬菌体抗体库的构建及单链抗体的筛选与鉴定(英文)

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作者 徐伟文 李文全 +2 位作者 李明 毕惠祥 Toshihiro Horii 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期58-62,共5页

目的 研制用于疟疾简便、快速诊断试剂盒的试剂。方法 利用噬菌体抗体库技术，构建抗恶性疟原虫丝氨酸重复抗原（ＳＥＲＡ）的噬菌体抗体库。经３轮“吸附－洗脱－扩增”的富集反应后，从中筛选抗ＳＥＲＡ的阳性克隆株，并进行可溶性诱... 目的 研制用于疟疾简便、快速诊断试剂盒的试剂。方法 利用噬菌体抗体库技术，构建抗恶性疟原虫丝氨酸重复抗原（ＳＥＲＡ）的噬菌体抗体库。经３轮“吸附－洗脱－扩增”的富集反应后，从中筛选抗ＳＥＲＡ的阳性克隆株，并进行可溶性诱导表达，最后用ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ等进行鉴定。结果 成功地构建了中等库容的噬菌体抗体库，并从中筛选到９株抗ＳＥＲＡ的阳性克隆株，表达的单链抗体的相对分子质量大小约为３１ｋＤａ，能与 ＳＥ４７＇抗原起特异性结合反应。结论 成功地构建了抗ＳＥ４７＇的噬菌体抗体库，从中筛选制备的单链抗体为研制疟疾快速诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 丝氨酸重复抗原 SERA 恶性疟

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MHCⅠ类基因逆转录病毒表达载体的构建及其在造血细胞中的表达

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作者 吴岚晓 郭坤元 +2 位作者 李江琪 李玉华 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第12期1076-1078,共3页

目的构建BALB/c小鼠MHCⅠ类基因的逆转录病毒表达载体并探讨该基因在C57BL/6小鼠造血细胞中的表达。方法由逆转录病毒载体pMSCV介导,将BALB/c小鼠的H-2Dd基因导入C57BL/6小鼠的造血细胞中,并用逆转录聚合酶链反应和流式细胞仪检测转染... 目的构建BALB/c小鼠MHCⅠ类基因的逆转录病毒表达载体并探讨该基因在C57BL/6小鼠造血细胞中的表达。方法由逆转录病毒载体pMSCV介导,将BALB/c小鼠的H-2Dd基因导入C57BL/6小鼠的造血细胞中,并用逆转录聚合酶链反应和流式细胞仪检测转染后基因的表达。结果用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定证实,H2Dd基因正确插入载体pMSCV。重组逆转录病毒感染的C57BL/6小鼠造血细胞整合了BALB/c小鼠的H2Dd基因,且能转录为mRNA,在其细胞膜上有H2Dd分子的表达。结论成功构建小鼠H-2Dd编码基因的逆转录病毒载体,该基因已稳定地整合进C57BL/6小鼠造血细胞的基因组内,且在细胞中得到表达。 展开更多

关键词 MHC I类基因 逆转录病毒表达载体 造血细胞 基因表达 移植免疫学

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