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应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库
被引量：
1
1
作者
徐劲松
蔡绍曦
+3 位作者
邹飞
佟万成
万为人
赵海金
《实用医学杂志》
CAS
2004年第8期857-860,共4页
目的 :构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法 :采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料 ,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ...
目的 :构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法 :采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料 ,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选 ,随机挑取 10 0个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。结果 :扩增消减cDNA文库获得 3 0 0余个白色阳性克隆 ,随机挑取10 0个白色克隆用PCR进行扩增 ,90 %的克隆中均有 2 0 0～ 60 0bp的插入片段 ,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段。结论 :用SSH法及T/A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库 ,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选。
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关键词
抑制消减杂交技术
哮喘
嗜酸细胞
差异表达
基因消减
eDNA文库
SSH
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职称材料
题名
应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库
被引量：
1
1
作者
徐劲松
蔡绍曦
邹飞
佟万成
万为人
赵海金
机构
第一军医大学
南方医院呼吸科
第一军医大学热带卫生医学系
出处
《实用医学杂志》
CAS
2004年第8期857-860,共4页
基金
国家自然科学基金项目 (30 2 70 593)
广东省自然科学基金项目 (A0 0 1 0 31 )
文摘
目的 :构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法 :采用新近建立的抑制消减杂交方法 ,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料 ,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段 ,将其与T载体进行T/A连接构建文库 ,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选 ,随机挑取 10 0个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。结果 :扩增消减cDNA文库获得 3 0 0余个白色阳性克隆 ,随机挑取10 0个白色克隆用PCR进行扩增 ,90 %的克隆中均有 2 0 0～ 60 0bp的插入片段 ,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段。结论 :用SSH法及T/A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库 ,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选。
关键词
抑制消减杂交技术
哮喘
嗜酸细胞
差异表达
基因消减
eDNA文库
SSH
Keywords
Asthma Eosinophil Gene library Suppressed subtractive hybridization
分类号
R562.25 [医药卫生—呼吸系统]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库
徐劲松
蔡绍曦
邹飞
佟万成
万为人
赵海金
《实用医学杂志》
CAS
2004
1
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