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简化的差示PCR技术在伯氏疟原虫氯喹抗性基因分离中的应用 被引量:2
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作者 严继舟 宋关鸿 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第6期13-16,共4页
目的 为探察伯氏疟原虫氯喹抗性株 (RC株 )和敏感株 (N株 )的遗传学差异。方法 先维持对 RC株连续大剂量氯喹治疗 (5 0 m g/ (kg.d) ,再通过简化逆转录差示多聚酶链反应技术 (s DDRT- PCR)寻找 RC株和 N株疟原虫 c DNA差异片段并对所... 目的 为探察伯氏疟原虫氯喹抗性株 (RC株 )和敏感株 (N株 )的遗传学差异。方法 先维持对 RC株连续大剂量氯喹治疗 (5 0 m g/ (kg.d) ,再通过简化逆转录差示多聚酶链反应技术 (s DDRT- PCR)寻找 RC株和 N株疟原虫 c DNA差异片段并对所产生的可疑差异片段进行反复的 DNA回收和 PCR鉴定 ,然后选其肯定的差异片段 (N2 5 和 R2 5 )作克隆测序和序列分析及同源性检索。结果 尽管差异片段 N2 5 和 R2 5 的克隆分子 N2 5 2 和 R2 5 1 的 DNA序列相同性为 99.8% ,但由于多点突变导致它们的编码氨基酸及其模拟二级结构出现很大差异。BL AST(2 .0 6 )检索未能在基因库中发现与 R2 5 1 和 N2 5 2 相似的基因序列 ,不过它们的部分核苷酸序列 (从 12 8nt到 189nt)与褐鼠磷脂酶 Bm RNA部分序列 (从 10 5 3nt到 1114nt)具有高度同源性 :在 R2 5 1 和N2 5 2 分别为 93.5 %和 91.9%。结论 简化的差示 PCR技术结合差异片段的反复验证和序列分析可用于氯喹抗性相关基因的分离。 展开更多
关键词 伯氏疟原虫 氯喹抗性 差示PCR 磷脂酶 基因分离
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