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可溶性HLA-A2-肽组装复合物的研制及初步鉴定
1
作者
孟晓静
林来兴妹
+2 位作者
孟民杰
胡志明
王小宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期538-540,共3页
目的:诱导表达HLA-A2的两个亚基-重链(HC)和轻链β2m,并将其纯化产物和特异性肽段结合为HLA-A2-肽复合体。方法:将HC工程菌和β2m工程菌经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h。经超声破菌及专利技术处理获得精制包涵体,再复性、 超滤浓缩后,用DEAE ...
目的:诱导表达HLA-A2的两个亚基-重链(HC)和轻链β2m,并将其纯化产物和特异性肽段结合为HLA-A2-肽复合体。方法:将HC工程菌和β2m工程菌经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h。经超声破菌及专利技术处理获得精制包涵体,再复性、 超滤浓缩后,用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进行纯化。然后,将HC、β2m与两条特异性肽段分别结合,用Superdex 75凝胶过滤纯化,并用其天然结构的单克隆抗体(mAb)W6/32进行初步鉴定。结果:HC工程菌和β2m工程菌诱导表达的水平分别为43％和47％,HC和β2m纯化后的纯度均达到95％。两条特异性肽段与HC和β2m可组装成HLA-A2-肽复合体,纯化的HLA-A2-肽复合物在4℃可保存2个月左右,并可与mAb W6/32特异性结合。结论:HLA-A2的HC工程菌和轻链β2m工程菌均具有较高的表达水平,与相应的特异性肽段可形成稳定的可溶性HLA-A2-肽复合物,为进一步研究细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的识别和应答奠定了基础。
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关键词
HLA—A2重链HC
Β2微球蛋白
HLA—A2—肽组装复合体
表达
纯化
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题名
可溶性HLA-A2-肽组装复合物的研制及初步鉴定
1
作者
孟晓静
林来兴妹
孟民杰
胡志明
王小宁
机构
第一军医大学热带军队卫生学系分子免疫学研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期538-540,共3页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助(No.2001AA215121)
文摘
目的:诱导表达HLA-A2的两个亚基-重链(HC)和轻链β2m,并将其纯化产物和特异性肽段结合为HLA-A2-肽复合体。方法:将HC工程菌和β2m工程菌经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h。经超声破菌及专利技术处理获得精制包涵体,再复性、 超滤浓缩后,用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进行纯化。然后,将HC、β2m与两条特异性肽段分别结合,用Superdex 75凝胶过滤纯化,并用其天然结构的单克隆抗体(mAb)W6/32进行初步鉴定。结果:HC工程菌和β2m工程菌诱导表达的水平分别为43％和47％,HC和β2m纯化后的纯度均达到95％。两条特异性肽段与HC和β2m可组装成HLA-A2-肽复合体,纯化的HLA-A2-肽复合物在4℃可保存2个月左右,并可与mAb W6/32特异性结合。结论:HLA-A2的HC工程菌和轻链β2m工程菌均具有较高的表达水平,与相应的特异性肽段可形成稳定的可溶性HLA-A2-肽复合物,为进一步研究细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的识别和应答奠定了基础。
关键词
HLA—A2重链HC
Β2微球蛋白
HLA—A2—肽组装复合体
表达
纯化
Keywords
HLA-A heavy chain
β2-microglobulin
HLA-A2- peptide complex
expression
purification
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
可溶性HLA-A2-肽组装复合物的研制及初步鉴定
孟晓静
林来兴妹
孟民杰
胡志明
王小宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
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