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mTLR-2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
被引量：
4
1
作者
赵文忠
江海燕
+2 位作者
刘艳君
朱平
富宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期488-490,共3页
目的 :克隆mTLR 2基因 ,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白。方法 :采用RT PCR从鼠肝脏中扩增mTLR 2全基因 ,并将其克隆到T载体中 ,测序验证。将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中 ,构建重组质粒 ,并转化毕赤酵母。重组酵母...
目的 :克隆mTLR 2基因 ,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白。方法 :采用RT PCR从鼠肝脏中扩增mTLR 2全基因 ,并将其克隆到T载体中 ,测序验证。将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中 ,构建重组质粒 ,并转化毕赤酵母。重组酵母以PCR、RT PCR验证 ,表达的重组蛋白用SDS PAGE和Westernblot进行分析。结果 :克隆了mTLR 2全基因(AY179346 ) ,与已发表的mTLR 2基因的同源性为 99.84 %。构建了重组表达质粒pPICZ mTLR 2。SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,在相对分子质量 (Mr)为约 970 0 0处出现 1条特异性蛋白带 ,且能与兔抗mTLR 2抗体发生反应。结论 :克隆了mTLR 2全基因 ,并在毕赤酵母中获得表达。
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关键词
mTLR-2
基因克隆
毕赤酵母
表达
在线阅读
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职称材料
HIV-1gp41 C-螺旋模拟位的筛选和鉴定
被引量：
2
2
作者
刘北一
朱平
+2 位作者
韩强涛
姜世勃
富宁
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第9期633-636,共4页
目的 :筛选可作为小分子先导化合物的HIV 1gp4 1C螺旋模拟位 ,为开发抗HIV 1早期感染的小分子药物奠定基础。方法 :以源于HIV 1gp4 1N端的肽N36为靶 ,对噬菌体环七肽库进行亲和筛选。利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析...
目的 :筛选可作为小分子先导化合物的HIV 1gp4 1C螺旋模拟位 ,为开发抗HIV 1早期感染的小分子药物奠定基础。方法 :以源于HIV 1gp4 1N端的肽N36为靶 ,对噬菌体环七肽库进行亲和筛选。利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果 :3轮筛选后随机挑取 2 6个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 16个克隆可与N36结合 ,将其中 10个克隆DNA测序并推导氨基酸序列 ,每一克隆至少含有 2个疏水氨基酸 ,其中 9个克隆均有WW ,7个克隆有WWH保守序列。挑选阳性噬菌体克隆No 8进一步鉴定 ,游离N36肽阻断No 8克隆与固相化N36结合 ,C34肽竞争抑制N36肽与No 8克隆结合 (IC50 为 12 5 μg ml)。 结论 :表达WW保守序列的肽模拟HIV 1gp4 1C螺旋与N螺旋结合 ,该结果为设计针对HIV介导融膜的抑制剂提供技术支持。
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关键词
HIV-1
GP41
N-螺旋
C-螺旋
模拟位
噬菌体肽库
在线阅读
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职称材料
HIV-1gp41核心结构模拟位的筛选与鉴定
被引量：
1
3
作者
刘北一
罗海波
+2 位作者
朱平
姜世勃
富宁
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第7期461-463,472,共4页
目的 :筛选并鉴定HIV 1gp4 1核心表位。方法 :用识别HIV 1gp4 1的构象特异性单克隆抗体NC 1筛选噬菌体12肽库 ,通过夹心ELISA、NC 1特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆 ,DNA序列分析阳性克隆。结果 :经 3轮筛选 ,随机挑取 ...
目的 :筛选并鉴定HIV 1gp4 1核心表位。方法 :用识别HIV 1gp4 1的构象特异性单克隆抗体NC 1筛选噬菌体12肽库 ,通过夹心ELISA、NC 1特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆 ,DNA序列分析阳性克隆。结果 :经 3轮筛选 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 10个克隆可与NC 1结合 ,DNA序列分析并推导氨基酸序列 ,共 5种序列 :HDVHHRWVYLLS、ITVNEWLYTSEQ、HGRSHGMFKPKR、MGPIARPHWHLN、DMYRSPRPKPDT。其中gp4 1N肽和C肽所形成的复合物可特异性阻断表达HDVHHRWVYLLS ,VNEWLYTSEQ和MGPIARPHWHLN的克隆与NC 1的结合。结论 :所得序列HDVHHR WVYLLS ,VNEWLYTSEQ及MGPIARPHWHLN模拟HIV 1gp4 1六螺旋束核心表位。
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关键词
HIV-1gp41
核心结构
模拟位
筛选
鉴定
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职称材料
题名
mTLR-2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
被引量：
4
1
作者
赵文忠
江海燕
刘艳君
朱平
富宁
机构
第一军医大学
基础
部
免疫
学
教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期488-490,共3页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助项目 (No.1 1 0 2 0 9 0 3 0 6)
文摘
目的 :克隆mTLR 2基因 ,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白。方法 :采用RT PCR从鼠肝脏中扩增mTLR 2全基因 ,并将其克隆到T载体中 ,测序验证。将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中 ,构建重组质粒 ,并转化毕赤酵母。重组酵母以PCR、RT PCR验证 ,表达的重组蛋白用SDS PAGE和Westernblot进行分析。结果 :克隆了mTLR 2全基因(AY179346 ) ,与已发表的mTLR 2基因的同源性为 99.84 %。构建了重组表达质粒pPICZ mTLR 2。SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,在相对分子质量 (Mr)为约 970 0 0处出现 1条特异性蛋白带 ,且能与兔抗mTLR 2抗体发生反应。结论 :克隆了mTLR 2全基因 ,并在毕赤酵母中获得表达。
关键词
mTLR-2
基因克隆
毕赤酵母
表达
Keywords
mTLR-2
gene cloning
Pichia pastroris
expression
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
HIV-1gp41 C-螺旋模拟位的筛选和鉴定
被引量：
2
2
作者
刘北一
朱平
韩强涛
姜世勃
富宁
机构
第一军医大学
基础
部
免疫
学
教研室
纽约血液中心LFK研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第9期633-636,共4页
基金
国家自然科学基金海外合作基金资助项目 ( 3 0 0 2 80 2 1)
文摘
目的 :筛选可作为小分子先导化合物的HIV 1gp4 1C螺旋模拟位 ,为开发抗HIV 1早期感染的小分子药物奠定基础。方法 :以源于HIV 1gp4 1N端的肽N36为靶 ,对噬菌体环七肽库进行亲和筛选。利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果 :3轮筛选后随机挑取 2 6个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 16个克隆可与N36结合 ,将其中 10个克隆DNA测序并推导氨基酸序列 ,每一克隆至少含有 2个疏水氨基酸 ,其中 9个克隆均有WW ,7个克隆有WWH保守序列。挑选阳性噬菌体克隆No 8进一步鉴定 ,游离N36肽阻断No 8克隆与固相化N36结合 ,C34肽竞争抑制N36肽与No 8克隆结合 (IC50 为 12 5 μg ml)。 结论 :表达WW保守序列的肽模拟HIV 1gp4 1C螺旋与N螺旋结合 ,该结果为设计针对HIV介导融膜的抑制剂提供技术支持。
关键词
HIV-1
GP41
N-螺旋
C-螺旋
模拟位
噬菌体肽库
Keywords
HIV-1 gp41
N-helix
C-helix
Mimotope
Phage display peptide library
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
在线阅读
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职称材料
题名
HIV-1gp41核心结构模拟位的筛选与鉴定
被引量：
1
3
作者
刘北一
罗海波
朱平
姜世勃
富宁
机构
第一军医大学基础部免疫教研室
纽约血液中心LFK研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第7期461-463,472,共4页
基金
国家自然科学基金海外基金项目 ( 3 0 0 2 80 2 1)
文摘
目的 :筛选并鉴定HIV 1gp4 1核心表位。方法 :用识别HIV 1gp4 1的构象特异性单克隆抗体NC 1筛选噬菌体12肽库 ,通过夹心ELISA、NC 1特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆 ,DNA序列分析阳性克隆。结果 :经 3轮筛选 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 10个克隆可与NC 1结合 ,DNA序列分析并推导氨基酸序列 ,共 5种序列 :HDVHHRWVYLLS、ITVNEWLYTSEQ、HGRSHGMFKPKR、MGPIARPHWHLN、DMYRSPRPKPDT。其中gp4 1N肽和C肽所形成的复合物可特异性阻断表达HDVHHRWVYLLS ,VNEWLYTSEQ和MGPIARPHWHLN的克隆与NC 1的结合。结论 :所得序列HDVHHR WVYLLS ,VNEWLYTSEQ及MGPIARPHWHLN模拟HIV 1gp4 1六螺旋束核心表位。
关键词
HIV-1gp41
核心结构
模拟位
筛选
鉴定
Keywords
HIV gp41
Six helix bundle
Core structure
Phage display peptide library
分类号
R392－33 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
mTLR-2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
赵文忠
江海燕
刘艳君
朱平
富宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
4
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职称材料
2
HIV-1gp41 C-螺旋模拟位的筛选和鉴定
刘北一
朱平
韩强涛
姜世勃
富宁
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
2
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职称材料
3
HIV-1gp41核心结构模拟位的筛选与鉴定
刘北一
罗海波
朱平
姜世勃
富宁
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
1
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