目的观察肝细胞癌(HCC)患者外周血CD100的变化,探讨CD100对HCC患者T淋巴细胞功能的调控作用。方法前瞻性选择2020年4月—2021年7月在空军军医大学第二附属医院就诊的HCC患者57例和对照者22例。采集抗凝外周血,分离血浆和外周血单个核细...目的观察肝细胞癌(HCC)患者外周血CD100的变化,探讨CD100对HCC患者T淋巴细胞功能的调控作用。方法前瞻性选择2020年4月—2021年7月在空军军医大学第二附属医院就诊的HCC患者57例和对照者22例。采集抗凝外周血,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附试验检测血浆可溶型CD100(sCD100)水平,流式细胞术检测CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞表面膜型CD100(mCD100)表达。使用重组人CD100刺激HCC患者PBMC,细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测不同类型辅助性T淋巴细胞(Th细胞)和杀伤性T淋巴细胞(Tc细胞)比例,酶联斑点吸附试验检测甲胎蛋白(AFP)特异性CD8^(+)T淋巴细胞分泌穿孔素和颗粒酶B水平。纯化HCC患者CD8^(+)T淋巴细胞,使用重组人CD100刺激后与HepG2细胞共培养,检测AFP特异性CD8^(+)T淋巴细胞诱导HepG2细胞死亡水平。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验;不符合正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验。结果HCC组血浆sCD100水平低于对照组[(2.73±0.58)ng/mL vs(3.33±0.84)ng/mL,t=3.584,P<0.001]。HCC组CD4^(+)T淋巴细胞中mCD100阳性细胞比例(55.57%±11.33%vs 43.67%±6.40%,t=4.636,P<0.001)和mCD100平均荧光强度(294.80±74.01 vs 255.00±74.01,t=2.126,P=0.037)均高于对照组。HCC组CD8^(+)T淋巴细胞中mCD100阳性细胞比例(48.65%±7.71%vs 41.74%±4.77%,t=3.914,P<0.001)和mCD100平均荧光强度(289.20±89.30 vs 246.10±60.73,t=2.082,P=0.041)亦均高于对照组。HCC患者PBMC增殖、T淋巴细胞比例在经CD100刺激和无CD100刺激之间差异无统计学意义(P值均>0.05)。经CD100刺激后,HCC患者PBMC中CD4^(+)IFNγ^(+)Th1细胞、CD4^(+)IL-17A+Th17细胞、CD4^(+)IL-22+Th22细胞、CD8^(+)IFNγ^(+)Tc1细胞比例均高于无CD100刺激(t值分别为2.608、5.663、4.113、4605,P值均<0.05),CD8^(+)IL-17A+Tc17细胞和CD8^(+)IL-22+Tc22细胞比例在经CD100刺激和无CD100刺激之间的差异无统计学意义(P值均>0.05)。HLA-A02限制性HCC患者的PBMC经CD100刺激后,AFP特异性CD8^(+)T淋巴细胞分泌穿孔素和颗粒酶B的细胞数量均高于无CD100刺激(t值分别为6.794、2.308,P值均<0.05)。CD100刺激后,AFP特异性CD8^(+)T淋巴细胞诱导HepG2细胞死亡的比例亦升高(P<0.05)。结论HCC患者中存在sCD100和T淋巴细胞中mCD100表达失衡,sCD100水平降低可能无法维持T淋巴细胞功能活性,造成HCC免疫耐受。展开更多
文摘目的观察肝细胞癌(HCC)患者外周血CD100的变化,探讨CD100对HCC患者T淋巴细胞功能的调控作用。方法前瞻性选择2020年4月—2021年7月在空军军医大学第二附属医院就诊的HCC患者57例和对照者22例。采集抗凝外周血,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附试验检测血浆可溶型CD100(sCD100)水平,流式细胞术检测CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞表面膜型CD100(mCD100)表达。使用重组人CD100刺激HCC患者PBMC,细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测不同类型辅助性T淋巴细胞(Th细胞)和杀伤性T淋巴细胞(Tc细胞)比例,酶联斑点吸附试验检测甲胎蛋白(AFP)特异性CD8^(+)T淋巴细胞分泌穿孔素和颗粒酶B水平。纯化HCC患者CD8^(+)T淋巴细胞,使用重组人CD100刺激后与HepG2细胞共培养,检测AFP特异性CD8^(+)T淋巴细胞诱导HepG2细胞死亡水平。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验;不符合正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验。结果HCC组血浆sCD100水平低于对照组[(2.73±0.58)ng/mL vs(3.33±0.84)ng/mL,t=3.584,P<0.001]。HCC组CD4^(+)T淋巴细胞中mCD100阳性细胞比例(55.57%±11.33%vs 43.67%±6.40%,t=4.636,P<0.001)和mCD100平均荧光强度(294.80±74.01 vs 255.00±74.01,t=2.126,P=0.037)均高于对照组。HCC组CD8^(+)T淋巴细胞中mCD100阳性细胞比例(48.65%±7.71%vs 41.74%±4.77%,t=3.914,P<0.001)和mCD100平均荧光强度(289.20±89.30 vs 246.10±60.73,t=2.082,P=0.041)亦均高于对照组。HCC患者PBMC增殖、T淋巴细胞比例在经CD100刺激和无CD100刺激之间差异无统计学意义(P值均>0.05)。经CD100刺激后,HCC患者PBMC中CD4^(+)IFNγ^(+)Th1细胞、CD4^(+)IL-17A+Th17细胞、CD4^(+)IL-22+Th22细胞、CD8^(+)IFNγ^(+)Tc1细胞比例均高于无CD100刺激(t值分别为2.608、5.663、4.113、4605,P值均<0.05),CD8^(+)IL-17A+Tc17细胞和CD8^(+)IL-22+Tc22细胞比例在经CD100刺激和无CD100刺激之间的差异无统计学意义(P值均>0.05)。HLA-A02限制性HCC患者的PBMC经CD100刺激后,AFP特异性CD8^(+)T淋巴细胞分泌穿孔素和颗粒酶B的细胞数量均高于无CD100刺激(t值分别为6.794、2.308,P值均<0.05)。CD100刺激后,AFP特异性CD8^(+)T淋巴细胞诱导HepG2细胞死亡的比例亦升高(P<0.05)。结论HCC患者中存在sCD100和T淋巴细胞中mCD100表达失衡,sCD100水平降低可能无法维持T淋巴细胞功能活性,造成HCC免疫耐受。
