目的:探讨Toll样受体-4(TLR-4)表达对树突状细胞(DC)表型及功能的影响及其机制。方法:以构建的含有TLR-4全基因序列的pc DNA3.1质粒载体为模板,通过m MESSAGE m MACHINE T7 Kit体外转录获得TLR-4 m RNA,并采用脂质体法将其转染健康人外...目的:探讨Toll样受体-4(TLR-4)表达对树突状细胞(DC)表型及功能的影响及其机制。方法:以构建的含有TLR-4全基因序列的pc DNA3.1质粒载体为模板,通过m MESSAGE m MACHINE T7 Kit体外转录获得TLR-4 m RNA,并采用脂质体法将其转染健康人外周血PBMC来源的DC,用流式细胞术检测鉴定转染后DC表面功能性分子的表达及DC体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分泌细胞因子的能力。结果:成功构建人TLR-4-pc DNA3.1质粒载体;体外扩增成功人TLR-4和EGFP m RNA片段。TLR-4 m RNA转染后的DC表面趋化因子CCR7及功能性分子HLA-DR的表达显著高于control m RNA转染DC、转染前成熟DC[CCR-7:(42.4±4.93)%vs(20.1±3.09)%、(17.1±4.33)%,P<0.05;HLA-DR:(62.1±7.23)%vs(17.7±6.01)%、(25.8±4.16)%,P<0.05],同时转染后的DC体外诱导CTL分泌IFN-γ细胞因子的能力强于control m RNA-DC、空载转染DC诱导的CTL及加入DC前CTL[(66.5±3.58)%vs(41.1±4.27)%、(37.9±2.96)%、(3.2±2.03)%,P<0.05]。结论:TLR-4 m RNA转染DC可显著增强DC的功能,提高了DC抗原提呈及诱导CTL的能力,为增强DC疫苗抗肿瘤效应提供实验依据。展开更多
文摘目的:探讨Toll样受体-4(TLR-4)表达对树突状细胞(DC)表型及功能的影响及其机制。方法:以构建的含有TLR-4全基因序列的pc DNA3.1质粒载体为模板,通过m MESSAGE m MACHINE T7 Kit体外转录获得TLR-4 m RNA,并采用脂质体法将其转染健康人外周血PBMC来源的DC,用流式细胞术检测鉴定转染后DC表面功能性分子的表达及DC体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分泌细胞因子的能力。结果:成功构建人TLR-4-pc DNA3.1质粒载体;体外扩增成功人TLR-4和EGFP m RNA片段。TLR-4 m RNA转染后的DC表面趋化因子CCR7及功能性分子HLA-DR的表达显著高于control m RNA转染DC、转染前成熟DC[CCR-7:(42.4±4.93)%vs(20.1±3.09)%、(17.1±4.33)%,P<0.05;HLA-DR:(62.1±7.23)%vs(17.7±6.01)%、(25.8±4.16)%,P<0.05],同时转染后的DC体外诱导CTL分泌IFN-γ细胞因子的能力强于control m RNA-DC、空载转染DC诱导的CTL及加入DC前CTL[(66.5±3.58)%vs(41.1±4.27)%、(37.9±2.96)%、(3.2±2.03)%,P<0.05]。结论:TLR-4 m RNA转染DC可显著增强DC的功能,提高了DC抗原提呈及诱导CTL的能力,为增强DC疫苗抗肿瘤效应提供实验依据。
