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HSP70-TKD诱导的NK细胞向肿瘤细胞迁移的实验研究 被引量:2
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作者 汪相如 陈蓉明 +2 位作者 龚福生 应敏刚 郑秋红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1123-1127,共5页
目的:研究HSP70-TKD诱导的自然杀伤细胞(NK)体外对细胞表面HSP70表达不同的胰腺癌细胞和结肠癌细胞的迁移作用差异。方法:用干细胞培养基富集人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)至第10天加入2μg/ml TKD,4 d... 目的:研究HSP70-TKD诱导的自然杀伤细胞(NK)体外对细胞表面HSP70表达不同的胰腺癌细胞和结肠癌细胞的迁移作用差异。方法:用干细胞培养基富集人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)至第10天加入2μg/ml TKD,4 d后用流式细胞仪检测NK细胞表面杀伤性受体CD94/NKG2C的表达情况;应用流式分选将胰腺癌细胞系Colo357和结肠癌细胞系CW2分为HSP70高表达细胞亚系Colo+、CW2+和HSP70低表达细胞亚系Colo-、CW2-;Transwell小室实验检测HSP70-TKD诱导的NK细胞对这4种细胞的迁移能力,MTT法检测HSP70-TKD诱导的NK细胞对这4种细胞的杀伤活性。结果:流式结果显示NK细胞在干细胞培养基中培养14天可大量增殖,细胞纯度最高达(92.50±1.25)%;经HSP70-TKD诱导后,NK细胞表面杀伤性受体CD94/NKG2C的表达明显增加;经流式分选后,Colo+、Colo-细胞表面HSP70的表达分别为(78.2±2.2)%和(27.3±1.2)%,而CW2+、CW2-细胞表面HSP70的表达分别为(91.1±2.5)%和(18.2±1.0)%;HSP70-TKD诱导的NK细胞对Colo+迁移率为(68.6±2.8)%,明显高于对Colo-的迁移率(22.8±1.5)%,NK细胞对CW+迁移率为(73.5±2.7)%,明显高于对CW2-的迁移率(18.2±1.3)%;HSP70-TKD诱导的NK细胞对Colo+、Colo-的杀伤活性有显著性差异,当效靶比为20∶1时,杀伤活性分别为(61.2±3.0)%、(24.5±1.5)%,NK对CW2+、CW2-的杀伤活性有显著性差异,当效靶比为20∶1时,杀伤活性分别为(63.8±3.2)%、(22.4±1.8)%。结论:HSP70-TKD诱导的NK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞,在体外易向HSP70表达阳性的肿瘤细胞迁移。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 HSP70-TKD NK细胞 迁移
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IL-21和CCL19修饰可提高NKP30 CAR-T细胞对肺癌的杀伤效率并促进其肿瘤浸润
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作者 周智锋 柳硕岩 +7 位作者 李洁羽 陈明秋 林辉 陈宇杰 陈伟杰 林军鹏 周航 郑庆丰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1926-1936,共11页
目的探讨细胞因子IL-21和趋化因子CCL19修饰的NKP30 CAR-T细胞是否增强对肺癌的杀伤和浸润作用。方法在NKP30 CAR基础上融合基因IL-21和CCL19构建IL-21-CCL19 NKP30 CAR;CAR-T细胞的培养使用CD3CD28单抗及细胞因子IL-2刺激;流式细胞术... 目的探讨细胞因子IL-21和趋化因子CCL19修饰的NKP30 CAR-T细胞是否增强对肺癌的杀伤和浸润作用。方法在NKP30 CAR基础上融合基因IL-21和CCL19构建IL-21-CCL19 NKP30 CAR;CAR-T细胞的培养使用CD3CD28单抗及细胞因子IL-2刺激;流式细胞术检测免疫细胞表型;迁移实验检测IL-21对免疫细胞的迁移作用;乳酸脱氢酶(LDH)及成球实验检测CAR-T细胞的杀伤及浸润能力;酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测IFN-γ的分泌数量;ELISA检测IL-21及CCL19的分泌情况;体内实验中,将肿瘤细胞显微注射到斑马鱼卵黄囊,构建斑马鱼移植瘤模型,24 h后将免疫细胞注射至同样部位,体式荧光显微镜拍摄荧光。结果NKP30配体(B7H6)在正常组织及血液细胞不表达,在肺癌细胞上高表达(90%以上)。IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞与NKP30 CAR-T细胞和常规T细胞相比,具有更强的增殖能力、迁移能力及中心记忆T细胞的形成(P<0.001),免疫抑制分子CTLA4与PD1显著降低(P<0.005),对肺癌细胞具有更强的杀伤能力(P<0.001),伴随IFN-γ数量明显增加(P<0.001)。IL-21-CCL19 CAR-T细胞杀伤肺癌细胞中产生大量细胞因子IL‑21(3152.33±526.74 pg/mL)和趋化因子CCL19(1853±211.95 pg/mL)。体内实验中,CAR-T细胞和普通T细胞比较,具有较强的杀伤能力和增殖能力,但2种CAR-T细胞无明显差异(P>0.05)。结论IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞更容易浸润到肿瘤内部,有效杀伤肿瘤细胞,同时产生更多的记忆T细胞。 展开更多
关键词 肺癌 NKP30 嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞 IL-21 CCL19
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Survivin表位肽诱导CTL免疫学效应及杀瘤效应研究 被引量:2
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作者 陈明水 陈强 +3 位作者 李洁羽 周智锋 陈淑萍 叶韵斌 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期693-698,共6页
目的:探讨Survivin HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位SV20-28、SV23-31、SV88-96、负载DC诱导CTL免疫学效应和杀瘤活性。方法:从外周血中分离PBMC诱导DC,用Survivin高亲和性SV20-28、中等亲和性SV23-31及低亲和性表位肽SV88-96负... 目的:探讨Survivin HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位SV20-28、SV23-31、SV88-96、负载DC诱导CTL免疫学效应和杀瘤活性。方法:从外周血中分离PBMC诱导DC,用Survivin高亲和性SV20-28、中等亲和性SV23-31及低亲和性表位肽SV88-96负载DC并诱导CTL;用酶联免疫斑点法(ELISPOT),检测CTL细胞IFN-γ的分泌情况;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测其对靶细胞的杀伤作用。结果:Survivin高亲和性表位SV20-28和中等亲和力表位SV23-31负载DC诱导的CTL能产生分泌IFN-γ细胞,在ELISPOT试验中效靶比为1∶1时产生的斑点数分别为183.42±16.07、76.08±8.42,显著高于阴性对照组斑点数,P<0.05;而低亲和力表位SV88-96诱导的CTL未能产生明显的IFN-γ分泌细胞。高亲和力及中等亲和力表位肽诱导的CTL能以MHCⅠ限制方式杀伤Survivin阳性细胞,在效靶比为50∶1、25∶1、12.5∶1时的杀伤率分别为(62.40±5.16)%、(44.0±2.32)%、(26.53±1.07)%和(33.42±4.76)%、(25.16±2.64)%、(15.83±1.57)%,显著高于阴性对照组:(5.59±0.16)%、(4.76.0±0.32)%、(2.93±0.07)%;而低亲和力表位肽SV88-96诱导的免疫细胞对靶细胞没有明显的杀伤作用。结论:Survivin表位肽负载DC可有效诱导出CTL,Survivin表位肽SV20-28、SV23-31可有效诱导CTL产生免疫反应,并能以MHCⅠ限制方式杀伤Survivin阳性细胞。 展开更多
关键词 表位 SURVIVIN 细胞毒性T淋巴细胞
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510.6nm绿色铜蒸气激光加血卟啉衍生物(HpD)对动物移植瘤杀伤作用的实验研究
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作者 张其忠 沐旭升 +6 位作者 林军 吴秀红 卢林 宋墨琴 蔡柏龄 林祥达 李锋 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期131-134,共4页
本文报告510.6nm绿色铜蒸气激光与HpD对动物移植瘤的杀伤作用.给带S_(180)和B_(16)—MB小鼠腹腔注射HpD50mg/kg,注后72小时,用510.6mm铜蒸气激光照射肿瘤,照后肿瘤体积和重量,均明显减少(P<0.01和<0.05),病理检查照区肿瘤均有坏死... 本文报告510.6nm绿色铜蒸气激光与HpD对动物移植瘤的杀伤作用.给带S_(180)和B_(16)—MB小鼠腹腔注射HpD50mg/kg,注后72小时,用510.6mm铜蒸气激光照射肿瘤,照后肿瘤体积和重量,均明显减少(P<0.01和<0.05),病理检查照区肿瘤均有坏死,深度为5.5~8.8mm,平均约7mm,单纯铜激光照射,肿瘤坏死深度最大达5mm.HpD组和非激光非HpD组无上述变化.HpD对小鼠B_(16)—MB生长抑制试验,未显示其本身抑制肿瘤生长的作用.本实验结果表明510.6nm铜激光对癌细胞杀伤作用是肯定的,可作为浅表癌肿PDT治疗的光源. 展开更多
关键词 铜蒸气激光 血卟啉衍生物 肿瘤
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Survivin HLA-A2^+高亲和性CTL表位的预测及鉴定 被引量:3
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作者 陈明水 陈强 +3 位作者 李洁羽 周智锋 陈淑萍 叶韵斌 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期227-231,共5页
目的:采用生物信息方法预测和鉴定survivin抗原HLA-A2+限制性CTL表位,为探索基于survivin的肿瘤免疫治疗奠定基础。方法:采用超基序法和量化基序法对靶抗原survivin HLA-A2+限制性CTL表位进行预测;选取得分>10的表位肽为候选对象,并... 目的:采用生物信息方法预测和鉴定survivin抗原HLA-A2+限制性CTL表位,为探索基于survivin的肿瘤免疫治疗奠定基础。方法:采用超基序法和量化基序法对靶抗原survivin HLA-A2+限制性CTL表位进行预测;选取得分>10的表位肽为候选对象,并进行人工合成。采用T2细胞,以HLA-A2结合实验和流式细胞术(FITC染色)检测候选CTL表位肽的结合亲和力[以荧光系数(fluorescence index,FI)表示];以HLA-A2解离实验和流式细胞术检测其结合稳定性[以复合物解离50%的时间DC50(dissociation complex50%)表示]。结果:预测到的候选survivinCTL表位肽分别是:20STFKNWPFL28(SV20-28)、23KNWPFLEGC31(SV23-31)、96LTLGEFLKL104(SV96-104)、6LPPAWQPFL14(SV6-14)、33CTPERMAEA41(SV33-41)、46CPTE-NEPDL54(SV46-54)、130KVRRAIEQL138(SV130-138)、37RMAEAGFIH45(SV37-45)、88SVKKQFEEL96(SV88-96)。亲和力分析显示:SV20-28、SV96-104、SV130-138、SV23-31的FI分别为8.61、6.88、5.89、3.81;SV33-41、SV6-14、SV46-54、SV37-45、SV88-96的FI分别为0.31、-0.29、-0.4、-0.16和-0.03;稳定性分析结果DC50为:SV20-28、SV96-104、SV130-138>8h;SV23-31为4~6h;SV6-14、SV33-41、SV88-96为2~4h;SV46-54、SV37-45为0~2h。结果提示,SV20-28、SV96-104、SV130-138为高亲和力表位肽,SV23-31为中等亲和力表位肽,SV33-41、SV6-14、SV46-54、SV37-45、SV88-96为低亲和力表位肽。结论:超基序法、量化基序法可快速有效地预测抗原表位,SV20-28、SV96-104、SV130-138有可能是survivin HLA-A2+CTL表位,可用于后续研究。 展开更多
关键词 SURVIVIN CTL表位 T2细胞 生物信息方法
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HSP70-TKD诱导的NK细胞对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用 被引量:1
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作者 陈蓉明 龚福生 +2 位作者 郑秋红 谢云青 应敏刚 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1605-1609,共5页
目的:研究HSP70-TKD诱导的自然杀伤细胞(NK)对胰腺癌原位移植模型的体内抗肿瘤作用。方法:用干细胞培养基富集人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)至第10天时,加入2μg/ml TKD,4 d后用流式细胞仪检测诱导后NK... 目的:研究HSP70-TKD诱导的自然杀伤细胞(NK)对胰腺癌原位移植模型的体内抗肿瘤作用。方法:用干细胞培养基富集人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)至第10天时,加入2μg/ml TKD,4 d后用流式细胞仪检测诱导后NK细胞表面杀伤性受体CD94/NKG2C的表达情况,MTT法测定诱导后NK细胞体外对细胞表面HSP70表达阳性的胰腺癌Colo357细胞的杀伤活性。在BALB/c裸鼠胰腺原位接种胰腺癌Colo357细胞至第15天时,尾静脉注射HSP70-TKD诱导的NK细胞,观察NK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。免疫组化染色检测NK细胞在胰腺癌组织的浸润情况。结果:NK细胞在干细胞培养基中可大量增殖,14 d时平均细胞纯度为(87.50±1.35)%。HSP70-TKD诱导的NK细胞其细胞表面CD94/NKG2C的表达明显增加,其平均荧光强度为(220.56±6.82),高于未诱导组的(68.72±1.85)。HSP70-TKD诱导的NK细胞对胰腺癌细胞Colo357有更强的杀伤活性,当效靶比为40∶1时杀伤率高达(68.72±2.55)%。体内实验表明,TKD诱导的NK细胞能显著抑制胰腺癌的生长,其抑瘤率可达(61.3±1.5)%,与对照组差异显著(P<0.01)。免疫组化染色表明IL-2和TKD同时诱导的NK细胞更易向胰腺癌组织浸润。结论:HSP70-TKD诱导的NK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞,具有较强的体外抗细胞表面HSP70表达阳性的胰腺癌细胞活性,具有明显的抑制胰腺肿瘤生长的作用。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 HSP70-TKD NK细胞 CD94 抗肿瘤
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癌细胞的质和量及其相互关系——兼与王金堂同志商榷
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作者 谢左孚 《医学与哲学(A)》 1992年第2期53-54,共2页
众所周知,癌细胞是正常细胞与致癌因子相互作用后自身异化的病态细胞。迄今为止,人们对癌细胞的质和量的研究成果蜚然,但对这两者之间的关系的研究却过少,这不能不说是一件非常遗憾的事。王金堂同志在这方面作了一些大胆的探索(见"... 众所周知,癌细胞是正常细胞与致癌因子相互作用后自身异化的病态细胞。迄今为止,人们对癌细胞的质和量的研究成果蜚然,但对这两者之间的关系的研究却过少,这不能不说是一件非常遗憾的事。王金堂同志在这方面作了一些大胆的探索(见"肿瘤的误解与批判",《医学与哲学》,1991年第9期),其精神难能可贵。 展开更多
关键词 医学与哲学 致癌因子 肿瘤干细胞 金堂 细胞癌变 细胞癌基因 免疫监视 肿瘤特异性抗原 抗原调变 癌基因表达
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