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融合抗氧化酶GS1XR对鼻咽上皮细胞的放射防护效应 被引量：1
1
作者 何火聪 韩亚南 +1 位作者 张紫怡 潘剑茹 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1116-1122,共7页
目的:本研究旨在探讨融合抗氧化酶GST-SOD1-X-R9(GS1XR)对正常鼻咽上皮细胞NP69的放射防护作用及其可能的机制。方法:培养NP69细胞,分为空白对照(Untr)组、EGFP-GS1组、EGFP-GS1R组和EGFP-GS1XR组,检测0.5 mg/mL不同融合抗氧化酶的跨膜... 目的:本研究旨在探讨融合抗氧化酶GST-SOD1-X-R9(GS1XR)对正常鼻咽上皮细胞NP69的放射防护作用及其可能的机制。方法:培养NP69细胞,分为空白对照(Untr)组、EGFP-GS1组、EGFP-GS1R组和EGFP-GS1XR组,检测0.5 mg/mL不同融合抗氧化酶的跨膜效应。用CCK-8法测定3种融合抗氧化酶在0~1 mg/mL质量浓度范围内的细胞毒性。以DCFH-DA荧光探针测定0~6 Gy X射线和不同剂量(0~1 mg/mL)GS1XR对NP69细胞内ROS水平的影响。进一步实验将NP69细胞分为Untr组、4 Gy X线单纯照射Ctrl组和照射前分别预处理GS1、GS1R、GS1XR及阿米福汀(AMFT,4μg/mL)组,检测细胞内ROS水平,流式细胞术检测细胞的凋亡率,用WB法检测Nrf2入核量、抗氧化基因GCLC以及抗凋亡因子Bcl-2和凋亡因子BAX的表达。结果:实验结果显示,EGFP-GS1不具备跨膜能力,而EGFP-GS1R和EGFP-GS1XR能够有效跨膜进入NP69细胞(P<0.0001)。经24 h处理后,3种融合抗氧化酶均使细胞活力保持在80%以上,其中GS1XR处理组的细胞活力维持在100%以上。4 Gy X射线照射显著增加细胞内ROS水平(P<0.01),GS1XR以剂量依赖方式清除辐射诱导的ROS。与Ctrl组相比,GS1XR显著降低受照细胞内的ROS水平(P<0.05),促进Nrf2的入核(P<0.01),上调抗氧化基因GCLC(P<0.0001),降低细胞的凋亡率(P<0.0001)和抗凋亡因子Bcl-2(P<0.001)的表达,并下调促凋亡因子BAX的表达(P<0.05)。GS1XR的整体保护作用与GS1R相似,且与阿米福汀效果相当。结论:融合抗氧化酶GS1XR对NP69细胞具有显著的放射防护效应,其机制可能与其可进入细胞清除受照细胞内ROS,激活Nrf2信号通路,并调节Bcl-2和BAX的表达有关,GS1XR有望成为一种新型的放射防护剂。 展开更多
关键词 放射防护 融合抗氧化酶 鼻咽上皮细胞
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氧化砷诱导人小细胞肺癌细胞凋亡的研究 被引量：2
2
作者 苏颖 沈世仁 +2 位作者 高频 邹长棪 陈增 《中国肺癌杂志》 CAS 2001年第6期440-443,共4页
目的　研究砷剂 (As2 O3 )对人小细胞肺癌细胞凋亡诱导作用以及干扰素 (IFNα 2b)对As2 O3 作用的影响。方法　采用DNA电泳、TUNEL原位末端标记和免疫细胞化学染色检测不同浓度As2 O3 作用不同时间对人小细胞肺癌细胞凋亡诱导作用及相... 目的　研究砷剂 (As2 O3 )对人小细胞肺癌细胞凋亡诱导作用以及干扰素 (IFNα 2b)对As2 O3 作用的影响。方法　采用DNA电泳、TUNEL原位末端标记和免疫细胞化学染色检测不同浓度As2 O3 作用不同时间对人小细胞肺癌细胞凋亡诱导作用及相关基因蛋白的表达。结果　在一定的浓度范围内 ,As2 O3 可诱导人小细胞肺癌细胞凋亡 ,并且随浓度的升高和作用时间的延长 ,凋亡细胞数增加 ,相关基因蛋白Bcl 2、PCNA表达降低。联合使用IFNα 2b可增强凋亡诱导作用。结论　As2 O3 可诱导人小细胞肺癌细胞凋亡 ,且与药物浓度和作用时间有关。IFNα 展开更多
关键词 肺肿瘤 细胞凋亡 氧化砷
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^3H—TdR放射自显影在人肝癌SMMC7721细胞药物敏感性试验中的应用
3
作者 沈世人 苏颖 +1 位作者 高频 张其忠 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1993年第11期809-812,共4页
用＾３Ｈ－ｄＲ掺入放射自显影法测定人肝癌ＳＭＭＣ７７２１细胞对抗癌药ＤＤＰ、ＡＤＭ、５－ＦＵ的浓度依赖性，三者均有良好的线性关系。ｒ〉ｒ．０５，ＩＣ５０分别为２．５４、１．２３、６９．７（μｇ／ｍｌ），而集落培养法，... 用＾３Ｈ－ｄＲ掺入放射自显影法测定人肝癌ＳＭＭＣ７７２１细胞对抗癌药ＤＤＰ、ＡＤＭ、５－ＦＵ的浓度依赖性，三者均有良好的线性关系。ｒ〉ｒ．０５，ＩＣ５０分别为２．５４、１．２３、６９．７（μｇ／ｍｌ），而集落培养法，除ＤＤＰｒ〉ｒ．０５外，ＡＤＭ、５－ＦＵ均相差不显著。从实验结果看，＾３Ｈ－ＴｄＲ放射自显影法的敏感性和重复性均优于集落培养法。 展开更多
关键词 癌细胞 集落培养 药敏试验 肝肿瘤
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口腔鳞癌中survivin、cyclinD1和p53基因的表达及其相关性 被引量：9
4
作者 林耿冰 贾静 +2 位作者 林李嵩 施斌 陈乃俊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1194-1195,1198,共3页
目的:探讨survivin、cyclinD1和p53基因蛋白在口腔鳞癌中的表达及其相互关系。方法:应用免疫组化SP法检测95例口腔鳞癌组织和50例正常口腔黏膜组织中survivin、cyclinD1和p53蛋白的表达。结果:survivin、cyclinD1和p53在口腔鳞癌与正常... 目的:探讨survivin、cyclinD1和p53基因蛋白在口腔鳞癌中的表达及其相互关系。方法:应用免疫组化SP法检测95例口腔鳞癌组织和50例正常口腔黏膜组织中survivin、cyclinD1和p53蛋白的表达。结果:survivin、cyclinD1和p53在口腔鳞癌与正常口腔黏膜组织之间的差异均有统计学意义(P<0.05);在口腔鳞癌中,Survivin和CyclinD1蛋白的过表达均与临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01),p53过表达与组织分化程度及临床分期有关(P<0.05或P<0.01);survivin的过表达与cyelin D1及p53蛋白表达均呈正相关(r=0.628,0.829),cyclin D1蛋白的过表达与p53蛋白表达也呈正相关。结论:survivin、cyclinD1和p53基因在口腔鳞癌的发生、发展中起着不同程度的作用,三者之间可能具有协同作用。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌:免疫组织化学 SURVIVIN CYCLIND1 P53
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蕲蛇蛇毒中一种新型自降解抗凝血酶AA-ACA-I的纯化和表征(英文) 被引量：1
5
作者 潘剑茹 何火聪 +3 位作者 周康靖 汪少芸 王中来 饶平凡 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期811-817,共7页
利用嗜硫色谱和POROSHQ20离子交换色谱从蕲蛇蛇毒中纯化得到一种新型P-Ⅲ型蛇毒金属蛋白酶(snake venom metalloproteases SVMP)AA-ACA-I.该酶经SDS-PAGE测得分子量为47.6kD,含有链内二硫键,加DTT处理后,分子量为50.8kD,中性糖含量为3.... 利用嗜硫色谱和POROSHQ20离子交换色谱从蕲蛇蛇毒中纯化得到一种新型P-Ⅲ型蛇毒金属蛋白酶(snake venom metalloproteases SVMP)AA-ACA-I.该酶经SDS-PAGE测得分子量为47.6kD,含有链内二硫键,加DTT处理后,分子量为50.8kD,中性糖含量为3.5%,具有出血毒性和抗凝血活性.在70℃和pH9.0条件下保温60min,该酶会自降解成分子量30kD左右的新蛋白,降解得到的新蛋白抗凝血活性高于原蛋白. 展开更多
关键词 蕲蛇蛇毒 抗凝血酶 自降解 纯化 表征
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TAT蛋白转导结构域介导融合蛋白在小鼠活体的跨膜递送作用 被引量：1
6
作者 刘树滔 何火聪 +3 位作者 陈菁 傅蓉 潘剑茹 饶平凡 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第6期463-466,I0003,I0004,共6页
目的探讨跨膜递送短肽——TAT蛋白转导结构域(简称TAT)介导的与其融合的活性蛋白在活体的跨膜递送作用。方法以融合蛋白GST-TAT-GFP,GST-GFP-TAT和GST-GFP为研究模型蛋白,不经过蛋白质的变性处理、直接通过向小鼠腹腔注射和皮肤涂抹这... 目的探讨跨膜递送短肽——TAT蛋白转导结构域(简称TAT)介导的与其融合的活性蛋白在活体的跨膜递送作用。方法以融合蛋白GST-TAT-GFP,GST-GFP-TAT和GST-GFP为研究模型蛋白,不经过蛋白质的变性处理、直接通过向小鼠腹腔注射和皮肤涂抹这两种含TAT的融合蛋白及作为对照的融合蛋白GST-GFP,一定时间作用后取体内器官和皮肤做冷冻切片,荧光显微镜检测这些融合蛋白的跨膜递送情况;并对分别融合在C端或者N端的TAT介导GFP在活体动物体内和皮肤的跨膜递送作用进行对比。结果腹腔注射实验结果表明,TAT可以介导不经过蛋白质的变性处理的融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT跨膜递送进入到小鼠的心脏、肝、肾、脾和肺,甚至脑组织;其中GST-GFP-TAT跨膜递送效率比GST-TAT-GFP更高。结构模拟分析提示GST-GFP-TAT与GST-TAT-GFP中的TAT的暴露情况不同可能是造成两种蛋白跨膜递送活性差异的重要因素。皮肤实验的结果则表明TAT不仅介导融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT进入小鼠表皮,而且使其进入小鼠皮肤的真皮层。结论 TAT可以跨膜递送不经过变性处理的融合蛋白进入小鼠皮肤和体内,递送效率可能与TAT的暴露程度相关;这些结果为在蛋白质疗法方面应用TAT提供了进一步的理论依据。 展开更多
关键词 TAT蛋白转导结构域 融合蛋白 跨膜递送 皮肤 器官
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TAT-ASPP2融合蛋白的制备及其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用
7
作者 何火聪 苏颖 +1 位作者 潘剑茹 黄争荣 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期42-45,共4页
目的:制备TAT-ASPP2融合蛋白,探讨其对人胶质瘤U-87MG细胞和U251细胞增殖的抑制作用。方法:设计TAT-ASPP2引物,应用IN-Fusion技术构建原核表达质粒pET-TAT-ASPP2,双酶切、DNA测序鉴定后转化大肠杆菌E.coliBL21,IPTG诱导TAT-ASPP2融合蛋... 目的:制备TAT-ASPP2融合蛋白,探讨其对人胶质瘤U-87MG细胞和U251细胞增殖的抑制作用。方法:设计TAT-ASPP2引物,应用IN-Fusion技术构建原核表达质粒pET-TAT-ASPP2,双酶切、DNA测序鉴定后转化大肠杆菌E.coliBL21,IPTG诱导TAT-ASPP2融合蛋白的表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定TAT-ASPP2融合蛋白。MTT法检测TAT-AS-PP2融合蛋白对U-87MG和U251细胞增殖的作用。结果:成功构建了原核表达质粒pET-TAT-ASPP2,转化E.coli BL21后成功表达TAT-ASPP2融合蛋白,其相对分子质量约为128000,并可被ASPP2特异性抗体所识别。TAT-ASPP2融合蛋白对U-87MG和U251细胞增殖的抑制率分别为(65.0±3.0)%和(64.7±2.5)%,而ASPP2蛋白则不能抑制U-87MG和U251细胞的增殖。结论:成功地克隆、表达及纯化TAT-ASPP2融合蛋白,该融合蛋白可抑制胶质瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 胶质瘤 TAT—ASPP2 融合蛋白 增殖
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支持向量机算法对鼻咽癌与正常鼻咽细胞株拉曼光谱分析 被引量：4
8
作者 孙磊 陈阳 +4 位作者 黄洋文 欧琳 苏颖 冯尚源 雷晋萍 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1566-1569,共4页
拉曼光谱技术在肿瘤与正常细胞株的鉴别方面有着广泛的应用。对一个已有的诊断模型进行可靠性验证是非常重要和有意义的工作。采用两种不同的支持向量机分类算法对鼻咽癌和正常鼻咽细胞株的拉曼光谱进行分析和识别,结果显示灵敏度和特... 拉曼光谱技术在肿瘤与正常细胞株的鉴别方面有着广泛的应用。对一个已有的诊断模型进行可靠性验证是非常重要和有意义的工作。采用两种不同的支持向量机分类算法对鼻咽癌和正常鼻咽细胞株的拉曼光谱进行分析和识别,结果显示灵敏度和特异性均在90%以上,并且与已知的相关线性判别分析结果一致。结论表明,两种支持向量机算法都能较好地对细胞株进行鉴别,同时也表明拉曼光谱技术结合相关统计分类算法的方法可以实现对肿瘤细胞的准确鉴别,这一结果将进一步证实拉曼光谱可以作为鼻咽癌诊断的一种方式。 展开更多
关键词 拉曼光谱 鼻咽癌 细胞 支持向量机 线性判别分析
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