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鸽微RNA病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 张靖鹏 陈翠腾 +5 位作者 林琳 付环茹 李兆龙 江斌 黄瑜 万春和 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期860-866,共7页
旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进... 旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其基因特征后,设计特异性实时荧光定量RT-PCR检测(RT-qPCR)引物组,建立检测PiMeV的RT-qPCR方法。结果显示:PiMeV-CHN001株3 C基因全长为591 bp,编码197个氨基酸,和其他2株野鸽源PiMeV(MeV-B1株和MeV-B2株)核苷酸相似性分别为89.5%和92.0%。建立的检测PiMeV的RT-qPCR方法的标准曲线Y轴截距为37.93,斜率为-3.335,相关系数为1.00,扩增效率为99.4%。特异性强,仅PiMeV出现特异性扩增信号和特异性峰值[Tm值为(81.69±0.22)℃],对鸽源禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、鸽源禽I型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type I,PPMV-1)、鸽输血传播病毒(pigeon torque teno virus,PTTV)、鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAd)及鸽圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)检测均未见特异性扩增信号;敏感性优,最低检测限为54.0拷贝·μL^(-1);重复性好,批内和批间变异系数均低于1.5%。用建立的检测方法对42份信鸽粪便样品进行检测,发现2份阳性样品(阳性率为4.76%)。本研究首次证实我国大陆地区信鸽中存在PiMeV,丰富了PiMeV宿主谱信息;建立的RT-qPCR方法为后续开展PiMeV流行病学研究提供支撑。 展开更多
关键词 信鸽 鸽微RNA病毒 3 C基因 序列分析 实时荧光定量RT-PCR方法
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鸭巴泰病毒一步法RT-PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 傅光华 陈翠腾 +6 位作者 傅秋玲 刘荣昌 程龙飞 施少华 万春和 陈红梅 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2017年第11期1193-1196,共4页
为建立鸭巴泰病毒(Batai virus,BATV)的快速检测方法,本研究基于该病毒囊膜蛋白(M)基因序列的保守区域,经优化反应条件,对检测方法的特异性、敏感性及重复性进行了测定,建立了一种用于检测BATV的一步法RT-PCR快速诊断方法。所建立的检... 为建立鸭巴泰病毒(Batai virus,BATV)的快速检测方法,本研究基于该病毒囊膜蛋白(M)基因序列的保守区域,经优化反应条件,对检测方法的特异性、敏感性及重复性进行了测定,建立了一种用于检测BATV的一步法RT-PCR快速诊断方法。所建立的检测方法可特异性扩增出BATV M基因480bp的序列片段,其最低检测病毒量为1×10^(1.1) TCID_(50),且重复性好,对禽坦布苏病毒、鸭甲肝病毒等5种鸭常见传染病病原均未扩增出相应的片段,特异性好。以上结果表明,所建立的RT-PCR检测方法具有很好的特异性和敏感性,可用于鸭BATV感染的早期快速诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 巴泰病毒 RT-PCR
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鸭多杀性巴氏杆菌抗体检测胶体金试纸条的研制及应用 被引量:4
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作者 程龙飞 陈红梅 +6 位作者 傅光华 江南松 傅秋玲 万春和 黄瑜 刘荣昌 施少华 《动物医学进展》 北大核心 2023年第6期65-69,共5页
为建立快速检测鸭血清多杀性巴氏杆菌抗体的方法,将兔抗鸭IgG标记胶体金,喷涂金标垫,用浓度为0.2 mg/mL的荚膜和0.2 mg/mL羊抗兔IgG抗体分别作为检测线和质控线,制备了检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条(D-CGTS)。特异性试验显示... 为建立快速检测鸭血清多杀性巴氏杆菌抗体的方法,将兔抗鸭IgG标记胶体金,喷涂金标垫,用浓度为0.2 mg/mL的荚膜和0.2 mg/mL羊抗兔IgG抗体分别作为检测线和质控线,制备了检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条(D-CGTS)。特异性试验显示,仅鸭抗多杀性巴氏杆菌血清检测为阳性,阴性血清、鸭抗大肠埃希氏菌、鸭抗鸭疫里默氏菌、鸭抗沙门氏菌和鸭抗金黄色葡萄球菌血清的检测结果均为阴性,表明D-CGTS的特异性良好。敏感性试验结果显示,对效价1∶16(琼脂扩散试验)的鸭抗多杀性巴氏杆菌血清1∶320倍稀释后采用制备的试纸条检测结果仍为阳性,表明D-CGTS的敏感性较高。重复性试验结果显示,同批次的不同试纸条和不同批次的试纸条,检测阴性血清和鸭抗多杀性巴氏杆菌血清的结果相同,表明D-CGTS的重复性好。对92份鸭血清采用D-CGTS和ELISA进行检测,结果显示,阳性符合率为94.03%,阴性符合率为100%,总符合率为95.65%。结果表明,制备的D-CGTS操作简单,具有较强的特异性、较高的敏感性和较好的重复性,适合在兽医临床推广应用。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 胶体金试纸条 荚膜
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鹅圆环病毒JX1株ORF3基因序列分析 被引量:2
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作者 万春和 黄瑜 《福建畜牧兽医》 2020年第6期1-5,共5页
为明确鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)ORF3基因特征,本研究通过对朗德鹅源GoCV代表株(JX1株)基因组分析发现,JX1株ORF3基因全长为300 bp,编码99个氨基酸,未发现典型的核定位信号。所编码ORF3蛋白理论等电点为8.84、不稳定指数为80.... 为明确鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)ORF3基因特征,本研究通过对朗德鹅源GoCV代表株(JX1株)基因组分析发现,JX1株ORF3基因全长为300 bp,编码99个氨基酸,未发现典型的核定位信号。所编码ORF3蛋白理论等电点为8.84、不稳定指数为80.95,为不稳定蛋白;脂肪系数为89.70;总平均疏水性指数为-0.472。ORF3基因核苷酸同源性分析比较发现,JX1株与yk1株(AY633653)、yk3株(DQ192280)核苷酸同源性最高,均为100%;与DG1株(KT808650)的核苷酸同源性最低,仅为89.0%。ORF3基因遗传进化分析发现,ORF3基因的进化频率并不完全与GoCV全基因组一致,ORF3基因在遗传进化上表现出明显的地域性,但不表现出时间性。本研究首次对GoCV ORF3基因特征进行分析探讨,为后续开展GoCV ORF3基因生物学功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 鹅圆环病毒 ORF3基因 序列分析
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一例樱桃谷鸭脾坏死症的诊断 被引量:1
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作者 付环茹 赵敏 万春和 《福建畜牧兽医》 2023年第3期77-78,共2页
2023年2月,福建三明某樱桃谷鸭养殖场约70%鸭出现脾坏死症,剖检可见肝脏表现为多发黄白色坏死灶(或出血灶),脾脏肿大成大理石样等典型“脾坏死症”症状。为明确病原,采用肝脾混合物制备悬液接种番鸭胚,将死亡胚经RT-PCR对常规病原检测后... 2023年2月,福建三明某樱桃谷鸭养殖场约70%鸭出现脾坏死症,剖检可见肝脏表现为多发黄白色坏死灶(或出血灶),脾脏肿大成大理石样等典型“脾坏死症”症状。为明确病原,采用肝脾混合物制备悬液接种番鸭胚,将死亡胚经RT-PCR对常规病原检测后,明确该病原为新型呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)。 展开更多
关键词 樱桃谷鸭 脾坏死症 新型呼肠孤病毒 诊断
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番鸭关节炎病例鸭疫里默氏菌的分离与鉴定
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作者 刘娜 陈红梅 +2 位作者 江南松 黄瑜 程龙飞 《福建畜牧兽医》 2023年第4期56-58,共3页
为探究跛行番鸭的发病原因,采集关节内的脓性渗出物进行细菌分离,PCR鉴定细菌种属,琼脂扩散试验鉴定其血清型,纸片法分析其药物敏感性。结果,分离鉴定到1株血清1型鸭疫里默氏菌。该菌敏感的药物有阿米卡星、庆大霉素、新霉素、氟苯尼考... 为探究跛行番鸭的发病原因,采集关节内的脓性渗出物进行细菌分离,PCR鉴定细菌种属,琼脂扩散试验鉴定其血清型,纸片法分析其药物敏感性。结果,分离鉴定到1株血清1型鸭疫里默氏菌。该菌敏感的药物有阿米卡星、庆大霉素、新霉素、氟苯尼考和头孢氨苄等。此结果为该鸭场防治鸭疫里默氏菌病疫苗选用和临床用药提供了科学理论依据。 展开更多
关键词 关节炎 鸭疫里默氏菌 分离 鉴定 血清型 药敏试验
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一例番鸭短喙与侏儒综合征的诊断
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作者 付环茹 赵敏 万春和 《福建畜牧兽医》 2023年第4期110-111,共2页
2023年1月,福建漳州某番鸭养殖场番鸭(约65日龄)生长迟缓,临床表现为短喙与侏儒综合征,剖检主要脏器无明显病理变化。对该病例进行常规实验室病原核酸检测发现,该病例为新型番鸭细小病毒与鸭圆环病毒共感染。现将该病例的诊断情况做一... 2023年1月,福建漳州某番鸭养殖场番鸭(约65日龄)生长迟缓,临床表现为短喙与侏儒综合征,剖检主要脏器无明显病理变化。对该病例进行常规实验室病原核酸检测发现,该病例为新型番鸭细小病毒与鸭圆环病毒共感染。现将该病例的诊断情况做一简要报道,供同行参考。 展开更多
关键词 番鸭 短喙与侏儒综合征 新型番鸭细小病毒 鸭圆环病毒
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