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果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建
被引量：
1
1
作者
林生
潘大仁
+3 位作者
周以飞
陈观水
张绪璋
吴子峰
《热带生物学报》
2010年第1期1-7,共7页
利用不同作物的Sgt1基因的SGS保守区域的氨基酸保守位点设计简并引物,从果蔗的cDNA中克隆分离出果蔗SoSgt1基因片段。以果蔗SoSgt1基因片段为探针,利用电子克隆和序列拼接方法并通过RT-PCR验证获得了一个全长1438bp的cDNA序列。通过ORF...
利用不同作物的Sgt1基因的SGS保守区域的氨基酸保守位点设计简并引物,从果蔗的cDNA中克隆分离出果蔗SoSgt1基因片段。以果蔗SoSgt1基因片段为探针,利用电子克隆和序列拼接方法并通过RT-PCR验证获得了一个全长1438bp的cDNA序列。通过ORF软件分析,预测得到的蛋白质具有362个氨基酸。利用NCBI数据库中的Protein Blast分析SoSgt1蛋白氨基酸序列,得出含有SGT1蛋白的3个典型的保守结构域(TPR,CS和SGS),与其他作物的SGT1蛋白比较具有较高的相似性。利用梢腐病病原Gibberella fujikuroi接种福安果蔗叶片,检测到SoSgt1基因的转录水平逐渐提高,并用果蔗SoSgt1基因的cDNA片段设计2个酶切位点,反向插入到植物真核表达载体pCAMBIA1301,构建反义表达载体pCAM-SGT。
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关键词
果蔗
SoSgt1基因
克隆
半定量RT-PCR
载体构建
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职称材料
受青枯菌诱导的花生根酵母双杂交文库构建和AhRRS5互作蛋白的筛选
被引量：
12
2
作者
陈玉婷
刘露
+6 位作者
楚盼盼
魏嘉贤
钱慧娜
陈华
蔡铁城
庄伟建
张冲
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第11期2134-2146,共13页
前期研究报道超表达花生AhRRS5基因能够显著提高烟草抗青枯病水平,为进一步探究NBS-LRR类抗病蛋白AhRRS5在花生应答青枯菌胁迫的信号通路,本研究在构建花生受青枯菌诱导的根部组织均一化三框文库的基础上,通过酵母双杂交技术筛选AhRRS5...
前期研究报道超表达花生AhRRS5基因能够显著提高烟草抗青枯病水平,为进一步探究NBS-LRR类抗病蛋白AhRRS5在花生应答青枯菌胁迫的信号通路,本研究在构建花生受青枯菌诱导的根部组织均一化三框文库的基础上,通过酵母双杂交技术筛选AhRRS5的互作蛋白。通过改良的CTAB法提取青枯菌诱导后不同时间点的花生根部组织样品总RNA,分离纯化mRNA并合成双链cDNA,并基于同源重组方法分别构建酵母双杂交初级和次级文库。构建的酵母双杂交次级cDNA文库库容为1.44×10^(7) cfu mL^(-1),重组率为100%,插入片段大小在1000 bp以上。通过酶切连接法构建pGBKT7-AhRRS5诱饵载体,在酵母细胞中无自激活和毒性活性,与酵母双杂交文库共转酵母Y2H Gold菌株后,经多次筛库和回转验证,最终获得12个候选互作蛋白,这些蛋白涉及到植物生长发育、能量代谢、激素信号转导、胁迫响应等多个方面。通过双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)验证了AhSBT1.6和AhRRS5的体内互作。转录组数据显示,花生AhSBT1.6基因在不同组织中表达差异显著;实时荧光定量PCR显示,该基因在抗青枯病花生品种中受青枯菌诱导上调表达,推测AhSBT1.6可能参与调控花生青枯病抗性。研究结果为进一步研究NBS-LRR类抗病蛋白AhRRS5和互作蛋白在花生青枯病抗性防御的作用机制奠定了基础。
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关键词
花生
青枯病
酵母双杂交
互作蛋白
AhSBT1.6
双分子荧光互补
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职称材料
题名
果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建
被引量：
1
1
作者
林生
潘大仁
周以飞
陈观水
张绪璋
吴子峰
机构
福建省作物分子与细胞生物学重点实验室福建农林大学
作物
遗传育种与综合利用教育部
重点
实验室
福建农林大学
出处
《热带生物学报》
2010年第1期1-7,共7页
基金
国家自然科学基金(30370900)
福建省自然科学基金(2003N001)
文摘
利用不同作物的Sgt1基因的SGS保守区域的氨基酸保守位点设计简并引物,从果蔗的cDNA中克隆分离出果蔗SoSgt1基因片段。以果蔗SoSgt1基因片段为探针,利用电子克隆和序列拼接方法并通过RT-PCR验证获得了一个全长1438bp的cDNA序列。通过ORF软件分析,预测得到的蛋白质具有362个氨基酸。利用NCBI数据库中的Protein Blast分析SoSgt1蛋白氨基酸序列,得出含有SGT1蛋白的3个典型的保守结构域(TPR,CS和SGS),与其他作物的SGT1蛋白比较具有较高的相似性。利用梢腐病病原Gibberella fujikuroi接种福安果蔗叶片,检测到SoSgt1基因的转录水平逐渐提高,并用果蔗SoSgt1基因的cDNA片段设计2个酶切位点,反向插入到植物真核表达载体pCAMBIA1301,构建反义表达载体pCAM-SGT。
关键词
果蔗
SoSgt1基因
克隆
半定量RT-PCR
载体构建
Keywords
chewing cane
SoSgtl gene
cloning
semi-quantitative RT-PCR
vector construction
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
受青枯菌诱导的花生根酵母双杂交文库构建和AhRRS5互作蛋白的筛选
被引量：
12
2
作者
陈玉婷
刘露
楚盼盼
魏嘉贤
钱慧娜
陈华
蔡铁城
庄伟建
张冲
机构
福建农林大学
豆科油料植物遗传与系统
生物学
研究中心
闽台
作物
有害
生物
生态防控国家
重点
实验室
/
福建农林大学
植物保护学院
福建省
作物
分子与
细胞
生物学
重点
实验室
/
福建农林大学
农学院
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第11期2134-2146,共13页
基金
国家自然科学基金项目(32072103,31701463,U1705233)
福建省科技厅农业引导性(重点)项目(2018N0004)资助。
文摘
前期研究报道超表达花生AhRRS5基因能够显著提高烟草抗青枯病水平,为进一步探究NBS-LRR类抗病蛋白AhRRS5在花生应答青枯菌胁迫的信号通路,本研究在构建花生受青枯菌诱导的根部组织均一化三框文库的基础上,通过酵母双杂交技术筛选AhRRS5的互作蛋白。通过改良的CTAB法提取青枯菌诱导后不同时间点的花生根部组织样品总RNA,分离纯化mRNA并合成双链cDNA,并基于同源重组方法分别构建酵母双杂交初级和次级文库。构建的酵母双杂交次级cDNA文库库容为1.44×10^(7) cfu mL^(-1),重组率为100%,插入片段大小在1000 bp以上。通过酶切连接法构建pGBKT7-AhRRS5诱饵载体,在酵母细胞中无自激活和毒性活性,与酵母双杂交文库共转酵母Y2H Gold菌株后,经多次筛库和回转验证,最终获得12个候选互作蛋白,这些蛋白涉及到植物生长发育、能量代谢、激素信号转导、胁迫响应等多个方面。通过双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)验证了AhSBT1.6和AhRRS5的体内互作。转录组数据显示,花生AhSBT1.6基因在不同组织中表达差异显著;实时荧光定量PCR显示,该基因在抗青枯病花生品种中受青枯菌诱导上调表达,推测AhSBT1.6可能参与调控花生青枯病抗性。研究结果为进一步研究NBS-LRR类抗病蛋白AhRRS5和互作蛋白在花生青枯病抗性防御的作用机制奠定了基础。
关键词
花生
青枯病
酵母双杂交
互作蛋白
AhSBT1.6
双分子荧光互补
Keywords
peanut
bacterial wilt
yeast-two-hybrid
interaction protein
AhSBT1.6
BiFC
分类号
S435.652 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建
林生
潘大仁
周以飞
陈观水
张绪璋
吴子峰
《热带生物学报》
2010
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
受青枯菌诱导的花生根酵母双杂交文库构建和AhRRS5互作蛋白的筛选
陈玉婷
刘露
楚盼盼
魏嘉贤
钱慧娜
陈华
蔡铁城
庄伟建
张冲
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
12
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职称材料
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