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实验动物内耳基因导入研究进展
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作者 刘茜 陈伟 +3 位作者 郭维维 杨仕明 伊海金 林昶 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期503-508,共6页
由于内耳独特的解剖特点和血迷路屏障的存在,要实现内耳治疗靶点精准的基因递送,必须选择适合的手术路径。大量文献表明经圆窗入路及耳蜗开窗(鼓阶/中阶)径路均可将基因成功递送到内耳并表达,转染效率及听力损伤程度各有不同。本文综述... 由于内耳独特的解剖特点和血迷路屏障的存在,要实现内耳治疗靶点精准的基因递送,必须选择适合的手术路径。大量文献表明经圆窗入路及耳蜗开窗(鼓阶/中阶)径路均可将基因成功递送到内耳并表达,转染效率及听力损伤程度各有不同。本文综述内耳基因递送入路并分析各自的优劣,同时关注不同入路对听觉功能的影响。为内耳基因治疗中的听觉功能保护提供新思路。 展开更多
关键词 实验动物 基因导入 听力保护
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腺相关病毒在耳聋基因治疗上的应用 被引量:6
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作者 史珣贝 吴南 +2 位作者 郭维维 杨仕明 林昶 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第1期37-42,共6页
由于腺相关病毒具有独特的载体优势,越来越多地被应用在基因治疗中。大量文献表明,腺相关病毒可以携带目的基因通过不同手术途径成功导入遗传性耳聋动物模型,在毛细胞,血管纹,支持细胞,螺旋神经节细胞等成功表达,实现形态学和功能学的... 由于腺相关病毒具有独特的载体优势,越来越多地被应用在基因治疗中。大量文献表明,腺相关病毒可以携带目的基因通过不同手术途径成功导入遗传性耳聋动物模型,在毛细胞,血管纹,支持细胞,螺旋神经节细胞等成功表达,实现形态学和功能学的恢复。本文总结应用腺相关病毒进行耳聋基因治疗的研究进展,突出其优势,总结成功经验及存在问题,为未来腺相关病毒在耳聋中的应用提供新思路。 展开更多
关键词 腺相关病毒 遗传性耳聋 基因治疗 载体
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宽频带白噪声暴露对巴马香猪和豚鼠听力损伤的影响 被引量:4
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作者 侯琨 吴南 +6 位作者 塞娜 王方园 唐朝颖 史询贝 李佳楠 陈立伟 杨仕明 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第1期83-87,共5页
目的通过120dB SPL宽频带白噪声对巴马香猪和豚鼠各进行单次3小时的暴露,观察比较该种噪声对两种模型动物听力损伤的特点,找到更适用于研究噪声性听力损伤的动物模型。方法选取8只6月龄ABR听阈正常的巴马香猪,和8只5~6周龄ABR听阈正常... 目的通过120dB SPL宽频带白噪声对巴马香猪和豚鼠各进行单次3小时的暴露,观察比较该种噪声对两种模型动物听力损伤的特点,找到更适用于研究噪声性听力损伤的动物模型。方法选取8只6月龄ABR听阈正常的巴马香猪,和8只5~6周龄ABR听阈正常的豚鼠,设置4个ABR测听记录点:噪声暴露前,噪声暴露后即刻(P0)、1天(P1)、7天(P7)。全部测听结束后,取材制作耳蜗标本,进行扫描电镜观察形态。结果通过统计学分析,豚鼠组在120dB SPL宽频带白噪声暴露后即刻的ABR阈值与暴露1天的ABR阈值具有明显差异,具有统计学意义,而巴马香猪组则无明显统计学差异。豚鼠组在噪声暴露前和噪声暴露后7天的ABR阈值无明显统计学差异,而巴马香猪组却有明显的统计学差异。相对于豚鼠,巴马香猪耳蜗标本扫描电镜提示了更多的纤毛异常。结论120d B SPL宽频带白噪声暴露会对巴马香猪和豚鼠造成一定程度的听力损伤。其中巴马香猪较豚鼠表现更为明显的听力损失,且毛细胞出现了更多的病理改变,由此本研究表明在120d B SPL宽频带白噪声单次暴露3小时的条件下,巴马香猪是一个更适于白噪声与听力损伤的研究的动物模型,从而可以更好地为噪声性耳聋提供动物模型。 展开更多
关键词 白噪声 巴马香猪 豚鼠 动物模型 毛细胞
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过表达mitf基因腺相关病毒的构建与鉴定
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作者 史珣贝 林昶 +1 位作者 杨仕明 吴南 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第6期841-845,共5页
目的获得能够过表达小眼畸形相关转录因子(mitf)的重组腺相关病毒载体,用于mitf基因突变相关疾病的基因治疗。方法利用PCR扩增获得目的基因,构建携带目的基因mitf的重组腺相关病毒载体,利用人工脂质体法将p AAV-RC,p Helper,以及p AAV... 目的获得能够过表达小眼畸形相关转录因子(mitf)的重组腺相关病毒载体,用于mitf基因突变相关疾病的基因治疗。方法利用PCR扩增获得目的基因,构建携带目的基因mitf的重组腺相关病毒载体,利用人工脂质体法将p AAV-RC,p Helper,以及p AAV-GFP系列载体转染到HEK293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法进行重组腺相关病毒载体构建,利用柱纯化法纯化病毒载体,q PCR法测定重组腺相关病毒载体滴度,病毒载体感染HEK293细胞进行病毒有效性及安全性鉴定,real-time PCR与western blot法进行mitf表达的鉴定。结果 PCR扩增和测序结果一致证实成功获得目的基因并且成功构建mitf基因腺相关病毒载体,测得高水平病毒滴度1.0^*10^12vg/ml,病毒载体感染HEK293细胞转染效率为86.3%,并未发现HEK293细胞死亡,Real-time PCR及Western blot检测构建Mitf基因转录m RNA与表达的蛋白与正常MITF一致。结论成功构建的携带mitf基因的重组腺相关病毒载体为未来进行mitf突变导致的遗传性疾病的基因治疗提供新思路。 展开更多
关键词 ITF 腺相关病毒 基因治疗
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