维立西呱通过抑制P70S6K磷酸化减轻自发性高血压大鼠心肌纤维化及AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成

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作者 王登炜 王华军 韩英 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第4期645-652,共8页

目的:探讨维立西呱(Ver)抑制自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化及其对心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)/P70核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)表达的影响。方法:(1)8只3月龄雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为正常对照(WKY)组,与之月龄性别相匹... 目的:探讨维立西呱(Ver)抑制自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化及其对心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)/P70核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)表达的影响。方法:(1)8只3月龄雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为正常对照(WKY)组,与之月龄性别相匹配的24只SHR随机平均分为SHR组、SHR+Ver1组(Ver剂量为1 mg·kg^(-1)·d^(-1))和SHR+Ver3组(Ver剂量为3 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每天灌胃相应剂量的Ver持续3个月。尾套法测大鼠血压;称量法测大鼠全心质量指数(HMI)和左心室质量指数(LVMI);天狼星红染色观察心肌胶原沉积。(2)组织贴块法培养心脏成纤维细胞(CFBs),并以AngⅡ诱导,分别用Ver、尼可地尔(Nic)和P70S6K抑制剂PF-4708671进行细胞干预。ELISA法检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)和ColⅢ水平;放射免疫法检测AngⅡ和环磷酸鸟苷(cGMP)水平;Western blot检测AT1R、P70S6K和磷酸化P70S6K(p-P70S6K)水平。结果:(1)与WKY组相比,SHR组大鼠收缩压、舒张压、HMI、LVMI、胶原容积分数(CVF)及心肌ColⅠ和ColⅢ均增高(P<0.05);与SHR组相比,SHR+Ver1组及SHR+Ver3组大鼠HMI、LVMI、CVF及心肌ColⅠ和ColⅢ均降低(P<0.05)。SHR组血浆和心肌组织AngⅡ水平、心肌组织AT1R、p-P70S6K表达水平较WKY均增高(P<0.05);与SHR组相比,SHR+Ver1组和SHR+Ver3组p-P70S6K水平降低(P<0.05)。与WKY组相比,SHR组心肌组织cGMP水平降低(P<0.05);与SHR组相比,SHR+Ver1组和SHR+Ver3组血浆及心肌组织cGMP水平增高(P<0.05)。(2)Ver可呈浓度(10^(-7)~10^(-5)mol/L)依赖性降低AngⅡ诱导的CFBs ColⅠ和ColⅢ合成水平;与AngⅡ(10-6mol/L)组相比,AngⅡ(10-6mol/L)+Ver(10^(-5)mol/L)组CFBs ColⅠ和ColⅢ水平均降低(P<0.05);Ver(10^(-5)mol/L)、Nic(10-4mol/L)和PF-4708671(10-4mol/L)均能降低AngⅡ(10-6mol/L)诱导的CFBs p-P70S6K、ColⅠ和ColⅢ水平(P<0.05)。结论:Ver可能通过增加cGMP,抑制SHR心肌P70S6K磷酸化及AngⅡ诱导的CFBs胶原合成,从而减轻心肌纤维化。 展开更多

关键词 维立西呱 自发性高血压大鼠 心肌纤维化 血管紧张素Ⅱ P70核糖体蛋白S6激酶

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自发性高血压大鼠血管平滑肌及心肌内成纤维细胞生长特性的研究 被引量：1

2

作者 许昌声 陈天宝 +3 位作者 苏津自 林从容 谢良地 徐尚华 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1999年第1期31-36,共6页

目的探讨自发性高血压大鼠（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ，ＳＨＲ）主动脉平滑肌细胞（ａｏｒｔａｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＡＳＭＣ）与心肌内成纤维细胞（ｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓ... 目的探讨自发性高血压大鼠（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ，ＳＨＲ）主动脉平滑肌细胞（ａｏｒｔａｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＡＳＭＣ）与心肌内成纤维细胞（ｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＦＢ）在体外培养生长的特性。方法１６周龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常大鼠（ＷＫＹ）测血压后处死，取心脏与胸主动脉，组织块法分别培养ＣＦＢ与ＡＳＭＣ）。分别观察：（１）ＣＦＢ３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入与倍增时间（ＤＴ），ＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ掺入与倍增时间（ＤＴ），比较ＳＨＲ，ＷＫＹ的平滑肌细胞和心肌内成纤维细胞的增殖能力。（２）ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ在无血清或２％小牛血清（ＦＣＳ）条件下对两种大鼠ＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ，ＣＦＢ３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入率及细胞数的影响，用３Ｈ－ＴｄＲ，３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ分别反应ＡＳＭＣ和ＣＦＢ增殖能力。结果（１）ＳＨＲ的ＡＳＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ掺入率ＣＦＢ３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ掺入率显著高于ＷＫＹ，ＡＳＭＣ倍增时间明显短于ＷＫＹ（分别为４７３±０２５，３００±１４０，Ｐ＜００１），而ＣＦＢ两组大鼠间倍增时间无差别（２６１±１６，２６６±１９，? 展开更多

关键词 SHR 自发性高血压大鼠 成纤维细胞 ^3H-TDR掺入 心肌 倍增时间 增殖能力 培养基 生长特性 浓度

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氟伐他汀抑制高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖 被引量：10

3

作者 谢良地 林志鸿 +3 位作者 孙明 周宏研 吴可贵 李庚山 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期483-485,共3页

目的 :探讨氟伐他汀对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法 :培养自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,不同浓度血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )、血小板源生长因子 (PDGF)、氟伐他汀及甲羟戊酸干预后 ,行细胞计数和 [3 H]-Td... 目的 :探讨氟伐他汀对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法 :培养自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,不同浓度血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )、血小板源生长因子 (PDGF)、氟伐他汀及甲羟戊酸干预后 ,行细胞计数和 [3 H]-TdR掺入率测定。结果 :①氟伐他汀呈浓度依赖性抑制 10 -6mol/LAngⅡ和 10 μg/LPDGF刺激诱导的血管平滑肌细胞数和 [3 H]-TdR掺入率增加 ;② 10 -3 mol/L甲羟戊酸几乎完全逆转氟伐他汀对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。结论 :氟伐他汀抑制AngⅡ和PDGF诱导的高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖 ;甲羟戊酸代谢途径可能参与血管平滑肌细胞增殖过程。 展开更多

关键词 氟伐他汀 高血压 大鼠 血管平滑肌细胞 甲羟戊酸 细胞增殖

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缬沙坦对自发性高血压大鼠血管结构和舒缩功能的影响 被引量：7

4

作者 王华军 谢良地 +3 位作者 姚恩辉 许昌声 晋学庆 吴可贵 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2003年第6期662-665,共4页

目的 :观察缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)的血压、血管功能和结构的影响。方法 :30只12wk龄雄性SHR ,随机分成 3组 ,每组 10只 :缬沙坦大剂量组 (30mg·kg-1·d-1) ;缬沙坦小剂量组(10mg·kg-1·d-1) ;SHR模型对照组 ... 目的 :观察缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)的血压、血管功能和结构的影响。方法 :30只12wk龄雄性SHR ,随机分成 3组 ,每组 10只 :缬沙坦大剂量组 (30mg·kg-1·d-1) ;缬沙坦小剂量组(10mg·kg-1·d-1) ;SHR模型对照组 ,另设同龄雄性正常血压WKY大鼠作为正常对照组 (n =10 )。用无创法测定尾动脉收缩压及心率 ,至给药 4wk处死。测定胸主动脉、肠系膜动脉分支第三级血管壁(中膜 ) 腔面积比 ,并采用平衡记录仪记录离体的动脉环对血管活性药物去甲肾上腺素 (NE)和硝普钠反应的敏感性。结果 :与模型组相比 ,大、小剂量缬沙坦均能降低SHR血压 ,肠系膜动脉壁肥厚明显改善 (P <0 .0 1) ;大剂量明显减少主动脉腔壁比 (P <0 .0 1) ,小剂量缬沙坦也可减少腔壁比 ,但无统计学意义 ;大、小剂量均能使胸主动脉及肠系膜动脉对硝普钠的舒张敏感性增加 (P <0 .0 5 ) ,对NE收缩的敏感性降低 (P <0 .0 5 )。结论 :缬沙坦能改善SHR的非内皮依赖性血管舒张功能 ,使SHR血管对循环〗活性物质的异常反应改善 ,并抑制SHR的血管壁变厚。 展开更多

关键词 药效学 高血压大鼠 缬沙坦 收缩功能 舒张功能 高血压

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苯那普利对自发性高血压大鼠肾脏Aquaporin2表达的影响 被引量：1

5

作者 黄继华 谢良地 +1 位作者 许昌声 王华军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期388-390,共3页

目的:观察苯那普利对水孔蛋白2(AQP2)表达的影响。方法:雄性自发性高血压大鼠(SHR)16只,8周龄,体重200-300g,随机分成2组,每组8只,分别给予生理盐水(SHRctrl)、苯那普利(SHRben)灌胃。灌胃8周后断头取血,放免法测定血浆血管升压素(AVP)... 目的:观察苯那普利对水孔蛋白2(AQP2)表达的影响。方法:雄性自发性高血压大鼠(SHR)16只,8周龄,体重200-300g,随机分成2组,每组8只,分别给予生理盐水(SHRctrl)、苯那普利(SHRben)灌胃。灌胃8周后断头取血,放免法测定血浆血管升压素(AVP)浓度。取肾脏近髓组织100mg,RT-PCR法检测大鼠肾脏AQP2mR-NA的表达,另取相应组织以免疫组化法检测AQP2的表达情况。结果:SHRctrl组和SHRben组大鼠药物干预前血压无明显差异,大鼠苯那普利灌胃8周后,血压明显下降,显著低于SHRctrl组大鼠血压[(112±17)mmHgvs(169±9)mmHg,P<0·05]。SHRben组大鼠肾脏AQP2mRNA(0·48±0·11vs0·72±0·17,P<0·05)、AQP2蛋白表达水平(0·47±0·09vs0·62±0·12,P<0·05)、血浆AVP浓度[(61·79±9·19)ng/Lvs(87·16±8·20)ng/L,P<0·05]均显著低于SHRctrl组。结论:苯那普利抑制SHR肾脏水孔蛋白2的高表达。 展开更多

关键词 水孔道蛋白类 血管升压素类 高血压 大鼠 苯那普利

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自发性高血压大鼠左心室肥厚与血压、心肌局部血管紧张素Ⅱ的关系 被引量：7

6

作者 王华军 谢良地 +1 位作者 晋学庆 陈达光 《中国实验动物学杂志》 CAS 1999年第3期133-136,共4页

目的　研究自发性高血压大鼠（ＳＨＲ） 左心室肥厚与血压、心肌局部血管紧张素ＩＩ 的关系。方法　取ＳＨＲ（ｎ ＝ ４０） 及正常对照组 ＷＫＹ（ｎ ＝ ４１） ，分为４ 周龄、８ 周龄、１２ 周龄、２４ 周龄及３６周龄组，测收缩压... 目的　研究自发性高血压大鼠（ＳＨＲ） 左心室肥厚与血压、心肌局部血管紧张素ＩＩ 的关系。方法　取ＳＨＲ（ｎ ＝ ４０） 及正常对照组 ＷＫＹ（ｎ ＝ ４１） ，分为４ 周龄、８ 周龄、１２ 周龄、２４ 周龄及３６周龄组，测收缩压、体重、左心室重量及用放免法测定心肌局部血管紧张素（ＡＩＩ） 含量，并进行两两线性相关分析。结果　通过对５ 个年龄段的ＳＨＲ 和 ＷＫＹ 的收缩压、左心室重与体重比（ＬＶＭＢＷ）及心肌局部ＡＩＩ含量的测定结果发现三者之间存在相关性，其中ＡＩＩ与心肌肥厚有明显相关性。结论　血压与ＡＩＩ在ＳＨＲ 大鼠的左心室肥厚中起着重要作用。 展开更多

关键词 心肌 局部 SHR 左心室肥厚 自发性高血压大鼠 血管紧张素Ⅱ 收缩压 周龄 体重 含量

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AT_1R基因多态性对血压的影响 被引量：1

7

作者 林从容 吴可贵 +1 位作者 谢良地 叶琼 《中国心血管杂志》 1999年第3期145-148,共4页

目的 检测血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AT_1R)C1166等位基因在正常人和原发性高血压(EH)患者中的频率,并研究中国汉族人AT_1R基因多态性与原发性高血压的关系.方法 测定120例汉族原发性高血压病人和86个汉族正常人的血压、体重指数、空腹血... 目的 检测血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AT_1R)C1166等位基因在正常人和原发性高血压(EH)患者中的频率,并研究中国汉族人AT_1R基因多态性与原发性高血压的关系.方法 测定120例汉族原发性高血压病人和86个汉族正常人的血压、体重指数、空腹血糖及血胆固醇和甘油三酯浓度.用盐析法提取外周血白细胞DNA,用PCR加上限制性酶切方法检测AT_1R的C1166位基因突变.结果 高血压组除收缩压、舒张压显著高于对照组外,其它临床指标如体重指数、空腹血糖及血脂水平两组间无显著差异;EH患者AT_1R基因AC基因型频率比正常对照组高(0.081vs 0.058,P<0.01),C1166等位基因频率EH组高于正常对照组(0.091vs 0.029,P<0.05);两组中均未发现CC纯合子基因型;进行性别分组后,发现在女性EH患者C1166等位基因频率高于女性正常对照组(0.125 vs 0. 031,P<0.05),在男性EH患者C166频率与男性正常对照组无显著差异(0.072vs O.028,P>0.05);将EH组分为有、无高血压家族史两组,发现有高血压家族史的EH患者C1166频率高于无家族史EH患者(0.123 vs 0.035,P<0.05).结论 在中国汉族人群中,AT_1R基因多态性与原发性高血压有关;C1166等位基因可能是一个高血压的易感基因,并与有家族史的原发性高血压以及女性高血压病密切相关. 展开更多

关键词 EH 对照组 原发性高血压 患者 正常人 家族史 体重指数 限制性酶切 R基因 等位基因频率

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心脉隆注射液对慢性心力衰竭患者心功能及血浆B型钠尿肽的影响 被引量：34

8

作者 姚恩辉 李世春 王华军 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第27期3239-3241,共3页

目的观察心脉隆注射液治疗慢性心力衰竭(CHF)的临床疗效,探讨其对患者心功能及血浆B型钠尿肽(BNP)水平的影响。方法选取新疆昌吉州人民医院心内科、老年病科和急诊内科2012—2013年住院治疗的CHF患者104例,应用随机数字表法分为治疗组... 目的观察心脉隆注射液治疗慢性心力衰竭(CHF)的临床疗效,探讨其对患者心功能及血浆B型钠尿肽(BNP)水平的影响。方法选取新疆昌吉州人民医院心内科、老年病科和急诊内科2012—2013年住院治疗的CHF患者104例,应用随机数字表法分为治疗组和对照组,每组各52例。两组均给予常规治疗。治疗组在常规治疗的同时加用心脉隆注射液4 ml+0.9%氯化钠溶液200 ml静脉滴注,1次/d,疗程7 d。比较两组治疗效果,并测定治疗前后左心室舒张末期内径(LVDd)、左室射血分数(LVEF)及血浆BNP水平。结果治疗后治疗组有效率高于对照组〔92.3%(48/52)与76.9%(40/52),χ2=4.727,P<0.05〕。治疗后对照组及治疗组LVDd、LVEF均较治疗前改善(P<0.05),且治疗组LVDd、LVEF改善程度均高于对照组治疗后〔(9.5±1.8)mm与(5.4±1.3)mm,(8.9±2.2)%与(3.2±1.6)%;P<0.05〕。两组患者治疗后血浆BNP水平均较治疗前降低(P<0.05),且治疗组治疗后血浆BNP水平降低幅度高于对照组〔(729.3±18.5)ng/L与(459.0±1.1)ng/L,P<0.05〕。结论在常规治疗的同时加用心脉隆注射液治疗,可明显提高疗效,降低血浆BNP水平,改善患者心功能。 展开更多

关键词 心脉隆注射液 心力衰竭 心脏功能试验 B型钠尿肽

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脂肪间充质干细胞早期干预对野百合碱诱发的肺动脉高压大鼠肺小动脉功能的影响 被引量：8

9

作者 梁敏烈 谢良地 +2 位作者 李宏亮 郑苏梨 王华军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1729-1735,共7页

目的:观察脂肪间充质干细胞(ADMSCs)早期干预对野百合碱(MCT)诱发的大鼠肺动脉高压(PAH)进程中肺小动脉功能的影响。方法:采用SD大鼠腹股沟皮下脂肪,经胶原酶消化法分离培养ADMSCs。雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照组、PAH组和ADMSCs... 目的:观察脂肪间充质干细胞(ADMSCs)早期干预对野百合碱(MCT)诱发的大鼠肺动脉高压(PAH)进程中肺小动脉功能的影响。方法:采用SD大鼠腹股沟皮下脂肪,经胶原酶消化法分离培养ADMSCs。雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照组、PAH组和ADMSCs早期干预组(ADMSCs-EI组)。一次性腹腔注射MCT 40mg/kg建立PAH动物模型。ADMSCs-EI组于MCT注射后1周,经左颈外静脉一次性给予ADMSCs(1×106)。分别于ADMSCs移植后1、2、3周,右心导管法测定大鼠的肺动脉平均压(MPAP),并采用离体血管张力法检测大鼠肺小动脉的内皮依赖性舒张(EDdR)、非内皮依赖性舒张(EDiR)以及收缩功能(VCF)。收缩或舒张的敏感性用pD2值表示。结果:与对照组比较,腹腔注射MCT后2周,PAH组大鼠肺小动脉EDdR明显减弱;同时,与PAH组比较,ADMSCs早期移植后1周,ADMSCs-EI组大鼠肺小动脉EDdR明显增强(均P<0.05)。与对照组比较,腹腔注射MCT后3、4周,PAH组大鼠MPAP显著升高,肺小动脉EDdR和EDiR显著减弱;同时,与PAH组比较,ADMSCs早期移植后2、3周,ADMSCs-EI组大鼠MPAP显著降低,肺小动脉EDdR和EDiR显著增强(均P<0.05);但是,VCF在3组间均无显著差异(P>0.05)。结论:ADMSCs早期干预可以明显改善受损的肺小动脉EDdR及EDiR,并有效地降低MCT诱发的PAH大鼠的肺动脉压力。 展开更多

关键词 肺动脉高压 脂肪间充质干细胞 内皮依赖性舒张 非内皮依赖性舒张

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脂肪间充质干细胞对野百合碱诱发的肺动脉高压大鼠肺动脉钙离子通道的影响 被引量：5

10

作者 郑苏梨 谢良地 +2 位作者 李宏亮 梁敏烈 许昌声 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期961-968,共8页

目的:探讨脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)移植对野百合碱(monocrotaline,MCT)诱发的肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)大鼠肺动脉钙离子通道的影响。方法:胶原酶消化法分离培... 目的:探讨脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)移植对野百合碱(monocrotaline,MCT)诱发的肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)大鼠肺动脉钙离子通道的影响。方法:胶原酶消化法分离培养ADMSCs。雄性SD大鼠24只,分为正常对照组(Ctr组)、PAH组和ADMSCs组,每组8只。右心导管法测定大鼠的平均肺动脉压(MPAP);称重法测右心室肥厚指数(RVHI);分别用RT-PCR及West-ern blotting法测定大鼠肺动脉干电压门控性钙离子通道α1c亚基(CaVα1c)肌浆/内质网Ca2+ATP酶2a(SERCA-2a)、三磷酸肌醇受体1(IP3R-1)、瞬时受体电位通道1(TRPC1)和TRPC6 mRNA和蛋白的表达水平。结果:(1)MCT注射4周后,与Ctr组相比,PAH组大鼠MPAP和RVHI均显著升高(P<0.05);ADMSCs移植2周后,与PAH组相比,ADMSCs组MPAP和RVHI均明显降低(P<0.05)。(2)与Ctr组相比,PAH组大鼠肺动脉CaVα1c、TRPC1和TRPC6 mRNA及蛋白表达水平均明显增强(P<0.05),SERCA-2a和IP3R-1 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与PAH组相比,ADMSCs组CaVα1c、TRPC1和TRPC6的表达均明显降低(P<0.05),SERCA-2a和IP3R-1的表达均明显增强(P<0.05)。结论:ADMSCs能有效地降低MCT诱发的PAH大鼠的肺动脉压力,减轻右心室肥厚。ADMSCs降低肺动脉压力可能与钙离子通道变化有关。 展开更多

关键词 脂肪间充质干细胞 肺动脉高压 钙通道

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替米沙坦对人血管内皮细胞炎性反应的影响及其相关机制 被引量：4

11

作者 郑晓新 徐尚华 +2 位作者 谢良地 许昌声 陶硕秋 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2010年第9期833-836,共4页

目的探讨替米沙坦对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎性反应的影响及与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的关系。方法酶消化法获取HUVECs。实验分8组:BSA组;AGEs组;以不同浓度替米沙坦刺激细胞30 min,再加A... 目的探讨替米沙坦对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎性反应的影响及与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的关系。方法酶消化法获取HUVECs。实验分8组:BSA组;AGEs组;以不同浓度替米沙坦刺激细胞30 min,再加AGEs,依次为TM 1组(1 nmol/L)、TM 2组(10 nmol/L)、TM 3组(100 nmol/L)、TM 4组(1000 nmol/L);GW9662组:GW9662预先刺激细胞30 min后,加替米沙坦和AGEs;15d-PGJ_2组:15d-PGJ_2预先刺激细胞30 min后,加AGEs。各组均刺激细胞24 h。采用RT-PCR法检测PPARγ、AGEs受体(RAGE)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA的表达;荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸检测细胞内活性氧的变化。结果替米沙坦呈浓度依赖性抑制AGEs诱导的MCP-1 mRNA表达。与AGEs组比较,TM 4组和15d-PGJ_2组PPARγ mRNA水平明显升高,RAGE mRNA和MCP-1 mRNA水平明显下降,活性氧荧光信号强度明显减弱。与TM 4组比较,GW9662组PPARγ mRNA的表达水平明显下降,RAGE mRNA和MCP-1 mRNA的表达水平明显升高,活性氧荧光信号强度明显增强。结论替米沙坦可抑制AGEs诱导的HUVECs炎性反应;替米沙坦可能通过激活PPARγ抑制HUVECs炎性反应。 展开更多

关键词 糖基化终产物 高级 过氧化物酶体增殖物激活受体 趋化因子CCL2 脐静脉 内皮细胞

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大鼠HSP27基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定 被引量：4

12

作者 黄捷 谢良地 +1 位作者 许昌声 王华军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期488-492,共5页

目的构建大鼠的热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)RNA干扰慢病毒载体。方法设计并合成3对互补针对大鼠HSP27 mRNA的oligoDNA片段。磷酸化和退火后,分别克隆入pSUPER-basic质粒载体,获重组的pSU-PER-HSP27-oligoDNA。将其中表达s... 目的构建大鼠的热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)RNA干扰慢病毒载体。方法设计并合成3对互补针对大鼠HSP27 mRNA的oligoDNA片段。磷酸化和退火后,分别克隆入pSUPER-basic质粒载体,获重组的pSU-PER-HSP27-oligoDNA。将其中表达shRNA的结构酶切插入慢病毒转移质粒pNL-IRES2-EGFP,产生pNL-HSP27-IRES2-EGFP,在293T细胞中与VSVG、pHelper包装产生慢病毒。48 h后收集上清液,离心过滤后进行病毒滴度测定。用构建正确的慢病毒质粒载体感染血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cells,VSMCs),检测干扰效果。结果酶切和测序两种方法结果证明3种质粒载体的插入序列完全正确,慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为3.12×109fu.L-1。重组慢病毒质粒pNL-HSP27-IRES2-EGFP-1的RNA干扰效率最高,为0.771。结论成功构建靶向大鼠HSP27基因RNAi慢病毒载体。为进一步研究HSP27功能和用慢病毒进行基因治疗奠定基础。 展开更多

关键词 热休克蛋白27 RNA干扰 基因疗法 慢病毒

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人组织激肽释放酶基因重组腺病毒转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响 被引量：2

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作者 谢良地 余惠珍 +3 位作者 朱鹏立 许昌声 王华军 李体远 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期662-668,共7页

目的:探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCSHR)增殖和迁移的影响。方法:自行构建双顺反子重组腺病毒载体,携带强绿色荧光蛋白(EGFP... 目的:探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCSHR)增殖和迁移的影响。方法:自行构建双顺反子重组腺病毒载体,携带强绿色荧光蛋白(EGFP)标志基因和目的基因hKLK1;用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞生长周期;蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1的表达。采用改良Boyden微孔膜双槽法测定VSMCSHR迁移。结果:(1)hKLK1基因转移呈感染复数依赖性(20-100MOI)抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR生长,100MOI时抑制率为39.3%;呈时间依赖性抑制VSMCSHR生长,第5d时达高峰,抑制率为35.2%。(2)hKLK1基因转移可显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,峰值抑制率为30.2%(P<0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期的VSMCSHR明显增多,最大阻滞率为36.4%(P<0.01),而缓激肽B2受体特异性阻断剂Hoe140逆转了hKLK的抑制作用。(3)hKLK1基因转移明显上调PDGF-BB诱导VSMCSHR的p27Kip1、p21Cip1表达,Hoe140明显降低p27Kip1、p21Cip1表达。(4)hKLK1基因转移可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR细胞迁移,抑制率为34.6%,且Hoe140不影响该抑制作用。结论:hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,主要由缓激肽B2受体介导的,通过上调细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1表达的途径。而hKLK1基因转移抑制VSMCSHR迁移效应可能不通过B2受体。 展开更多

关键词 组织激肽释放酶1 基因转移 细胞增殖 细胞迁移 血管平滑肌细胞

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雷洛昔芬对去卵巢大鼠血脂的影响 被引量：2

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作者 陈小明 张廷星 +2 位作者 许昌声 王华军 吴可贵 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2008年第2期128-130,共3页

目的探讨选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬对去卵巢大鼠血脂的影响。方法将40只3月龄雌性SD大鼠随机分为5组,去卵巢组、假手术组、雌激素组、小剂量雷洛昔芬组(小剂量组)和大剂量雷洛昔芬组(大剂量组),每组8只。治疗3个月后,测量各组治... 目的探讨选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬对去卵巢大鼠血脂的影响。方法将40只3月龄雌性SD大鼠随机分为5组,去卵巢组、假手术组、雌激素组、小剂量雷洛昔芬组(小剂量组)和大剂量雷洛昔芬组(大剂量组),每组8只。治疗3个月后,测量各组治疗前后体重、血压和血脂的变化。结果去卵巢组TC和LDL-C显著高于其他4组(P<0.01),雌激素组与假手术组比较无统计学差异(P>0.05),与小剂量组比较,大剂量组能更进一步降低TC和LDL-C(P<0.05)。去卵巢组TG与假手术组比较稍有升高,但无统计学差异,雌激素组TG高于假手术组和大、小剂量组(P<0.05)。去卵巢组HDL-C明显低于其他4组(P<0.01),雌激素组HDL-C与假手术组比较无统计学差异(P>0.05),与小剂量组比较,大剂量组能更进一步升高HDL-C(P<0.05)。结论雷洛昔芬可改善去卵巢大鼠的脂代谢状况,有助于降低绝经后的心血管危险。 展开更多

关键词 雷洛昔芬 卵巢切除术 选择性雌激素受体调节剂 高脂血症 大鼠

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人组织激肽释放酶基因转移对血管平滑肌细胞迁移的影响 被引量：2

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作者 余惠珍 谢良地 +1 位作者 朱鹏立 许昌声 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期746-749,共4页

目的探讨重组腺病毒介导的人激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)的血管平滑肌细胞(VSMCSHR)迁移的影响。方法自行构建携带目的基因hKLK1和强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双顺反子重... 目的探讨重组腺病毒介导的人激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)的血管平滑肌细胞(VSMCSHR)迁移的影响。方法自行构建携带目的基因hKLK1和强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双顺反子重组腺病毒载体。采用组织贴块法培养SHR胸主动脉血管平滑肌细胞,接种第3～6代VSMCSHR于6孔板,分别加入含hKLK1重组腺病毒和对照病毒干预,3d后加入PDGF-BB诱导24h,采用改良Boyden微孔膜双槽法测定VSMCSHR迁移,并加入缓激肽受体B2特异性阻断剂Hoe140。RT-PCR法测定缓激肽B1受体、B2受体的mRNA表达。结果hKLK1基因转移可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR细胞迁移,抑制率为34.6%,且Hoe140干预不产生影响。PDGF-BB诱导的VSMCSHR缓激肽B2受体mRNA表达明显增加(P<0.001),而Hoe140可明显降低其表达(P<0.01)。结论重组腺病毒介导的hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR迁移,这一效应可能不通过B2受体途径介导。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶1 基因转移 血管平滑肌细胞 细胞迁移 缓激肽受体

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阿霉素致大鼠心衰心肌肌球蛋白重链变化 被引量：2

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作者 王华军 陈金水 +3 位作者 陈小明 吴天敏 许昌声 谢良地 《中国实验动物学杂志》 CAS 2001年第4期202-202,共1页

关键词 阿霉素 肌球蛋白重链 心衰 大鼠 临床应用 ADR 肿瘤 变化 程度 作用

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人脂联素基因慢病毒载体在293 T细胞中的表达及意义 被引量：3

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作者 黄杰 谢良地 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期928-932,共5页

目的构建携带人脂联素(human apM1,hapM1)基因的慢病毒载体,并观察其在293 T细胞中的表达及意义。方法将hapM1的编码区(CDS区)从克隆载体上亚克隆到慢病毒载体上,构建重组慢病毒载体质粒。在脂质体介导下与包装质粒HELPER、包膜质粒VSV... 目的构建携带人脂联素(human apM1,hapM1)基因的慢病毒载体,并观察其在293 T细胞中的表达及意义。方法将hapM1的编码区(CDS区)从克隆载体上亚克隆到慢病毒载体上,构建重组慢病毒载体质粒。在脂质体介导下与包装质粒HELPER、包膜质粒VSVG共转染293 T细胞包装生产慢病毒。慢病毒感染293 T细胞后,RT-PCR和Westernblot法检测在293 T细胞中hapM1基因的表达。采用抑制血管平滑肌细胞增殖实验,检测表达产物的生物学活性。结果hapM1基因经测序后与GenBank报道序列完全一致。重组慢病毒载体质粒PNL-hapM1-IRES2-EGFP经鉴定正确。三质粒共转染293 T细胞成功,收集、浓缩病毒后测定其滴度为2.0×105TU·L-1。感染293 T细胞后RT-PCR、Western blot检测hapM1组细胞有hapM1蛋白表达,其余两组(Mock-293 T组、293 T组)均无表达。表达产物hapM1蛋白能够抑制血管平滑肌细胞的增殖。结论成功构建带有hapM1基因慢病毒载体,并且能够在293 T细胞中表达具有生物学活性的hapM1蛋白。 展开更多

关键词 脂联素 慢病毒载体 293 T细胞 血管平滑肌细胞

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脂肪组织基质血管组分移植对阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能的影响 被引量：1

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作者 庄伟 谢良地 +3 位作者 许昌声 王华军 沈逸华 陈明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期2030-2033,共4页

目的:观察脂肪组织基质血管组分(SVF)静脉移植对阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能的影响,并探讨其可能的机制。方法:胶原酶体外分离培养SD大鼠SVF,并用绿色荧光蛋白标记。雄性SD大鼠28只随机分为正常对照组(n=8)、阿霉素对照组(n=10)和SV... 目的:观察脂肪组织基质血管组分(SVF)静脉移植对阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能的影响,并探讨其可能的机制。方法:胶原酶体外分离培养SD大鼠SVF,并用绿色荧光蛋白标记。雄性SD大鼠28只随机分为正常对照组(n=8)、阿霉素对照组(n=10)和SVF治疗组(n=10);15 mg/kg阿霉素腹腔注射,每周2次,连续4周,建立大鼠心力衰竭模型;SVF治疗组予以阴茎静脉移植SVF(1×107/L细胞0.5 mL),其余两组给予等量PBS注射。移植4周后,经导管多导生理仪测定心功能;冰冻切片荧光显微镜检测SVF在心肌组织中归巢情况;免疫组化法检测新生血管内皮标志物CD31的表达。结果:(1)与阿霉素对照组相比,SVF治疗组左室收缩压峰值[LVSP,(135.65±21.58)mmHg vs(105.58±22.62)mmHg,P<0.05]、左室压最大上升速率[+dp/dt max,(4 815.65±566.24)mmHg/s vs(3 535.50±465.28)mmHg/s,P<0.05]和左室压最大下降速率[-dp/dt max,(3 677.56±467.75)mmHg/s vs(2 738.65±512.51)mmHg/s,P<0.05]均显著增加,但仍低于正常对照组;(2)SVF治疗组CD31免疫组化显示细胞核染色及棕黄色颗粒沉着分布较阿霉素对照组均匀,每个视野的血管数显著增多。结论:SVF移植可明显改善阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能,部分机制可能与其促进心肌组织血管再生有关。 展开更多

关键词 基质血管组分 阿霉素 心力衰竭 血管内皮 大鼠

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NPM1 A型突变体对TGF-β1诱导K562细胞增殖及AKT磷酸化的影响 被引量：3

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作者 吴正财 王成艳 +2 位作者 吴香新 许昌声 林敏辉 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期164-168,共5页

目的:观察核仁磷酸蛋白(nucleophosmin 1,NPM1)A型突变体过表达对TGF-β1诱导的K562细胞增殖及AKT磷酸化的影响。方法:腺病毒载体(Ad5-NPM1)转染髓系白血病K562细胞建立过表达NPM1蛋白细胞株;应用Western blot法及ELISA法分别检测细胞N... 目的:观察核仁磷酸蛋白(nucleophosmin 1,NPM1)A型突变体过表达对TGF-β1诱导的K562细胞增殖及AKT磷酸化的影响。方法:腺病毒载体(Ad5-NPM1)转染髓系白血病K562细胞建立过表达NPM1蛋白细胞株;应用Western blot法及ELISA法分别检测细胞NPM1蛋白表达及上清液含量,Westernblot法检测K562细胞NPM1、AKT和P-AKT蛋白表达,MTT法检测细胞增殖。结果:K562细胞NPM1蛋白表达水平呈Ad5-NPM1转染复数[(multiplicity of infection,MOI):30-200]依赖性增加,与空载组(Ad5-vector-100)相比,Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组K562细胞及细胞上清液NPM1蛋白水平均显著增高(P<0.01)。TGF-β1(10ng/mL)能够诱导K562细胞AKT蛋白磷酸化,但对总AKT水平无明显影响。TGF-β1(10ng/mL)+Ad5-NPM1-100组K562细胞P-AKT水平显著高于TGF-β1处理组(P<0.05),各组总AKT水平无显著差别(P>0.05)。与空白对照组(CT)相比,TGF-β1(10ng/mL)处理可促进K562细胞增殖;但TGF-β1(10ng/mL)+Ad5-NPM1-100组细胞的增殖水平明显高于TGF-β1处理组(P<0.01)。结论:NPM1可促进TGF-β1诱导的K562细胞增殖。NPM1促进TGF-β1诱导的K562细胞可能与AKT磷酸化有关。 展开更多

关键词 核仁磷酸蛋白 K562细胞 TGF-Β1 P-AKT 细胞增殖

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