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大鼠HSP27基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
被引量：
4
1
作者
黄捷
谢良地
+1 位作者
许昌声
王华军
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期488-492,共5页
目的构建大鼠的热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)RNA干扰慢病毒载体。方法设计并合成3对互补针对大鼠HSP27 mRNA的oligoDNA片段。磷酸化和退火后,分别克隆入pSUPER-basic质粒载体,获重组的pSU-PER-HSP27-oligoDNA。将其中表达s...
目的构建大鼠的热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)RNA干扰慢病毒载体。方法设计并合成3对互补针对大鼠HSP27 mRNA的oligoDNA片段。磷酸化和退火后,分别克隆入pSUPER-basic质粒载体,获重组的pSU-PER-HSP27-oligoDNA。将其中表达shRNA的结构酶切插入慢病毒转移质粒pNL-IRES2-EGFP,产生pNL-HSP27-IRES2-EGFP,在293T细胞中与VSVG、pHelper包装产生慢病毒。48 h后收集上清液,离心过滤后进行病毒滴度测定。用构建正确的慢病毒质粒载体感染血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cells,VSMCs),检测干扰效果。结果酶切和测序两种方法结果证明3种质粒载体的插入序列完全正确,慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为3.12×109fu.L-1。重组慢病毒质粒pNL-HSP27-IRES2-EGFP-1的RNA干扰效率最高,为0.771。结论成功构建靶向大鼠HSP27基因RNAi慢病毒载体。为进一步研究HSP27功能和用慢病毒进行基因治疗奠定基础。
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关键词
热休克蛋白27
RNA干扰
基因疗法
慢病毒
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职称材料
题名
大鼠HSP27基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
被引量：
4
1
作者
黄捷
谢良地
许昌声
王华军
机构
福建医科大学附属第一医院福建省高血压病研究所
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期488-492,共5页
基金
福建省卫生厅医学创新课题资助项目(No2008J0082)
福建省教育厅教授学术发展基金资助项目(NoJS06042)
文摘
目的构建大鼠的热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)RNA干扰慢病毒载体。方法设计并合成3对互补针对大鼠HSP27 mRNA的oligoDNA片段。磷酸化和退火后,分别克隆入pSUPER-basic质粒载体,获重组的pSU-PER-HSP27-oligoDNA。将其中表达shRNA的结构酶切插入慢病毒转移质粒pNL-IRES2-EGFP,产生pNL-HSP27-IRES2-EGFP,在293T细胞中与VSVG、pHelper包装产生慢病毒。48 h后收集上清液,离心过滤后进行病毒滴度测定。用构建正确的慢病毒质粒载体感染血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cells,VSMCs),检测干扰效果。结果酶切和测序两种方法结果证明3种质粒载体的插入序列完全正确,慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为3.12×109fu.L-1。重组慢病毒质粒pNL-HSP27-IRES2-EGFP-1的RNA干扰效率最高,为0.771。结论成功构建靶向大鼠HSP27基因RNAi慢病毒载体。为进一步研究HSP27功能和用慢病毒进行基因治疗奠定基础。
关键词
热休克蛋白27
RNA干扰
基因疗法
慢病毒
Keywords
HSP27
RNA interference
gene therapy
lentivirus
分类号
R-332 [医药卫生]
R341 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大鼠HSP27基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
黄捷
谢良地
许昌声
王华军
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
4
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