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CD80-IgG1Fc融合蛋白修饰的HepG2细胞对淋巴细胞抗肿瘤免疫的影响 被引量:1
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作者 李频 李和军 +2 位作者 张家永 石国勋 郑祥雄 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期745-747,共3页
目的:探讨CD80-IgG1Fc段融合蛋白修饰的HepG2细胞对淋巴细胞抗肿瘤免疫的影响。方法:应用福建省临床免疫研究所构建的CD80-IgG1Fc段融合蛋白,修饰肝癌细胞株HepG2细胞,用流式细胞术检测修饰的HepG2细胞上CD80的表达。将修饰的HepG2细胞... 目的:探讨CD80-IgG1Fc段融合蛋白修饰的HepG2细胞对淋巴细胞抗肿瘤免疫的影响。方法:应用福建省临床免疫研究所构建的CD80-IgG1Fc段融合蛋白,修饰肝癌细胞株HepG2细胞,用流式细胞术检测修饰的HepG2细胞上CD80的表达。将修饰的HepG2细胞与健康人外周血淋巴细胞混合后进行培养,分别应用MTT比色法、乳酸脱氢酶释放试验;检测经CD80-IgG1Fc段融合蛋白修饰的HepG2细胞对外周血淋巴细胞增殖及其细胞毒性的影响。结果:CD80-IgG1Fc段融合蛋白可有效地结合于HepG2细胞膜上,结合的量在一定范围内与融合蛋白的浓度呈正相关(P<0.05)。融合蛋白修饰的HepG2细胞可明显刺激外周血淋巴细胞活化增殖并增强CTL的细胞毒活性(P<0.05)。结论:CD80在抗肿瘤免疫中起着重要作用,用CD80-IgG1Fc段融合蛋白修饰的HepG2肿瘤细胞能明显增强淋巴细胞的特异性抗肿瘤免疫,为CD80用于肿瘤免疫治疗的研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 CD80 融合蛋白 肿瘤免疫
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CD80-IgG1Fc段融合蛋白真核表达载体的构建及表达 被引量:3
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作者 李和军 李频 +1 位作者 周小玲 郑祥雄 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期40-42,46,共4页
目的构建人CD80-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在CHO细胞中进行表达。方法应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人CD80膜外段-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并将其转染入CHO细胞株... 目的构建人CD80-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在CHO细胞中进行表达。方法应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人CD80膜外段-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并将其转染入CHO细胞株并筛选,进行稳定表达。通过Western blot及ELISA法,检测融合蛋白的表达。结果成功地构建了真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcD-NA3.1(+),并建立CHO细胞稳定表达株。Western blot及ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达。结论成功地构建了人CD80膜外段-IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD80-IgG1Fc/pcDNA3.1(+),并在CHO细胞中稳定表达,为下一步抗肿瘤的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 CD80 IGG1 FC段 融合蛋白 基因克隆 真核表达
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CD40发夹siRNA真核表达载体构建及其对CA46细胞CD40表达的影响 被引量:5
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作者 陈凌 郑祥雄 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期163-166,共4页
 目的: 构建人类CD40膜蛋白siRNA的真核表达载体, 观察其对CA46细胞上CD40表达、细胞增殖能力和凋亡的影响。方法: 合成两条编码发夹siRNA序列的单链DNA,并将其克隆到pSilenCircle载体中, 构建含目的基因片段的重组质粒siCD40 /pSilenC...  目的: 构建人类CD40膜蛋白siRNA的真核表达载体, 观察其对CA46细胞上CD40表达、细胞增殖能力和凋亡的影响。方法: 合成两条编码发夹siRNA序列的单链DNA,并将其克隆到pSilenCircle载体中, 构建含目的基因片段的重组质粒siCD40 /pSilenCircle。以同样的方法, 分别构建相对应的编码反义RNA及无关基因的重组质粒antiCD40 /pSilenCir cle和siFly/pSilenCircle。以上述重组质粒分别瞬时转染CA46细胞后, 用流式细胞仪检测CA46细胞上CD40的表达和细胞凋亡情况, 用MTS法(改良的MTT法)测定细胞的增殖能力。结果: ①成功地构建了两个CD40发夹siRNA的真核表达载体siCD40 /pSilenCircle、两个相对应的反义RNA真核表达载体antiCD40 /pSilenCircle和无关基因重组质粒siFly/pSilenCir cle。②与siFly/pSilenCircle转染组相比较, siCD40 /pSilenCir cle转染组和antiCD40 /pSilenCircle转染组CA46细胞上CD40的表达均明显减少, 但细胞的增殖能力和凋亡未发现明显变化。结论: 构建的两个CD40发夹siRNA的真核表达载体siCD40 /pSilenCircle, 可有效地抑制CA46细胞上CD40分子的表达, 但不影响细胞的增殖和凋亡。RNA干扰技术可望作为一种有效地调控基因功能的方法。 展开更多
关键词 RNAI SIRNA CD40 载体构建 CA46细胞
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呼吸道感染中白假丝酵母菌的致病性与细胞外水解酶关系 被引量:3
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作者 陈凌 赵亮 陈贻锴 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期50-53,共4页
将84株呼吸道分离的白假丝酵母菌分为致病组和非致病组,采用卵黄培养基法检测细胞外磷脂酶的活力,用牛血清白蛋白琼脂培养基法检法分泌型天冬氨酸蛋白酶的活力,并用RT-PCR的方法检测这2种酶相关基因PLB1和SAP2的表达情况,分析其组间差别... 将84株呼吸道分离的白假丝酵母菌分为致病组和非致病组,采用卵黄培养基法检测细胞外磷脂酶的活力,用牛血清白蛋白琼脂培养基法检法分泌型天冬氨酸蛋白酶的活力,并用RT-PCR的方法检测这2种酶相关基因PLB1和SAP2的表达情况,分析其组间差别,结果表明致病组菌株的分泌型天冬氨酸蛋白酶的活力要高于非致病组(P=0.034<0.05),细胞外磷脂酶活力二组未见差别,致病组的PLB1和SAP2基因的表达均高于非致病组(P<0.05),PLB1和SAP2的表达存在着明显的正相关(r=0.776,P<0.01),提示分泌型天冬氨酸蛋白酶是呼吸道白假丝酵母菌重要的毒力因子,PLB1和SAP2的表达上调可能影响菌株的毒力,这2个基因的表达量有正相关的关系。 展开更多
关键词 白假丝酵母菌 磷脂酶 蛋白酶
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反义CD40 RNA对EB病毒转化的B细胞CD40分子表达和增殖能力的影响
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作者 郑祥雄 李和军 +1 位作者 李频 周小玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期506-507,510,共3页
目的 :探讨瞬时表达的反义CD4 0RNA ,对EB病毒转化的健康人B细胞膜表面CD4 0分子表达和增殖能力的影响。方法 :应用T A克隆技术和亚克隆技术 ,构建人反义CD4 0RNA的真核表达载体pcDNA3/CD4 0 ,并以其转染本室建立的EB病毒转化的健康人B... 目的 :探讨瞬时表达的反义CD4 0RNA ,对EB病毒转化的健康人B细胞膜表面CD4 0分子表达和增殖能力的影响。方法 :应用T A克隆技术和亚克隆技术 ,构建人反义CD4 0RNA的真核表达载体pcDNA3/CD4 0 ,并以其转染本室建立的EB病毒转化的健康人B细胞。应用流式细胞仪 (FACS) ,检测B细胞膜上CD4 0分子表达的变化。应用MTT比色法检测反义CD4 0RNA对B细胞增殖能力的影响。结果 :与转染空载体pcDNA3组相比 ,转染pcDNA3/CD4 0细胞上CD4 0分子的表达降低 (P<0 .0 1) ,其增殖能力明显降低 (P <0 .0 1)。结论 :反义CD4 0RNA技术 ,可作为有效的免疫调控手段。CD4 展开更多
关键词 反义RNA B淋巴细胞 CD40 表达 细胞增殖 EB病毒转化
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