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pcDNA3-TIMP-2的构建与表达
被引量：
1
1
作者
王长谦
王顺
+6 位作者
汤大鸣
林旭
丁弘毅
谢秀兰
徐依敏
王彬尧
黄定九
《上海第二医科大学学报》
CAS
CSCD
2004年第6期413-416,420,共5页
目的构建TIMP-2基因的真核表达载体pcDNA3-TIMP-2,并探讨其体外表达效果。方法应用已克隆得到的人TIMP-2基因和分子克隆技术构建pcDNA3-TIMP-2,酶切鉴定,并用体外培养人THP-1细胞,电穿孔转入pcDNA3-TIMP-2,RT-PCR和Western blotting分...
目的构建TIMP-2基因的真核表达载体pcDNA3-TIMP-2,并探讨其体外表达效果。方法应用已克隆得到的人TIMP-2基因和分子克隆技术构建pcDNA3-TIMP-2,酶切鉴定,并用体外培养人THP-1细胞,电穿孔转入pcDNA3-TIMP-2,RT-PCR和Western blotting分别检测外源基因转染效果,Zymography检测培养上清MMPs活性。结果构建pcDNA3-TIMP-2经酶切和测序鉴定正确,电穿孔法导入体外培养人THP-1细胞后,TIMP-2 mRNA约增加2.8倍,TIMP-2蛋白表达增加约2.7倍,MMP-2和MMP-9的活性分别约为对照组的32％和28％。结论成功构建了pcDNA3-TIMP-2,且证实有良好的体外转染和表达效果,为进行转移TIMPs基因抑制MMPs及探讨其与动脉粥样硬化等多种病理过程的关系奠定基础。
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关键词
pcDNA3-TIMP-2
基因表达
基因转染
基因克隆
MMPS
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职称材料
题名
pcDNA3-TIMP-2的构建与表达
被引量：
1
1
作者
王长谦
王顺
汤大鸣
林旭
丁弘毅
谢秀兰
徐依敏
王彬尧
黄定九
机构
上海第二
医科大
学仁济
医院
心内
科
福建医科大学第一附属医院肿瘤放疗科
出处
《上海第二医科大学学报》
CAS
CSCD
2004年第6期413-416,420,共5页
基金
上海市青年科技启明星计划资助项目(98QB14014)
文摘
目的构建TIMP-2基因的真核表达载体pcDNA3-TIMP-2,并探讨其体外表达效果。方法应用已克隆得到的人TIMP-2基因和分子克隆技术构建pcDNA3-TIMP-2,酶切鉴定,并用体外培养人THP-1细胞,电穿孔转入pcDNA3-TIMP-2,RT-PCR和Western blotting分别检测外源基因转染效果,Zymography检测培养上清MMPs活性。结果构建pcDNA3-TIMP-2经酶切和测序鉴定正确,电穿孔法导入体外培养人THP-1细胞后,TIMP-2 mRNA约增加2.8倍,TIMP-2蛋白表达增加约2.7倍,MMP-2和MMP-9的活性分别约为对照组的32％和28％。结论成功构建了pcDNA3-TIMP-2,且证实有良好的体外转染和表达效果,为进行转移TIMPs基因抑制MMPs及探讨其与动脉粥样硬化等多种病理过程的关系奠定基础。
关键词
pcDNA3-TIMP-2
基因表达
基因转染
基因克隆
MMPS
Keywords
tissue inhibitor of metalloproteinase
gene cloning
gene transfection
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pcDNA3-TIMP-2的构建与表达
王长谦
王顺
汤大鸣
林旭
丁弘毅
谢秀兰
徐依敏
王彬尧
黄定九
《上海第二医科大学学报》
CAS
CSCD
2004
1
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