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幽门螺杆菌oipA基因片段的克隆表达及抗原性分析
被引量：
2
1
作者
佘菲菲
李妮
+1 位作者
林旭
陈豪
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期351-355,共5页
目的:分片段克隆表达幽门螺杆菌oipA基因,确定抗原性最强的重组蛋白肽段。方法:从Hp国际标准株NCTC11637中获取oipA全长基因,克隆至pGEM-T载体并鉴定正确,以重组pGEM-T/oipA为模板PCR扩增6个不同大小的oipA基因片段,与表达载体pET-42a连...
目的:分片段克隆表达幽门螺杆菌oipA基因,确定抗原性最强的重组蛋白肽段。方法:从Hp国际标准株NCTC11637中获取oipA全长基因,克隆至pGEM-T载体并鉴定正确,以重组pGEM-T/oipA为模板PCR扩增6个不同大小的oipA基因片段,与表达载体pET-42a连接,转化大肠杆菌BL-21,重组子经PCR、酶切、测序鉴定。IPTG诱导重组蛋白肽段的表达,经Western Breeze化学发光法鉴定融合蛋白;优化诱导时间和IPTG浓度,诱导重组蛋白大量表达;Ni-NTA His·Bind树脂亲和纯化表达产物;羊抗Hp多克隆抗体,Western blot法检测纯化蛋白的抗原性,间接ELISA法筛选抗原性最强的重组肽段。结果:6条oipA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达,表达的蛋白肽段均可被抗Hp多克隆抗体识别,具有抗原性,其中反应性最强的是最小的蛋白肽段。结论:oipA基因片段可在原核系统中表达,所获取的最小的肽段抗原性最强,可望制备检测血清相应抗体的试剂盒。
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关键词
幽门螺杆菌
oipA基因片段
克隆
表达
抗原性
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职称材料
构建携带幽门螺杆菌oipA核酸的减毒沙门重组菌株及其免疫保护作用的初步研究
2
作者
林妙端
陈建森
+1 位作者
佘菲菲
陈豪
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期335-340,共6页
目的:优化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)oipA核酸疫苗,构建含oipA核酸的SL7207(减毒伤寒沙门氏菌)重组菌株,并研究其在防御H.pylori感染中的作用。方法:对oipA基因进行密码子优化,Kozak前导序列添加、CpG序列优化,将oipA优...
目的:优化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)oipA核酸疫苗,构建含oipA核酸的SL7207(减毒伤寒沙门氏菌)重组菌株,并研究其在防御H.pylori感染中的作用。方法:对oipA基因进行密码子优化,Kozak前导序列添加、CpG序列优化,将oipA优化前后的基因分别克隆入pVAX1真核表达载体,获得pVAX1-oipA和pVAX1-optioipA重组子,将上述重组子与空载体pVAX1瞬时转染AGS细胞,应用Western blot检测转染细胞中OipA蛋白的表达。将重组子转化LB5000进行甲基化修饰,利用修饰后重组子转化终宿主菌SL7207,提取SL7207/pVAX1-oipA,SL7207/pVAX1-optioipA菌株质粒进行PCR,酶切鉴定。用SL7207/pVAX1-oipA和SL7207/pVAX1-optioipA免疫C57BL/6小鼠,末次免疫2周后检测抗OipA抗体,并在末次免疫4周后予H.pyloriSS1(5×108CFU/只)攻击,攻击3次,隔天一次,攻击4周后处死动物,取胃组织做快速尿素酶实验和H.pylori定量培养以检测H.pylori感染状况。结果:pVAX1-oipA、pVAX1-optioipA均可在AGS细胞中表达,且pVAX1-optioipA的OipA蛋白表达量高于pVAX1-oipA;从SL7207/pVAX1-oipA和SL7207/pVAX1-optioipA抽提的质粒,经PCR,酶切鉴定正确;免疫小鼠血清中产生抗OipA蛋白的特异性抗体IgG,且pVAX1-optioipA疫苗组诱导IgG水平明显高于pVAX1-oipA疫苗组(P<0.01);pVAX1-oipA、pVAX1-optioipA疫苗组H.pylori感染率分别为60%(9/15)、26.67%(4/15),明显低于对照组100%(10/10)(P<0.01)。结论:成功构建携带pVAX1-oipA,pVAX1-optioipA的SL7207重组菌株,并验证其对C57BL/6小鼠H.pylori感染具有免疫预防作用,且优化oipA基因有助于提高免疫保护效果。
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关键词
幽门螺杆菌
oipA基因
核酸疫苗
优化
减毒沙门菌
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职称材料
题名
幽门螺杆菌oipA基因片段的克隆表达及抗原性分析
被引量：
2
1
作者
佘菲菲
李妮
林旭
陈豪
机构
福建医科大学病原生物学系福建省感染与肿瘤重点实验室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期351-355,共5页
基金
福建省重大专项前期研究项目(2005Y21009)
福建省发改委项目(06A0171)
文摘
目的:分片段克隆表达幽门螺杆菌oipA基因,确定抗原性最强的重组蛋白肽段。方法:从Hp国际标准株NCTC11637中获取oipA全长基因,克隆至pGEM-T载体并鉴定正确,以重组pGEM-T/oipA为模板PCR扩增6个不同大小的oipA基因片段,与表达载体pET-42a连接,转化大肠杆菌BL-21,重组子经PCR、酶切、测序鉴定。IPTG诱导重组蛋白肽段的表达,经Western Breeze化学发光法鉴定融合蛋白;优化诱导时间和IPTG浓度,诱导重组蛋白大量表达;Ni-NTA His·Bind树脂亲和纯化表达产物;羊抗Hp多克隆抗体,Western blot法检测纯化蛋白的抗原性,间接ELISA法筛选抗原性最强的重组肽段。结果:6条oipA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达,表达的蛋白肽段均可被抗Hp多克隆抗体识别,具有抗原性,其中反应性最强的是最小的蛋白肽段。结论:oipA基因片段可在原核系统中表达,所获取的最小的肽段抗原性最强,可望制备检测血清相应抗体的试剂盒。
关键词
幽门螺杆菌
oipA基因片段
克隆
表达
抗原性
Keywords
Helicobacter pylori
oipA gene fragment
Clone
Expression
Antigenicity
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
构建携带幽门螺杆菌oipA核酸的减毒沙门重组菌株及其免疫保护作用的初步研究
2
作者
林妙端
陈建森
佘菲菲
陈豪
机构
福建医科大学病原生物学系福建省感染与肿瘤重点实验室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期335-340,共6页
基金
2009年福建省科技计划重点项目(2009Y0024)
文摘
目的:优化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)oipA核酸疫苗,构建含oipA核酸的SL7207(减毒伤寒沙门氏菌)重组菌株,并研究其在防御H.pylori感染中的作用。方法:对oipA基因进行密码子优化,Kozak前导序列添加、CpG序列优化,将oipA优化前后的基因分别克隆入pVAX1真核表达载体,获得pVAX1-oipA和pVAX1-optioipA重组子,将上述重组子与空载体pVAX1瞬时转染AGS细胞,应用Western blot检测转染细胞中OipA蛋白的表达。将重组子转化LB5000进行甲基化修饰,利用修饰后重组子转化终宿主菌SL7207,提取SL7207/pVAX1-oipA,SL7207/pVAX1-optioipA菌株质粒进行PCR,酶切鉴定。用SL7207/pVAX1-oipA和SL7207/pVAX1-optioipA免疫C57BL/6小鼠,末次免疫2周后检测抗OipA抗体,并在末次免疫4周后予H.pyloriSS1(5×108CFU/只)攻击,攻击3次,隔天一次,攻击4周后处死动物,取胃组织做快速尿素酶实验和H.pylori定量培养以检测H.pylori感染状况。结果:pVAX1-oipA、pVAX1-optioipA均可在AGS细胞中表达,且pVAX1-optioipA的OipA蛋白表达量高于pVAX1-oipA;从SL7207/pVAX1-oipA和SL7207/pVAX1-optioipA抽提的质粒,经PCR,酶切鉴定正确;免疫小鼠血清中产生抗OipA蛋白的特异性抗体IgG,且pVAX1-optioipA疫苗组诱导IgG水平明显高于pVAX1-oipA疫苗组(P<0.01);pVAX1-oipA、pVAX1-optioipA疫苗组H.pylori感染率分别为60%(9/15)、26.67%(4/15),明显低于对照组100%(10/10)(P<0.01)。结论:成功构建携带pVAX1-oipA,pVAX1-optioipA的SL7207重组菌株,并验证其对C57BL/6小鼠H.pylori感染具有免疫预防作用,且优化oipA基因有助于提高免疫保护效果。
关键词
幽门螺杆菌
oipA基因
核酸疫苗
优化
减毒沙门菌
Keywords
Helicobacter pylori（H.pylori）
oipA gene
DNA vaccine
Optimization
Attenuated s.typhimurium
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
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被引量
操作
1
幽门螺杆菌oipA基因片段的克隆表达及抗原性分析
佘菲菲
李妮
林旭
陈豪
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
在线阅读
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职称材料
2
构建携带幽门螺杆菌oipA核酸的减毒沙门重组菌株及其免疫保护作用的初步研究
林妙端
陈建森
佘菲菲
陈豪
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
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