粪肠球菌心内膜抗原efaA基因转化株的构建及其对生物膜形成的影响 被引量：4

1

作者 强华 刘光英 +2 位作者 朱苹 陈豪 郑晓辉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1133-1136,共4页

目的构建粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因转化株,探讨efaA基因在肠球菌生物膜形成及感染性心内膜炎致病中的作用。方法 PCR扩增粪肠球菌efaA基因,构建pAT28-efaA重组子,经PCR、双酶切及测序鉴定,将重组子转化到efaA-野生株S14做为转化株(S... 目的构建粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因转化株,探讨efaA基因在肠球菌生物膜形成及感染性心内膜炎致病中的作用。方法 PCR扩增粪肠球菌efaA基因,构建pAT28-efaA重组子,经PCR、双酶切及测序鉴定,将重组子转化到efaA-野生株S14做为转化株(S14-pAT28-efaA);同时将空质粒pAT28转化到野生株作为对照株(S14-pAT28);IPTG诱导efaA表达,SDS-PAGE、Western Blot分析鉴定。微量滴定板法测定生物膜形成能力。将S14、S14-pAT28、S14-pAT28-efaA分别接种到96孔板,37℃培养24h形成生物膜,结晶紫染色,测定孔板底部在595nm的OD值,比较efaA基因转化前后的生物膜形成能力。结果成功构建粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因转化株;转化株的OD595值大于野生株及空质粒转化株,P<0.05,空质粒转化株的OD595值与野生株比较差异无统计学意义,P>0.05。结论粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因有利于肠球菌生物膜的形成。 展开更多

关键词 粪肠球菌 粪肠球菌心内膜炎抗原efaA 转化 生物膜

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粪肠球菌心内膜炎抗原EfaA在生物膜形成中的作用 被引量：3

2

作者 强华 朱苹 +2 位作者 刘光英 吴海珍 林任玺 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期938-941,共4页

目的探讨粪肠球菌心内膜炎抗原EfaA在生物膜形成中的作用。方法微量滴定板法测定生物膜形成能力,将efaA+、efaA-粪肠球菌S14、S14-pAT28、S14-pAT28-efaA分别接种到96孔板,37℃培养24h形成生物膜,结晶紫染色,测定孔板底部生物膜的OD570... 目的探讨粪肠球菌心内膜炎抗原EfaA在生物膜形成中的作用。方法微量滴定板法测定生物膜形成能力,将efaA+、efaA-粪肠球菌S14、S14-pAT28、S14-pAT28-efaA分别接种到96孔板,37℃培养24h形成生物膜,结晶紫染色,测定孔板底部生物膜的OD570值;MTT法比较S14、S14-pAT28、S14-pAT28-efaA所形成的生物膜的活菌含量OD492;共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察比较efaA+、efaA-肠球菌形成的生物膜的平均厚度、最大厚度。结果 efaA+转化株在各培养时间点微量滴定板法测定的生物膜形成能力OD570值、MTT法测定的OD492活菌含量、CLSM观察的生物膜的平均厚度、最大厚度均大于野生株及空质粒转化株,P<0.05;空质粒转化株与野生株比较无显著性差别,P>0.05。结论粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因有利于肠球菌生物膜的形成。 展开更多

关键词 粪肠球菌 粪肠球菌心内膜炎抗原efaA 共聚焦激光扫描显微镜(CLSM) 生物膜

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肠球菌溶血素与其致病力的关系 被引量：9

3

作者 强华 林建银 +3 位作者 蒋明森 王耿夏 佘菲菲 苏东辉 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期68-70,共3页

目的　探讨肠球菌溶血素的毒力因子作用。方法　分别检测 3 9株临床标本分离的粪肠球菌以及 3 1株健康人群粪便分离的粪肠球菌的溶血素检出率 ;并检测了β溶血肠球菌、非 β溶血肠球菌对 9种抗生素的敏感性。 结果　临床菌株的溶血素检... 目的　探讨肠球菌溶血素的毒力因子作用。方法　分别检测 3 9株临床标本分离的粪肠球菌以及 3 1株健康人群粪便分离的粪肠球菌的溶血素检出率 ;并检测了β溶血肠球菌、非 β溶血肠球菌对 9种抗生素的敏感性。 结果　临床菌株的溶血素检出率为 5 8.9% ,健康人群分离株的溶血素检出率为 19.3 % (P <0 .0 0 5 ) ;β溶血株对抗生素的耐药性明显高于非 β溶血株 (P <0 .0 1)。 展开更多

关键词 肠球菌 溶血素 毒力 耐药

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P菌毛粘附素在致肾盂肾炎大肠埃希菌对小鼠尿道上行感染中的作用 被引量：6

4

作者 郑铃 洪新如 +2 位作者 陈豪 刘超斌 陈锦英 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期477-480,共4页

目的 比较2株具有不同P菌毛粘附素(PapG)的同血清型UPEC和1株无菌毛大肠埃希菌对小鼠泌尿道上行感染性的差异,探讨粘附素在UPEC尿道感染中的作用。方法 通过17PEC尿道内接种形成BALB/c小鼠尿道上行感染;观察尿液、肾脏剖面的菌落计数和... 目的 比较2株具有不同P菌毛粘附素(PapG)的同血清型UPEC和1株无菌毛大肠埃希菌对小鼠泌尿道上行感染性的差异,探讨粘附素在UPEC尿道感染中的作用。方法 通过17PEC尿道内接种形成BALB/c小鼠尿道上行感染;观察尿液、肾脏剖面的菌落计数和肾组织的病理改变。结果 具有P菌毛的UPEC菌株感染之小鼠,在其尿液和肾剖面培养出大量原感染菌,肾组织呈现中、重度急性肾盂肾炎的病理改变;不同P菌毛粘附素的UPEC感染的菌落计数、肾脏病理改变严重度无显著性差异;无菌毛大肠埃希菌感染之小鼠,其尿液和肾剖面只有少量原感染茵生长,肾组织为轻至中度急性炎症改变。结论具有不同粘附素之P菌毛在介导UPEC致小鼠上行性急性肾盂肾炎中均发挥重要作用;无菌毛大肠埃希菌亦可导致小鼠肾脏炎性改变。 展开更多

关键词 致肾盂肾炎大肠埃希菌 PapG粘附素 尿道上行感染 菌落计数 肾组织 病理

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华支睾吸虫与肝/胆癌发病机制 被引量：9

5

作者 程艳洁 姚丽君 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期275-278,共4页

关键词 华支睾吸虫 发病机制 胆癌 寄生虫感染 肝 肿瘤

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粪肠球菌心内膜炎抗原efaA蛋白的原核表达及纯化 被引量：3

6

作者 强华 吴海珍 +1 位作者 羽晓瑜 朱苹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期168-170,共3页

目的原核表达纯化粪肠球菌心内膜炎抗原efaA蛋白,为粪肠球菌心内膜炎的致病机制研究及临床血清学诊断奠定基础。方法从粪肠球菌中扩增efaA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET30a中,构建pET30a-efaA重组质粒。经BamhI、XhoI酶切及测... 目的原核表达纯化粪肠球菌心内膜炎抗原efaA蛋白,为粪肠球菌心内膜炎的致病机制研究及临床血清学诊断奠定基础。方法从粪肠球菌中扩增efaA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET30a中,构建pET30a-efaA重组质粒。经BamhI、XhoI酶切及测序鉴定,将pET30a-efaA质粒转化入BL21(DE3)。以IPTG诱导BL21(DE3)表达efaA融合蛋白,亲和层析纯化重组蛋白,SDS-PAGE、WesternBlot分析鉴定。结果PCR体外扩增efaA基因产物约943bp,重组表达质粒pET30a-efaA在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过亲和层析获得纯化重组蛋白。SDS-PAGE、Western免疫印迹显示蛋白表达带的分子量约为34kd。结论粪肠球菌心内膜炎抗原efaA蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达并纯化。 展开更多

关键词 肠球菌 粪肠球菌心内膜炎抗原 efaA 原核表达

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杀灭齿龈内阿米巴的药物实验研究 被引量：5

7

作者 刘光英 陈金富 +1 位作者 李常春 陈卓 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期108-109,63,共3页

关键词 齿龈内阿米巴 药物治疗 实验研究

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嗜酸乳杆菌对球形幽门螺杆菌的细胞黏附和增殖作用的影响 被引量：2

8

作者 吴小茜 佘菲菲 +2 位作者 李能 郑秀芬 陈月秀 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1021-1024,1040,共5页

目的研究球形幽门螺杆菌(Hp)对AGS细胞的黏附和增殖作用及热灭活状态和活菌状态嗜酸乳杆菌对其产生的影响。方法制备AGS细胞爬片,按球形Hp对照组、球形Hp与活/灭活嗜酸乳杆菌实验组加入细菌,电镜、革兰染色后光镜观察Hp对AGS细胞黏附指... 目的研究球形幽门螺杆菌(Hp)对AGS细胞的黏附和增殖作用及热灭活状态和活菌状态嗜酸乳杆菌对其产生的影响。方法制备AGS细胞爬片,按球形Hp对照组、球形Hp与活/灭活嗜酸乳杆菌实验组加入细菌,电镜、革兰染色后光镜观察Hp对AGS细胞黏附指数,同时用荧光抗体染色法评价黏附于AGS细胞的Hp密度。运用CCK-8比色法检测球形Hp对AGS细胞的增殖影响及比较加入嗜酸乳杆菌产生的变化。结果实验组与对照组比较,球形Hp对细胞的黏附指数及黏附密度均明显下降(P<0.05)。低浓度的球形Hp促进细胞增殖,高浓度的球形Hp抑制细胞增殖。两种不同状态的嗜酸乳杆菌均能降低Hp对AGS细胞增殖的影响。结论球形Hp对AGS细胞具有黏附能力并随浓度不同对其产生不同增殖影响,嗜酸乳杆菌能降低其作用。 展开更多

关键词 嗜酸乳杆菌 球形幽门螺杆菌 黏附 增殖

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致肾盂肾炎大肠埃希菌粘附素重组蛋白诱导小鼠免疫应答 被引量：2

9

作者 郑铃 洪新如 +2 位作者 陈豪 郑秀芬 陈锦英 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期851-854,共4页

目的获得UPECP菌毛粘附素PapG重组蛋白纯化产物,研究其诱导小鼠的免疫应答,为进一步的PapG疫苗及免疫学研究创造条件。方法GST-PapG重组蛋白经诱导表达和亲和层析纯化后接种于BALB/c小鼠;ELISA法检测小鼠免疫血清的抗体效价,以血凝抑制... 目的获得UPECP菌毛粘附素PapG重组蛋白纯化产物,研究其诱导小鼠的免疫应答,为进一步的PapG疫苗及免疫学研究创造条件。方法GST-PapG重组蛋白经诱导表达和亲和层析纯化后接种于BALB/c小鼠;ELISA法检测小鼠免疫血清的抗体效价,以血凝抑制试验测定其免疫反应性。结果重组蛋白纯化产物可诱导小鼠产生针对PapG粘附素的特异性免疫应答,免疫小鼠血清抗体的效价显著升高,而且具有较强的血凝抑制作用。结论GST-PapG重组蛋白纯化产物具有良好的免疫原性,可用于UPEC抗粘附候选疫苗的筛选和进一步的免疫学研究。 展开更多

关键词 致肾盂肾炎大肠埃希菌 PapG粘附素 重组蛋白 免疫应答

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幽门螺杆菌oipA基因片段的克隆表达及抗原性分析 被引量：2

10

作者 佘菲菲 李妮 +1 位作者 林旭 陈豪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期351-355,共5页

目的:分片段克隆表达幽门螺杆菌oipA基因,确定抗原性最强的重组蛋白肽段。方法:从Hp国际标准株NCTC11637中获取oipA全长基因,克隆至pGEM-T载体并鉴定正确,以重组pGEM-T/oipA为模板PCR扩增6个不同大小的oipA基因片段,与表达载体pET-42a连... 目的:分片段克隆表达幽门螺杆菌oipA基因,确定抗原性最强的重组蛋白肽段。方法:从Hp国际标准株NCTC11637中获取oipA全长基因,克隆至pGEM-T载体并鉴定正确,以重组pGEM-T/oipA为模板PCR扩增6个不同大小的oipA基因片段,与表达载体pET-42a连接,转化大肠杆菌BL-21,重组子经PCR、酶切、测序鉴定。IPTG诱导重组蛋白肽段的表达,经Western Breeze化学发光法鉴定融合蛋白;优化诱导时间和IPTG浓度,诱导重组蛋白大量表达;Ni-NTA His·Bind树脂亲和纯化表达产物;羊抗Hp多克隆抗体,Western blot法检测纯化蛋白的抗原性,间接ELISA法筛选抗原性最强的重组肽段。结果:6条oipA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达,表达的蛋白肽段均可被抗Hp多克隆抗体识别,具有抗原性,其中反应性最强的是最小的蛋白肽段。结论:oipA基因片段可在原核系统中表达,所获取的最小的肽段抗原性最强,可望制备检测血清相应抗体的试剂盒。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 oipA基因片段 克隆 表达 抗原性

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在真核细胞中表达的幽门螺杆菌UreC,OipA抗原性的检测及其对细胞的作用 被引量：1

11

作者 张静 佘菲菲 +1 位作者 陈豪 陈月秀 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期682-686,共5页

目的:研究幽门螺杆菌(Hp)UreC、OipA基因重组子转染胃上皮细胞后表达产物的抗原性及其对胃上皮细胞的作用,为两种毒力因子DNA疫苗的研制提供可行性依据及安全性指标。方法:用RTPCR方法从国际标准株NCTC11637中获取UreC、OipA全长基因,... 目的:研究幽门螺杆菌(Hp)UreC、OipA基因重组子转染胃上皮细胞后表达产物的抗原性及其对胃上皮细胞的作用,为两种毒力因子DNA疫苗的研制提供可行性依据及安全性指标。方法:用RTPCR方法从国际标准株NCTC11637中获取UreC、OipA全长基因,克隆入pGEMTEasy载体并测序,以重组T载体为模板,将两种基因的开放读码框架分别定向克隆入pcDNA3.1载体;获得的重组子转染SGC7901细胞,筛选耐潮霉素的细胞克隆,用RTPCR及Immunoblot方法检测细胞内UreC、OipA蛋白的表达和抗原性;用荧光染色技术、MTT、流式细胞术分别检测UreC、OipA对细胞表型、增殖及凋亡的影响。结果:SoipA、SureC细胞(分别转染OipA、UreC重组子)表达相应的产物且具有抗原性。荧光显微镜下观察SoipA、SureC细胞未见明显形态学改变;用MTT法检测细胞增殖:SoipA、SureC细胞与SpcDNA3.1细胞(转染pcDNA3.1)比较,生长增殖无显著性差异(P>0.05),流式细胞技术检测细胞凋亡结果:SoipA和SureC的凋亡率与SpcDNA3.1比较无显著性差异(P>0.05)。结论:OipA、UreC在培养细胞内的表达产物具有抗原性且对细胞的功能无影响,可考虑用于制备DNA疫苗。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 UreC OIPA 细胞增殖 细胞凋亡 基因转染

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粪肠球菌溶血素cylL基因的原核表达 被引量：1

12

作者 强华 蒋燕成 +2 位作者 朱波 谢曼凌 吴小茜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期968-970,共3页

目的克隆表达粪肠球菌溶血素cylL基因,为制备单抗、开发疫苗及其致病机制研究奠定基础。方法从粪肠球菌中扩增溶血素cylL基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET42a中,构建pET-cylL重组质粒。将pET-cylL质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经... 目的克隆表达粪肠球菌溶血素cylL基因,为制备单抗、开发疫苗及其致病机制研究奠定基础。方法从粪肠球菌中扩增溶血素cylL基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET42a中,构建pET-cylL重组质粒。将pET-cylL质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经KpnI、XhoI酶切及测序鉴定,以IPTG诱导表达融合蛋白,用SDS-PAGE、Western blot进行分析。结果PCR体外扩增cylL基因产物约206bp,成功构建了重组表达质粒pET-cylL;SDS-PAGE、Western免疫印迹显示蛋白表达带的分子量约为39.6kD。结论成功构建粪肠球菌溶血素cylL基因的重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。 展开更多

关键词 粪肠球菌 溶血素 原核表达

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诺如病毒衣壳蛋白表达的研究进展 被引量：2

13

作者 吴冰珊 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期673-675,共3页

关键词 蛋白表达 病毒衣壳 病毒性胃肠炎 暴发性胃肠炎 社会生产力 诺如病毒 儿童急性 世界范围

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炭疽杆菌直接荧光快速检测及定量ELISA检测 被引量：2

14

作者 郑铃 洪新如 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期112-114,共3页

关键词 炭疽杆菌 直接荧光快速检测 ELISA检测 炭疽 诊断

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应用实时PCR检测红鹿感染牛型结核杆菌后IFN-γ和IL-4mRNA的表达 被引量：1

15

作者 朱苹 佘菲菲 Frank Griffin 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期49-51,20,共4页

目的　揭示红鹿抗结核杆菌感染的免疫反应途径。方法　共采用 2 0只红鹿 ,其中一组 10只对牛型结核杆菌(Mycobacteriumbovis,M bovis)有自然抵抗力 ,另一组 10只对M bovis敏感。两组各取 5只接种活的卡介苗 (BCG) ,余下 5只不接种。... 目的　揭示红鹿抗结核杆菌感染的免疫反应途径。方法　共采用 2 0只红鹿 ,其中一组 10只对牛型结核杆菌(Mycobacteriumbovis,M bovis)有自然抵抗力 ,另一组 10只对M bovis敏感。两组各取 5只接种活的卡介苗 (BCG) ,余下 5只不接种。接种卡介苗 8周后所有的红鹿都注射有毒力的M bovis,在注射M bovis4周前以及 6周后分别收集外周血单核细胞 (Peripheralbloodmononuclearcells ,PBMC) ,PBMC在与美洲商陆原 (PokeweedMitogen ,PWM)共育后测定细胞因子Inter feron -γ(IFN -γ)和Interleukin - 4 (IL - 4 )mRNA的表达水平。mRNA的定量测定是在ABIPRISM 770 0序列检测系统上应用TaqManReal-time11PCR技术进行的。结果　在红鹿接受M bovis刺激前后PBMC中IFN -γ和IL - 4mRNA的表达水平有显著性差异。结论　红鹿抵抗结核杆菌感染的免疫反应是复杂的混合细胞反应型 ,Th1,Th2细胞反应均加强。 展开更多

关键词 PCR 检测 红鹿 牛型结核杆菌感染 IFN-Γ IL-4 基因表达 结核病

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幽门螺杆菌膜分离组分对SGC-7901细胞的促增殖作用

16

作者 佘菲菲 陈爱灼 +1 位作者 陈建森 陈月秀 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期13-16,54,共5页

目的探寻幽门螺杆菌(Hp)促细胞增殖组分。方法利用超声破碎法提取NCTC11637Hp不同组分,获得分泌成分、菌膜及胞浆内容,分别加入SGC-7901细胞,共育24h,用MTT法检测各组分对细胞增殖的影响。进而用细菌蛋白提取试剂盒(P-PEK)分离菌膜蛋白... 目的探寻幽门螺杆菌(Hp)促细胞增殖组分。方法利用超声破碎法提取NCTC11637Hp不同组分,获得分泌成分、菌膜及胞浆内容,分别加入SGC-7901细胞,共育24h,用MTT法检测各组分对细胞增殖的影响。进而用细菌蛋白提取试剂盒(P-PEK)分离菌膜蛋白,获得4个不同溶解度膜蛋白组分,分别或两两组合后加入SGC-7901细胞,用MTT法和Ki-67细胞免疫组化检测细胞增殖情况。结果低浓度Hp菌膜(≤1μg/mL)可促细胞增殖,增殖率可达119.32%(P<0.05);Hp菌膜3个不同溶解度膜蛋白组分单独作用于细胞时抑制细胞增殖,但低浓度的"中溶解度"和"难溶解度"混合组分促细胞增殖,增殖率可达115.55%(P<0.05)。结论Hp促细胞增殖成分存在于菌膜的"中溶解度"和"难溶解度"混合组分中。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 细菌组分 细胞增殖

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PapG重组蛋白免疫血清抗UPEC粘附作用的研究

17

作者 郑铃 刘超斌 +1 位作者 郑秀芬 陈锦英 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期751-754,共4页

目的探讨尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组蛋白免疫血清的体外抗细菌粘附作用。方法建立UPEC的Vero细胞感染模型,制备PapG重组蛋白和谷胱甘肽S-转移酶(GST)担体蛋白免疫血清,检测这两种抗血清在血凝和细胞粘附抑制试验中... 目的探讨尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组蛋白免疫血清的体外抗细菌粘附作用。方法建立UPEC的Vero细胞感染模型,制备PapG重组蛋白和谷胱甘肽S-转移酶(GST)担体蛋白免疫血清,检测这两种抗血清在血凝和细胞粘附抑制试验中的作用。结果重组蛋白免疫血清可抑制UPEC野生株所产生的甘露糖抗性血凝;可明显降低细菌对Vero细胞的粘附率,减轻或延缓细菌对细胞的毒性作用。而担体蛋白免疫血清则无上述作用。结论由PapG粘附素与GST构成的重组融合蛋白(GST-PapG)诱导产生的免疫血清在体外具有抵抗UPEC粘附的能力,而且这种抗粘附作用主要针对P菌毛的PapG粘附素。 展开更多

关键词 大肠杆菌 细菌粘附 免疫血清

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“SARS”冠状病毒的超微结构特征

18

作者 郑铃 洪新如 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期363-364,共2页

关键词 SARS 冠状病毒 超微结构 支气管肺泡灌洗标本

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血吸虫感染虫卵肉芽肿形成及免疫调节的机制 被引量：4

19

作者 许东明 姚丽君 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期464-466,共3页

关键词 虫卵肉芽肿 血吸虫感染 免疫调节 肉芽肿形成 TH2细胞亚群 抗原表位 肝纤维化 组织结构 免疫细胞 淋巴因子

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构建携带幽门螺杆菌oipA核酸的减毒沙门重组菌株及其免疫保护作用的初步研究

20

作者 林妙端 陈建森 +1 位作者 佘菲菲 陈豪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期335-340,共6页

目的:优化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)oipA核酸疫苗,构建含oipA核酸的SL7207(减毒伤寒沙门氏菌)重组菌株,并研究其在防御H.pylori感染中的作用。方法:对oipA基因进行密码子优化,Kozak前导序列添加、CpG序列优化,将oipA优... 目的:优化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)oipA核酸疫苗,构建含oipA核酸的SL7207(减毒伤寒沙门氏菌)重组菌株,并研究其在防御H.pylori感染中的作用。方法:对oipA基因进行密码子优化,Kozak前导序列添加、CpG序列优化,将oipA优化前后的基因分别克隆入pVAX1真核表达载体,获得pVAX1-oipA和pVAX1-optioipA重组子,将上述重组子与空载体pVAX1瞬时转染AGS细胞,应用Western blot检测转染细胞中OipA蛋白的表达。将重组子转化LB5000进行甲基化修饰,利用修饰后重组子转化终宿主菌SL7207,提取SL7207/pVAX1-oipA,SL7207/pVAX1-optioipA菌株质粒进行PCR,酶切鉴定。用SL7207/pVAX1-oipA和SL7207/pVAX1-optioipA免疫C57BL/6小鼠,末次免疫2周后检测抗OipA抗体,并在末次免疫4周后予H.pyloriSS1(5×108CFU/只)攻击,攻击3次,隔天一次,攻击4周后处死动物,取胃组织做快速尿素酶实验和H.pylori定量培养以检测H.pylori感染状况。结果:pVAX1-oipA、pVAX1-optioipA均可在AGS细胞中表达,且pVAX1-optioipA的OipA蛋白表达量高于pVAX1-oipA;从SL7207/pVAX1-oipA和SL7207/pVAX1-optioipA抽提的质粒,经PCR,酶切鉴定正确;免疫小鼠血清中产生抗OipA蛋白的特异性抗体IgG,且pVAX1-optioipA疫苗组诱导IgG水平明显高于pVAX1-oipA疫苗组(P<0.01);pVAX1-oipA、pVAX1-optioipA疫苗组H.pylori感染率分别为60%(9/15)、26.67%(4/15),明显低于对照组100%(10/10)(P<0.01)。结论:成功构建携带pVAX1-oipA,pVAX1-optioipA的SL7207重组菌株,并验证其对C57BL/6小鼠H.pylori感染具有免疫预防作用,且优化oipA基因有助于提高免疫保护效果。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 oipA基因 核酸疫苗 优化 减毒沙门菌

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