神经干细胞增殖分化过程中Notch通路信号分子的表达 被引量：8

1

作者 张琦 林玲 +1 位作者 胡建石 郑志竑 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期385-390,共6页

探讨Notch通路信号分子在神经干细胞增殖分化中的表达变化。以Notch1,PS1,RBPJk和HES1为研究对象,用RTPCR、Westernblot法检测其在神经干细胞增殖分化中的表达。RTPCR结果表明:PS1和RBPJkmRNA表达量在神经干细胞分化第2d明显降低,而在... 探讨Notch通路信号分子在神经干细胞增殖分化中的表达变化。以Notch1,PS1,RBPJk和HES1为研究对象,用RTPCR、Westernblot法检测其在神经干细胞增殖分化中的表达。RTPCR结果表明:PS1和RBPJkmRNA表达量在神经干细胞分化第2d明显降低,而在分化其它阶段无显著差异;Notch1和HES1mRNA表达量在神经干细胞各分化阶段无明显差异。Westernblot结果显示:PS1蛋白表达量在神经干细胞分化第2d降低,其它阶段无明显差异。Notch信号通路对于维持体外培养的神经干细胞增殖有重要的作用。 展开更多

关键词 神经干细胞 增殖分化 NOTCH信号通路 信号分子

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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究 被引量：4

2

作者 齐元麟 张明芳 +1 位作者 赵蓉 林建银 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2012年第2期121-125,共5页

目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用We... 目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果:NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24h的IC50分别为(2.48±0.41)、(1.74±0.27)和(0.83±0.19)mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论:NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。 展开更多

关键词 蛇毒 中华眼镜蛇 L-氨基酸氧化酶 细胞增殖 细胞凋亡

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BMP-2和EGF对神经干细胞向神经元分化及Notch信号分子表达的影响 被引量：2

3

作者 张琦 林玲 +1 位作者 胡建石 郑志竑 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期158-162,共5页

采用BMP-2(bonemorphogeneticprotein2)和EGF(epidemicgrowthfactor)诱导体外培养的神经干细胞分化,通过免疫荧光染色以及细胞计数方法,观察其分化为神经元的情况;用RTPCR和Westernblot检测Notch信号分子Notch1、PS1、RBPJk和HES1的表... 采用BMP-2(bonemorphogeneticprotein2)和EGF(epidemicgrowthfactor)诱导体外培养的神经干细胞分化,通过免疫荧光染色以及细胞计数方法,观察其分化为神经元的情况;用RTPCR和Westernblot检测Notch信号分子Notch1、PS1、RBPJk和HES1的表达水平。结果表明:BMP2组分化为神经元的比例明显高于对照(control,Ctrl)组和EGF组;EGF组分化为神经元的比例与Ctrl组相比无显著差别;与Ctrl组相比,BMP-2组和EGF组中Notch通路4种信号分子的mRNA表达量均无显著差异;PS1蛋白表达量也无明显差异。结果提示,BMP-2对神经干细胞分化为神经元的诱导作用强于EGF和自主分化,其分化为神经元的比例增加与Notch信号分子的表达水平无关。 展开更多

关键词 神经干细胞 神经元 NOTCH信号通路 BMP-2 EGF

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竹叶青素的基因合成、原核表达及生物学功能的初步研究

4

作者 齐元麟 张明芳 +2 位作者 胡建石 徐剑文 林建银 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期36-41,共6页

目的合成竹叶青素trigramin基因,在原核系统中表达、纯化,对其功能进行初步研究。方法缓慢退火-PCR法合成竹叶青素基因并克隆入原核表达载体;IPTG诱导表达;亲和层析法纯化重组蛋白;常规柱层析和HPLC纯化天然竹叶青素;Born法测定竹叶青... 目的合成竹叶青素trigramin基因,在原核系统中表达、纯化,对其功能进行初步研究。方法缓慢退火-PCR法合成竹叶青素基因并克隆入原核表达载体;IPTG诱导表达;亲和层析法纯化重组蛋白;常规柱层析和HPLC纯化天然竹叶青素;Born法测定竹叶青素对血小板聚集的抑制能力;CCK-8法测定竹叶青素对细胞增殖的影响;划痕实验分析竹叶青素对细胞运动的影响。结果合成了竹叶青素基因并在大肠杆菌中表达;获得纯度为89.1%的重组竹叶青素;重组竹叶青素抑制血小板聚集的IC50为0.78μmol.L-1,而天然竹叶青素为0.35μmol.L-1;竹叶青素不能抑制肿瘤细胞增殖,但可抑制细胞体外运动能力。结论本研究成功合成竹叶青素基因并在大肠杆菌系统进行了有功能的表达和纯化,竹叶青素可抑制肿瘤细胞体外运动。 展开更多

关键词 蛇毒 去整合素 竹叶青素 原核表达 蛋白纯化 细 胞运动

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干细胞的蛋白质组研究

5

作者 蔡良知 郑志竑 《生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期7-9,41,共4页

干细胞研究和蛋白质组研究同属于21世纪生命科学的热点领域。将蛋白质组学技术应用于干细胞的研究,能够为了解干细胞提供蛋白质水平的信息,揭示干细胞的增殖、定向分化和迁移的机制,为人们更好地将干细胞技术应用于组织工程、基因治疗... 干细胞研究和蛋白质组研究同属于21世纪生命科学的热点领域。将蛋白质组学技术应用于干细胞的研究,能够为了解干细胞提供蛋白质水平的信息,揭示干细胞的增殖、定向分化和迁移的机制,为人们更好地将干细胞技术应用于组织工程、基因治疗及药物开发等领域奠定基础。 展开更多

关键词 干细胞 蛋白质组 蛋白质组学

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大鼠脑的神经干细胞的体外培养、增殖和分化 被引量：23

6

作者 郑志竑 林玲 +2 位作者 胡建石 陈贻锴 林建银 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期33-36,共4页

采用无血清培养基分离和培养大鼠脑的神经干细胞,并通过免疫荧光细胞化学技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。鉴定结果表明,所分离培养的细胞为大鼠神经干细胞,具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖和较长... 采用无血清培养基分离和培养大鼠脑的神经干细胞,并通过免疫荧光细胞化学技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。鉴定结果表明,所分离培养的细胞为大鼠神经干细胞,具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖和较长期培养,可经诱导分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,是进行诱导分化的良好细胞模型。本文讨论了神经干细胞传代培养中应予以注意的问题和对策。 展开更多

关键词 大鼠 脑 神经干细胞 体外培养 增殖 分化

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Leber遗传性视神经病变家系的线粒体基因突变分析 被引量：9

7

作者 林玲 陈贻锴 +3 位作者 童绎 郑志 林建银 朱进伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期267-270,共4页

为探讨Leber遗传性视神经病变(Leber′shereditaryopticneuropathy,LHON)家系线粒体DNA(mtDNA)常见致病原发突变的频谱,用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)和单链构象多态性(single strandedconformationalpolymorphism,SSCP... 为探讨Leber遗传性视神经病变(Leber′shereditaryopticneuropathy,LHON)家系线粒体DNA(mtDNA)常见致病原发突变的频谱,用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)和单链构象多态性(single strandedconformationalpolymorphism,SSCP)以及DNA测序的方法,对13个家系22位临床诊断为LHON的患者及其母系亲属21人的线粒体DNA进行检测,同时检测71例正常人作为对照。临床拟诊为LHON的13个家系中,11个家系存在mtDNA位点11778G→A突变,另2个家系存在14484位点T→C突变。说明中国LHON病人存在线粒体DNA11778或14484位点突变,其中14484位点突变在国内尚未见报道。 展开更多

关键词 LEBER遗传性视神经病 线粒体基因 突变 线粒体DNA PCR-SSCP 遗传性疾病

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蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16细胞蛋白质表达谱的影响 被引量：5

8

作者 齐元麟 纪明开 +2 位作者 谢群 黄清玲 林建银 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期791-797,共7页

目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因转染对小鼠黑素瘤细胞B16F1的蛋白表达谱的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法采用双向电泳-质谱的蛋白质组学研究策略,分析稳定表达sv-cystatin的B16F1细胞系B16F1/cystatin与转染空载体... 目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因转染对小鼠黑素瘤细胞B16F1的蛋白表达谱的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法采用双向电泳-质谱的蛋白质组学研究策略,分析稳定表达sv-cystatin的B16F1细胞系B16F1/cystatin与转染空载体的对照细胞B16F1/pcDNA3.1的蛋白表达谱的差别,筛选鉴定差异表达蛋白;用实时定量PCR和Western blot进一步确定实验结果;对蛋白组数据和前期基因组数据进行比较分析。结果 B16F1/cystatin和B16F1/pcDNA3.1细胞总蛋白的双向电泳图谱上共有匹配蛋白点(412±20)个,其中有11个蛋白的表达差异在2倍以上,5个上调,6个下调。这11个蛋白和1个仅在B16F1/cystatin中表达的蛋白经MALDI-TOF-MS分析,其中10个蛋白得到了鉴定,它们分属于代谢酶系、小G蛋白Ran调控分子、真核翻译因子、核苷酸激酶等。Western blot显示NM23和RhoGDI-beta的蛋白表达分别上调了(2.23±0.34)倍和(1.57±0.11)倍;实时定量PCR结果显示NM23、RhoGDI-beta、RANBP1的mRNA表达上调,eIF5A、eEF1-beta2、MDH1表达下调;与蛋白质组学研究结果一致。基于Gene Ontology的分析提示sv-cystatin作用的靶分子主要定位于细胞外周、质膜和细胞核,与转录、半胱氨酸蛋白酶活性、细胞凋亡等过程有关。结论 sv-cystatin可能通过调控抑癌基因NM23、RhoGDI等蛋白质发挥其抗肿瘤作用。sv-cystatin的主要靶分子可能是转录因子、分泌蛋白和质膜受体。 展开更多

关键词 蛇毒 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 黑色素瘤 小鼠 蛋白质组学 基因本体学

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蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建 被引量：7

9

作者 徐剑文 林建银 +2 位作者 林旭 齐元麟 张晓艳 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期755-764,共10页

研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)... 研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点。随后将该基因插入到转座载体pFastBac HT C的MCS中,转化大肠杆菌DH5-αT1,以LB/AP平板筛选阳性重组子,PCR扩增、酶切鉴定,提取pFastBac HT C-BJ46a重组体进一步转化DH10Bac感受态细胞,48h后通过蓝白筛选,挑取单个白色菌落划线,证实所得菌落均为白斑,挑克隆PCR鉴定。结果表明成功构建杆状病毒重组转座载体、重组穿梭载体。含BJ46a基因的重组杆状病毒感染Sf 9昆虫细胞,获得目的蛋白的表达。BJ46a基因的合成及杆状病毒表达载体的成功构建,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a) 基因合成 基因克隆 基因突变 重组杆状病毒载体

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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶对人膀胱癌ECV304细胞增殖和细胞周期的影响及机制 被引量：4

10

作者 齐元麟 张明芳 +3 位作者 赵蓉 张旭 吴玲珊 林建银 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1660-1665,共6页

目的研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(Naja atra L-a-mino acid oxidase,NA-LAAO)对人膀胱癌细胞株ECV304的生长抑制作用,探讨其作用机制。方法 CCK-8法测定NA-LAAO的细胞毒性及对细胞增殖抑制能力;流式细胞术分析NA-LAAO对ECV304细胞周期... 目的研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(Naja atra L-a-mino acid oxidase,NA-LAAO)对人膀胱癌细胞株ECV304的生长抑制作用,探讨其作用机制。方法 CCK-8法测定NA-LAAO的细胞毒性及对细胞增殖抑制能力;流式细胞术分析NA-LAAO对ECV304细胞周期的影响;实时定量PCR和Western blot分析细胞周期相关基因mRNA和蛋白质表达。结果 NA-LAAO对ECV304细胞有强烈抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系。NA-LAAO处理6、12、24 h对ECV304的IC50分别为(1.54±0.23)、(1.09±0.15)和(0.48±0.14)mg.L-1;细胞生长曲线显示,0.156 mg.L-1的NA-LAAO作用4 d可明显抑制ECV304细胞增殖;0.313 mg.L-1从d 2起就有明显效果;0.625 mg.L-1处理后细胞多数死亡;流式细胞术分析提示NA-LAAO可使ECV304细胞阻滞在G1期,并呈量效关系;实时定量PCR结果显示,NA-LAAO可下调Cyclin A2、B1、D1、E1、CDK2、CDK6、Survivin、Skp2,上调p21、p16、p27的表达,Western blot结果显示NA-LAAO可下调Cyclin A、CDK2、CDK6,上调p21,与实时PCR结果一致。结论 NA-LAAO可通过调节细胞周期相关分子,使ECV304细胞阻滞在G1期,抑制细胞增殖。 展开更多

关键词 蛇毒 中华眼镜蛇 L-氨基酸氧化酶 细胞增殖 细胞周期 膀胱癌

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KIR不相合的NK细胞对乳腺癌细胞的体外杀伤作用 被引量：6

11

作者 叶韵斌 周智锋 +3 位作者 郑蕊蕊 陈强 林建银 李洁羽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第1期26-30,共5页

目的:研究自然杀伤(natural killer,NK)细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer immunoglobulin-like recep-tor,KIR)和HLA-Cw配体不相合的异基因NK细胞对乳腺癌细胞的体外杀伤作用;分析杀伤活化受体NKG2D及其MICA配体表达水平与NK细... 目的:研究自然杀伤(natural killer,NK)细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer immunoglobulin-like recep-tor,KIR)和HLA-Cw配体不相合的异基因NK细胞对乳腺癌细胞的体外杀伤作用;分析杀伤活化受体NKG2D及其MICA配体表达水平与NK细胞对乳腺癌细胞杀伤敏感性之间的关系。方法:取10例健康人及5例乳腺癌患者外周血10ml,采用MACS系统NK细胞免疫磁珠分选试剂盒负向分选高纯度NK细胞。取乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-435s和SK-Br3)和NK细胞各1×105个,碱裂解法抽提DNA,PCR-SSP方法分别检测HLA-Cw位点、KIR位点表达。MTT法检测KIR相合与不相合组的NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤率。流式细胞术检测NK细胞NKG2D表达水平以及RT-PCR方法检测乳腺癌细胞MICA表达。结果:MACS系统分选出的NK细胞,经流式细胞术检测,其纯度在90%以上;KIR与HLA-Cw相合组的NK细胞对乳腺癌细胞株的杀伤率明显高于不相合组,G1组和G2组NK细胞对MDA-MB-435s(G1组)杀伤率分别为(73.2±14.5)%和(34.2±7.6)%,对SK-Br3(G1组)杀伤率为(67.3±12.5)%和(36.5±7.7)%,而对MCF-7(G2组)杀伤率分别为(36.7±8.5)%和(76.5±11.7)%。结果还显示,3株乳腺癌细胞均表达MICA分子;NK细胞与MCF-7细胞共培养,可上调NK细胞表面NKG2D的表达。结论:NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤并非由KIR的不相合机制介导;乳腺癌细胞表面表达的MICA分子可上调NK细胞表面NKG2D的表达,激发NK细胞对乳腺癌细胞的细胞毒效应。 展开更多

关键词 自然杀伤细胞 乳腺癌 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 激活性受体 主要组织相容性复合物Ⅰ类相关抗原A

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神经营养因子对培养不同时间的大鼠神经干细胞的定向诱导分化 被引量：6

12

作者 林玲 郑志竑 +2 位作者 胡建石 蔡良知 林建银 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期214-218,共5页

采用BDNF、GDNF、PDGF和forskolin对培养不同时间的大鼠脑神经干细胞(NSC)进行诱导分化,通过免疫荧光染色观察这些诱导剂对NSC分化为神经元的作用,以RTPCR和Westernblot检测体外培养不同时间的NSC表达TrkB受体的水平,探讨它与NSC诱导分... 采用BDNF、GDNF、PDGF和forskolin对培养不同时间的大鼠脑神经干细胞(NSC)进行诱导分化,通过免疫荧光染色观察这些诱导剂对NSC分化为神经元的作用,以RTPCR和Westernblot检测体外培养不同时间的NSC表达TrkB受体的水平,探讨它与NSC诱导分化反应性的关系。结果表明,各种神经营养因子诱导的MAP2阳性细胞数均高于未加神经营养因子的对照组(P<0.001)。在所使用的神经营养因子中,以BDNF促进NSC分化成神经元的效果为著,MAP2阳性细胞数约为空白对照组的6倍。而体外培养3个月的NSC单用BDNF诱导分化后未见MAP2阳性细胞,仅在联合使用BDNF和forskolin时方可诱导出少数MAP2阳性细胞。RTPCR和Westernblot检测结果显示,体外培养3个月的NSC表达TrkB受体的mRNA及蛋白的量较培养1个月的NSC减少3倍,提示培养3个月的NSC对BDNF诱导反应性的减弱可能与TrkB受体表达下调有关。 展开更多

关键词 神经干细胞 分化 神经营养因子 TrkB受体 大鼠

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RNAi沉默Notch1基因对人胶质瘤U251细胞增殖能力的影响 被引量：4

13

作者 张明芳 郭亚 +1 位作者 齐元麟 郑志竑 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期199-203,共5页

目的探讨沉默Notch1基因对人神经胶质瘤U251细胞增殖能力的影响。方法采用Notch1-shRNA慢病毒感染人胶质瘤U251细胞,筛选稳定低表达Notch1的细胞单克隆,Western blot法检测细胞Notch1蛋白的表达;CCK-8法测定细胞生长;平板克隆形成实验... 目的探讨沉默Notch1基因对人神经胶质瘤U251细胞增殖能力的影响。方法采用Notch1-shRNA慢病毒感染人胶质瘤U251细胞,筛选稳定低表达Notch1的细胞单克隆,Western blot法检测细胞Notch1蛋白的表达;CCK-8法测定细胞生长;平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验检测细胞的集落形成能力;裸鼠种植瘤模型观察Notch1沉默对种植瘤生长的影响。结果成功筛选得到Notch1稳定沉默的U251细胞单克隆,其Notch1蛋白下调(65.3±5.1)%。Notch1稳定沉默细胞的生长增殖能力明显受到抑制,生长曲线与对照组相比明显减慢;Notch1沉默组的平板克隆形成率为(18.6±2.5)%,低于对照组(37.0±3.3)%;Notch1沉默组软琼脂集落形成率(51±5)%,低于对照组(80±4)%;Notch1沉默组裸鼠腋下种植瘤生长速度减慢,30d后瘤重(0.31±0.09)g,明显低于对照组(2.35±0.71)g;统计学分析差异均有显著性。结论RNAi沉默Notch1基因可致人胶质瘤U251细胞的体外增殖和体内成瘤能力下降。 展开更多

关键词 NOTCH1 RNA干扰 慢病毒 细胞增殖 无胸腺小鼠 种植瘤

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67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响 被引量：5

14

作者 郑大利 黄清玲 +2 位作者 蒋雪梅 彭碧文 林建银 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期335-340,共6页

探讨细胞膜表面 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7kDlamininreceptor ,6 7LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用 ,从肝癌细胞中提取RNA ,通过RT PCR扩增 6 7LR的前体——— 37kD层粘连蛋白受体前体(37kDlamininreceptorprecursor,37LRP)基因并定向克... 探讨细胞膜表面 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7kDlamininreceptor ,6 7LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用 ,从肝癌细胞中提取RNA ,通过RT PCR扩增 6 7LR的前体——— 37kD层粘连蛋白受体前体(37kDlamininreceptorprecursor,37LRP)基因并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1 myc His(- )A ,采用脂质体将重组质粒转染到HepG2肝癌细胞中 ,通过G4 1 8筛选和RT PCR、流式细胞术鉴定 ,获得了细胞膜表面 6 7LR高表达 (阳性率为 6 9.2 % )和低表达 (阳性率为 1 1 .7% )的细胞克隆 ,采用体外细胞侵袭实验测定不同细胞的侵袭能力 ,发现膜表面 6 7LR高表达的细胞侵袭能力明显高于低表达及不表达细胞 ,说明 6 展开更多

关键词 层粘连蛋白受体 肝癌细胞 克隆 表达 侵袭

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神经节苷脂在神经系统发育过程中的作用 被引量：11

15

作者 江琼 郑志竑 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期91-94,共4页

关键词 单唾液酸神经节苷脂 唾液酸 神经系统发育 大脑 GD 寡糖链 灰质 脊椎动物 糖脂 数目

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SH-SY5Y细胞高表达糖原合成激酶3β对tau蛋白磷酸化和微管稳定性的影响 被引量：6

16

作者 沈杰 陈晓春 +1 位作者 林旭 张静 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期254-258,共5页

目的:构建高表达糖原合成激酶3β(GSK3β)的SH-SY5Y(人骨髓神经母细胞瘤细胞)转基因细胞模型,观察GSK3β高表达对宿主细胞tau蛋白磷酸化、微管稳定性的影响。方法:构建GSK3β真核表达质粒,转染SH-SY5Y细胞,使GSK3β在SH-SY5Y细胞中得到... 目的:构建高表达糖原合成激酶3β(GSK3β)的SH-SY5Y(人骨髓神经母细胞瘤细胞)转基因细胞模型,观察GSK3β高表达对宿主细胞tau蛋白磷酸化、微管稳定性的影响。方法:构建GSK3β真核表达质粒,转染SH-SY5Y细胞,使GSK3β在SH-SY5Y细胞中得到高表达,应用蛋白免疫印迹方法,观察tau蛋白磷酸化、总tau蛋白、微管蛋白乙酰化水平的变化情况。结果:GSK3β真核表达质粒转染SH-SY5Y细胞36h后,GSK3β在SH-SY5Y细胞中的表达达到高峰,tau蛋白Ser199/202、Thr231、Thr205等位点的磷酸化水平在转染后48h达到高峰;tau蛋白总量未有明显变化。转染后60h,微管蛋白乙酰化水平明显减低。结论:高表达GSK3β的SH-SY5Y细胞可使tau蛋白的磷酸化水平增高,从而降低tau蛋白结合和稳定微管蛋白的能力,导致微管蛋白乙酰化水平明显减低。 展开更多

关键词 糖原合成激酶3β TAU蛋白质类 磷酸化 微管蛋白

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体外培养的神经球中表达神经巢蛋白细胞的流式细胞术检测 被引量：3

17

作者 林玲 郑志竑 +2 位作者 胡建石 张琦 林建银 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期415-418,共4页

采用体外培养不同时间的神经干细胞球 ,间接荧光法标记神经巢蛋白 (nestin) ,以流式细胞术检测神经干细胞球中表达nestin细胞的情况。结果显示 :在培养不同时间的细胞群体中均检出 nestin阳性细胞 ,培养 7d、1月、3月和 6月的细胞群含ne... 采用体外培养不同时间的神经干细胞球 ,间接荧光法标记神经巢蛋白 (nestin) ,以流式细胞术检测神经干细胞球中表达nestin细胞的情况。结果显示 :在培养不同时间的细胞群体中均检出 nestin阳性细胞 ,培养 7d、1月、3月和 6月的细胞群含nestin阳性细胞数百分比分别为 (4 2 .2± 7.6) %、(4 1.7± 7.3 ) %、(3 3 .8± 12 .9) %和 (3 7.1± 5 .0 ) % ,几个时间点的细胞群体所含的 nestin阳性细胞数的百分比之间无显著性差异。提示 ,在体外培养条件下 ,神经干细胞群体可能通过自我更新和分化的调控 ,保持 nestin阳性细胞于一种较为恒定的比例。 展开更多

关键词 体外培养 神经球 神经巢蛋白 流式细胞术 神经干细胞

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新生大鼠脊髓神经干细胞的分离培养及鉴定 被引量：5

18

作者 胡建石 郑志竑 +1 位作者 林玲 林建银 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第1期7-9,共3页

目的　从新生大鼠的脊髓中分离培养神经干细胞并观察其增殖和分化能力。方法　采用细胞培养技术结合间接免疫荧光细胞化学法。结果　分离的细胞生长旺盛 ,单克隆化生成的细胞团 ,BrdU掺入呈强阳性。分离培养获得的细胞团呈Nestin强阳性 ... 目的　从新生大鼠的脊髓中分离培养神经干细胞并观察其增殖和分化能力。方法　采用细胞培养技术结合间接免疫荧光细胞化学法。结果　分离的细胞生长旺盛 ,单克隆化生成的细胞团 ,BrdU掺入呈强阳性。分离培养获得的细胞团呈Nestin强阳性 ,至今已在体外连续传代 8个月。培养的细胞团经 1%小牛血清诱导可分化为神经元和星形胶质细胞。 展开更多

关键词 新生大鼠 脊髓 神经干细胞 分离培养 增殖 分化

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移植神经干细胞对血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元的影响 被引量：9

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作者 叶建新 王玮 郑志 《中国康复理论与实践》 CSCD 2005年第1期10-12,共3页

目的研究神经干细胞移植后血管性痴呆 (VD)大鼠海马胆碱能神经元的变化。方法制作VD大鼠模型 ,随机取用VD大鼠模型 12只 ,分移植组 6只 ,痴呆组 6只。另外 ,取假手术组 6只。新生大鼠脊髓神经干细胞经分离培养和纯化 ,移植于大鼠海马。... 目的研究神经干细胞移植后血管性痴呆 (VD)大鼠海马胆碱能神经元的变化。方法制作VD大鼠模型 ,随机取用VD大鼠模型 12只 ,分移植组 6只 ,痴呆组 6只。另外 ,取假手术组 6只。新生大鼠脊髓神经干细胞经分离培养和纯化 ,移植于大鼠海马。术后 8周 ,免疫组织化学及荧光染色检测神经干细胞能否存活、迁移及 3组大鼠海马CA1区胆碱能神经元数目的变化。结果移植组大鼠海马CA1区胆碱能神经元数目较痴呆组明显增多。结论神经干细胞移植后能迁移至海马 ,分化或诱导海马产生具有ChAT活性神经元 ,所产生的ChAT活性神经元可能就是胆碱能神经元。 展开更多

关键词 神经干细胞 移植 血管性痴呆 海马 胆碱能神经元 大鼠

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一氧化氮经钙信号转导途径诱导弓形虫速殖子凋亡 被引量：4

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作者 林京 林建银 +1 位作者 彭碧文 胡建石 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期29-33,共7页

目的为探讨胞浆Ca^(2+)是否为一氧化氮(NitricOxide,NO)诱导弓形虫速殖子凋亡的重要信号分子。方法采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的缺口末端标记法(TUNEL)、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡以及应用Fura-2荧光负载技术测定胞... 目的为探讨胞浆Ca^(2+)是否为一氧化氮(NitricOxide,NO)诱导弓形虫速殖子凋亡的重要信号分子。方法采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的缺口末端标记法(TUNEL)、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡以及应用Fura-2荧光负载技术测定胞浆游离钙浓度[Ca^(2+)]i。结果NO供体亚硝基铁氰化钠(Na2 Fe(CN)5NO,SNP)诱导弓形虫速殖子凋亡过程中胞浆[Ca^(2+)]i明显升高。NO清除剂,N-乙酰半胱氨酸能明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡及SNP诱导的速殖子胞浆[Ca^(2+)]i升高,而不含NO的SNP类似物,铁氰化钾[K_(3)Fe(CN)_(6)]不能诱导速殖子凋亡及其胞浆[Ca^(2+)]i升高。胞外钙螯合剂EGTA,和L型电压依赖性钙通道阻滞剂异搏定,完全或部分抑制SNP引起的速殖子胞浆[Ca^(2+)]i升高,胞内钙螯合剂BAP TA/AM及胞外钙螯合剂EGTA明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡。结论证明NO的供体SNP诱导弓形虫速殖子凋亡主要通过促进胞外钙内流,胞浆[Ca^(2+)]i升高所致。 展开更多

关键词 一氧化氮 弓形虫 细胞凋亡 钙

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