以优质抗青枯病花生品种闽花8号为材料,在苗期利用灌根法接种花生青枯菌,分不同时期取根,利用改良的CTAB-LiCl法提取接种和非接种的混合RNA,采用SMART（Switching Mechanism At 5＇end of RNATranscript）技术合成双链cDNA,经SfiⅠ酶切...以优质抗青枯病花生品种闽花8号为材料,在苗期利用灌根法接种花生青枯菌,分不同时期取根,利用改良的CTAB-LiCl法提取接种和非接种的混合RNA,采用SMART（Switching Mechanism At 5＇end of RNATranscript）技术合成双链cDNA,经SfiⅠ酶切后胶回收纯化双链cDNA,连接到质粒载体pDNR-LIB上,电击转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,成功构建了青枯菌诱导的处理和对照混合全长cDNA文库.经鉴定,初级文库库容为1.78×10 cfu/mL,重组率达到99％以上,插入片段集中在750～2 500 bp之间,平均长度约为1 300 bp,经扩增后的文库滴度为2.97×109 cfu/mL.随机挑取部分克隆测序,利用生物信息学软件进行初步分析获得一些EST数据.说明得到了高质量的全长cDNA文库,这为筛选和克隆青枯菌诱导的胁迫相关基因提供了资源基础.展开更多
