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题名日本囊对虾组织蛋白酶B基因的原核表达及纯化
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作者
黄媛
王艺磊
张子平
岳亮
冯建军
郭松林
林鹏
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机构
集美大学水产学院/农业部东海海水健康养殖重点实验室
福建农林大学水产系
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出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期86-92,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(31272685)
福建省自然科学基金项目(2012J01140)
福建省教育厅项目(JA12193)
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文摘
采用原核表达的方法得到日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)组织蛋白酶B基因的重组蛋白。以日本囊对虾卵巢组织为试验材料,采用双标签(GST和His)的方法,用带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点以及6×His-tag的特异引物扩增Cathepsin B的开放阅读框,并连接至表达质粒pGEX-4T-2中。将重组表达质粒导入大肠杆菌BL21中,在30℃条件下,用终浓度为1mmol/L的IPTG(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside)诱导5h得到最佳诱导量,His亲和柱进行纯化,纯化蛋白依次于8、6、4、2、1、0 mol/L尿素缓冲液中梯度透析,得到复性后可溶于水的重组蛋白,经SDS-PAGE检测,得到单一条带,其分子质量约为63ku。取冻干后的蛋白制备多克隆抗体,抗体效价达50 000,经Western blot检测,同样可在63ku处得到该条带,表明制备的组织蛋白酶B(CB)多克隆抗体具有特异性,该抗体可特异识别CB蛋白。
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关键词
日本囊对虾
卵巢
组织蛋白酶B基因
原核表达
多克隆抗体
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Keywords
Marsupenaeus japonicus
ovary
cathepsin B gene
prokaryotic expression
polyclonal antibody
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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