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番木瓜β-Gal基因RNAi双T-DNA植物表达载体的构建及其遗传转化的初步研究 被引量:2
1
作者 何玮毅 陈晓静 +2 位作者 申艳红 卢秉国 潘东明 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期556-561,共6页
克隆了番木瓜(Carica papaya L.)果肉的细胞壁水解关键酶β-半乳糖苷酶(β-GAL)基因保守区,将其反向重复插入载体pKANNIBAL,构建RNAi中间表达载体pKAN/RG,将其上的发夹结构取代经改造的载体pCAMBIA1300上hptⅡ基因,构建中间表达载体p130... 克隆了番木瓜(Carica papaya L.)果肉的细胞壁水解关键酶β-半乳糖苷酶(β-GAL)基因保守区,将其反向重复插入载体pKANNIBAL,构建RNAi中间表达载体pKAN/RG,将其上的发夹结构取代经改造的载体pCAMBIA1300上hptⅡ基因,构建中间表达载体p1300-/MFRG,分离单T-DNA区段,与载体pCAMBIA2301构建RNAi双T-DNA植物表达载体p2301/TTRG。酶切分析和PCR检测表明,p2301/TTRG已被成功导入农杆菌EHA105。通过遗传转化,初步获得了GUS染色呈阳性且具Kan抗性的番木瓜胚性愈伤组织。 展开更多
关键词 番木瓜 Β-半乳糖苷酶 RNA干扰 双T—DNA植物表达载体 遗传转化
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植物体中WD40蛋白的研究进展 被引量:10
2
作者 华静静 陈晓静 《黑龙江农业科学》 2015年第5期153-156,共4页
为了更深入了解WD40蛋白结构及调控机理,使其更好地发挥作用,对近年来WD40蛋白在植物花青素苷生物合成,非生物胁迫响应以及植物生长发育等的研究进展作了综述,并对其未来的研究方向进行了展望。
关键词 WD40蛋白 WD40基序 WD40蛋白功能
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‘云香’水仙ACC合成酶基因NtACS1的克隆及遗传转化 被引量:8
3
作者 孙申申 温秀萍 +4 位作者 杨菲颖 李梦思 李欢 李科 陈晓静 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期250-257,共8页
为探究多花水仙ACS基因的序列特征及功能,以‘云香’水仙盛花期花瓣为试验材料,根据‘云香’水仙花朵转录组数据信息,通过RT-PCR方法克隆出1个ACS基因,命名为NtACS1(GenBank KX082936);NtACS1开放阅读框(ORF)长度为552bp,编码183个氨基... 为探究多花水仙ACS基因的序列特征及功能,以‘云香’水仙盛花期花瓣为试验材料,根据‘云香’水仙花朵转录组数据信息,通过RT-PCR方法克隆出1个ACS基因,命名为NtACS1(GenBank KX082936);NtACS1开放阅读框(ORF)长度为552bp,编码183个氨基酸。编码蛋白质分子量约为20.6KDa,理论等电点为6.30,不稳定系数为65.49,属于不稳定的疏水性蛋白。通过qRT-PCR对‘云香’水仙不同时期花瓣和副冠中的NtACS1基因进行了表达分析,得到与‘云香’水仙花朵转录组数据中相同的结果:NtACS1基因在‘云香’水仙花瓣和副冠中的表达都是随着花衰老过程呈现逐渐下降的趋势,且NtACS1基因在花瓣和副冠中的表达峰值都在花苞期,表明NtACS1基因编码的蛋白是在乙烯生物合成途径的系统1发挥催化作用的ACC合成酶。成功构建了NtACS1基因的正义植物表达载体,并通过农杆菌介导法获得8株转基因烟草,PCR和RT-PCR检测显示其中有6株为阳性植株,初步证实NtACS1基因已导入烟草基因组中且在烟草中已表达。该研究结果为进一步分析NtACS1基因的功能和后续转化水仙延长其花期研究奠定了基础。 展开更多
关键词 '云香’水仙 基因克隆 表达分析 延长花期 ACS
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番木瓜β-Gal基因的克隆分析与植物表达载体构建 被引量:1
4
作者 何玮毅 陈晓静 +1 位作者 申艳红 卢秉国 《热带作物学报》 CSCD 2010年第2期217-223,共7页
番木瓜果实采后贮藏期间的迅速软化与β-Gal基因的表达密切相关。利用常规PCR结合反向PCR技术,分离了一条4501bp的番木瓜β-Gal基因组序列。其共含有17个内含子,外显子部分与相应的cDNA序列只有1个碱基的差异。生物信息学分析结果表明,... 番木瓜果实采后贮藏期间的迅速软化与β-Gal基因的表达密切相关。利用常规PCR结合反向PCR技术,分离了一条4501bp的番木瓜β-Gal基因组序列。其共含有17个内含子,外显子部分与相应的cDNA序列只有1个碱基的差异。生物信息学分析结果表明,该番木瓜β-GAL属于糖苷水解酶超级家族42中家族35的成员,在进化过程中与拟南芥的亲缘关系较近,与鳄梨和北美云杉则较远。同时,它还具有一段定位于胞外的信号肽,再次表明其可能参与了果肉细胞壁的降解和果实软化。进一步分离了β-Gal基因启动子,初步验证了其果实表达特异性。将该启动子替换载体p2301/TTRG上的CaMV 35S启动子,构建出RNAi-β-Gal双T-DNA植物表达载体。酶切分析和PCR检测结果表明,载体p2301/BPTTRG已被成功导入农杆菌,可用于后续的遗传转化研究。 展开更多
关键词 番木瓜 Β-半乳糖苷酶 果实特异性启动子 双T-DNA植物表达载体
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花卉香味基因工程研究进展 被引量:1
5
作者 郭凤芝 冯会 +4 位作者 姜翠翠 陈桂信 佘文琴 夏海武 潘东明 《亚热带农业研究》 2006年第1期25-28,共4页
概述了花卉香味基因工程研究进展以及产生短链醛和醇的脂氢过氧化物酶分子生物学研究现状,提出了脂氢过氧化物酶基因可以应用于花卉香味的改良。
关键词 脂氢过氧化物裂解酶 基因 花卉香气
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柚雌蕊不同部位抽提液对自交不亲和阻抑效果的研究
6
作者 王平 吕柳新 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期376-380,共5页
以‘土柚’(Citrus grandis ‘Tuyou’)作对照,采用荧光显微技术对‘琯溪蜜柚’(Citrus grandis‘Guanxi-miyou’)、‘度尾蜜柚’(Citrus grandis ‘Duweimiyou’)两个品种花粉在本品种和异品种雌蕊不同部位抽提液中花粉萌发和花粉管伸... 以‘土柚’(Citrus grandis ‘Tuyou’)作对照,采用荧光显微技术对‘琯溪蜜柚’(Citrus grandis‘Guanxi-miyou’)、‘度尾蜜柚’(Citrus grandis ‘Duweimiyou’)两个品种花粉在本品种和异品种雌蕊不同部位抽提液中花粉萌发和花粉管伸长状态进行了观察。结果表明:‘琯溪蜜柚’和‘度尾蜜柚’子房抽提液对自身花粉管伸长阻抑最明显,并产生严重的弯曲;柱头抽提液对自身花粉管伸长稍有影响,出现中度弯曲;花柱抽提液中自身花粉管伸长正常,仅有轻微弯曲。然而,对于异品种的花粉以及自交亲和的‘土柚’,其子房、花柱和柱头抽提液对花粉管伸长没有这种阻抑效应。 展开更多
关键词 自交不亲和性 花粉 雌蕊 抽提液
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漳州水仙花瓣和副冠类胡萝卜素成分分析及合成途径基因表达研究 被引量:5
7
作者 曾原飞 张慧平 +1 位作者 温超 曾黎辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期663-667,共5页
采用高效液相色谱(HPLC)分析漳州水仙‘金盏银台’花瓣和副冠中主要类胡萝卜素成分。结果显示,黄色副冠的主要色素成分是叶黄素,含量为3.73×104μg/g,β-胡萝卜素的含量很低,仅2.7μg/g;白色花瓣中各种类胡萝卜素的含量都极低。同... 采用高效液相色谱(HPLC)分析漳州水仙‘金盏银台’花瓣和副冠中主要类胡萝卜素成分。结果显示,黄色副冠的主要色素成分是叶黄素,含量为3.73×104μg/g,β-胡萝卜素的含量很低,仅2.7μg/g;白色花瓣中各种类胡萝卜素的含量都极低。同时,采用RT-PCR方法分析类胡萝卜素合成途径结构基因PSY、PDS、ZDS、LYCE、LYCB、BCH在‘金盏银台’白色花瓣、黄色副冠,洋水仙‘粉红魅力’白色花瓣、红色花副冠,洋水仙‘嘹亮’黄色花瓣、橙黄色副冠中的表达情况。结果表明,花瓣与同一品种副冠间结构基因的表达相似,‘粉红魅力’红色副冠中PDS表达增强,而ZDS、LYCE、BCH的表达减弱。从结果可以看出,漳州水仙花中,类胡萝卜素合成主要是叶黄素代谢分支;推测漳州水仙花瓣呈现白色与质体的结构和数量有关;‘粉红魅力’红色副冠中由于几个结构基因的共同作用,类胡萝卜素合成转向β-胡萝卜素分支并累积β-胡萝卜素。 展开更多
关键词 漳州水仙 类胡萝卜素 叶黄素 β-胡萝卜 基因表达
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百香果SPL转录因子家族成员鉴定及其对低温胁迫的响应 被引量:2
8
作者 任锐 张涵 +2 位作者 江文洁 潘佳怡 方庭 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第7期1320-1329,共10页
SPL(SQUAMOSA启动子结合类蛋白质)是一类特异存在于植物中的转录因子,参与植物生长发育的多个过程。为明确百香果SPL转录因子家族成员特征及其对低温胁迫的响应,本研究利用生物信息学方法和百香果基因组数据,对百香果SPL家族基因的结构... SPL(SQUAMOSA启动子结合类蛋白质)是一类特异存在于植物中的转录因子,参与植物生长发育的多个过程。为明确百香果SPL转录因子家族成员特征及其对低温胁迫的响应,本研究利用生物信息学方法和百香果基因组数据,对百香果SPL家族基因的结构、染色体分布、共线性关系及其编码蛋白质理化性质、进化关系进行分析,并通过低温和常温处理明确了百香果幼苗叶片SPL家族基因的相对表达量差异。结果表明,从百香果基因组中鉴定出19个SPL家族成员,分布于7条染色体上,其中包含3对共线性基因对。系统进化分析结果显示该家族分为9个亚族。百香果PeSPL基因启动子区域存在大量激素响应元件和逆境胁迫响应元件。低温胁迫下,百香果PeSPL2、PeSPL3、PeSPL6、PeSPL7、PeSPL8和PeSPL96个基因的相对表达量极显著上升,PeSPL13和PeSPL182个基因的相对表达量显著下降。本研究结果可为进一步揭示百香果SPL基因对低温胁迫的响应机制提供依据。 展开更多
关键词 百香果 SPL基因家族 低温胁迫 表达分析
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百香果CBF基因家族鉴定与表达分析 被引量:2
9
作者 梁宇尧 钟昌桦 +2 位作者 潘若云 任锐 方庭 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第10期55-61,共7页
百香果(Passiflora edulis Sims)原产热带地区,对低温十分敏感。CBF(C-repeat binding factor)基因家族是AP2转录因子家族的一类成员,在植物应对低温、干旱和盐等非生物胁迫中发挥重要作用。对百香果CBF基因家族进行鉴定和分析,并探究... 百香果(Passiflora edulis Sims)原产热带地区,对低温十分敏感。CBF(C-repeat binding factor)基因家族是AP2转录因子家族的一类成员,在植物应对低温、干旱和盐等非生物胁迫中发挥重要作用。对百香果CBF基因家族进行鉴定和分析,并探究其在低温胁迫下的表达模式,可为进一步研究百香果CBF基因功能提供重要的参考信息。采用生物信息学方法鉴定百香果CBF基因家族成员,并对家族成员的序列组分、理化性质、系统进化关系、染色体定位、基因结构、保守基序、启动子顺式作用元件和转录因子结合位点等进行分析,通过qRT-PCR方法分析其在低温胁迫下的表达模式。结果显示,百香果基因组中共有5个CBF基因家族成员,其中3个分布在1号染色体上,2个分布在7号染色体上,被预测定位到细胞核、质膜和过氧化物酶体中;含有1~2个外显子,11~12个motif;系统进化显示5个百香果CBF基因、10个水稻CBF基因及6个拟南芥CBF基因共分成了2大亚组:亚组Ⅰ中包括拟南芥的全部6个CBF基因、百香果的全部5个CBF基因和水稻的4个CBF基因,水稻剩下的6个CBF基因分到了亚组Ⅱ中;启动子区域含有25种顺式作用元件,以光响应、激素与逆境胁迫响应元件为主;共有20个转录因子结合位点;3个百香果CBF基因在低温胁迫下表达量极显著上升,推测上述基因参与了百香果低温胁迫响应。 展开更多
关键词 百香果 CBF基因 低温胁迫 表达分析
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百香果YUCCA基因家族鉴定与表达分析 被引量:1
10
作者 潘佳怡 潘若云 +2 位作者 江文洁 任锐 方庭 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期165-174,共10页
【目的】黄素单加氧酶(YUCCA)基因是吲哚-3-乙酸(Indole-3-acetic acid,IAA)生物合成的主要限速酶基因之一,在植物生长发育中起着重要调控作用。本研究利用生物信息学方法对百香果(Passiflora edulis Sims.)YUCCA基因家族成员进行鉴定,... 【目的】黄素单加氧酶(YUCCA)基因是吲哚-3-乙酸(Indole-3-acetic acid,IAA)生物合成的主要限速酶基因之一,在植物生长发育中起着重要调控作用。本研究利用生物信息学方法对百香果(Passiflora edulis Sims.)YUCCA基因家族成员进行鉴定,以期揭示百香果YUCCA家族基因在激素响应中的功能,同时为YUCCA家族基因在其他物种中的生物信息学研究提供参考。【方法】利用生物信息学方法分析百香果YUCCA基因编码蛋白质的理化性质和保守结构域,基因的染色体定位、基因结构、系统进化树、顺式作用元件等;利用qRT-PCR探究部分成员在植物生长调节剂IAA处理下的表达情况。【结果】百香果基因组中共鉴定出29个YUCCA家族成员,不均匀分布于8条染色体,基因长度(552~9210 bp)存在明显差异,含有1~8个内含子,同时具有8个保守基序。通过系统进化树分析,发现百香果YUCCA基因家族可划分为3类,聚在同一分类中的百香果YUCCA基因具有高度的保守性,同时发现百香果的YUCCA基因与苜蓿(Medicago sativa L.)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)亲缘关系更近,而与水稻(Oryza sativa L.)的亲缘关系较远。顺式作用元件分析显示,百香果YUCCA基因家族启动子受多种激素所诱导,可响应多种逆境胁迫。转录组数据分析结果表明:PeYUCCA6、PeYUCCA11和PeYUCCA16在台农百香果和黄金百香果叶片中呈现较低表达或者不表达,其中PeYUCCA23在台农百香果和黄金百香果的表达量最高,推测该基因对百香果叶片的发育有较大影响。qRT-PCR分析结果表明,在100μmol·L-1 IAA处理后,PeYUCCA7、PeYUCCA13、PeYUCCA17、PeYUCCA24和PeYUCCA26基因表达量显著升高。【结论】YUCCA基因家族成员在IAA处理下的表达差异较大,YUCCA基因可能在植物生长调节剂IAA处理下的百香果生长发育和抵御逆境环境过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 百香果 吲哚-3-乙酸 YUCCA基因家族 生物信息学 定量分析
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龙眼DlSWEET1基因的克隆、表达及功能分析
11
作者 包雨莹 李韵 +2 位作者 江文洁 谢涛 方庭 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期679-689,共11页
【目的】SWEET(sugars will eventually be exported transporters)是一类参与植物生长发育多个过程的糖转运蛋白,分析DlSWEET1基因在龙眼不同组织和处理下的表达,探究其在果实糖积累中的功能。【方法】以龙眼松风本果实为材料,克隆DlSW... 【目的】SWEET(sugars will eventually be exported transporters)是一类参与植物生长发育多个过程的糖转运蛋白,分析DlSWEET1基因在龙眼不同组织和处理下的表达,探究其在果实糖积累中的功能。【方法】以龙眼松风本果实为材料,克隆DlSWEET1基因,采用实时荧光定量PCR分析DlSWEET1在龙眼不同组织器官的表达以及在激素、冷、热、干旱胁迫下的表达模式。通过亚细胞定位、糖转运活性分析及草莓瞬时转化研究DlSWEET1基因的功能。【结果】DlSWEET1基因开放阅读框(ORF)全长为750 bp,编码249个氨基酸,包含一个PQ-loop保守结构域和蛋白典型保守结构域MtN3_slv。DlSWEET1在龙眼根、茎、叶、果肉等组织中均有不同程度的表达,在叶中的表达量较高,在果肉中的表达量次之,而在茎和根中表达量较低;不同浓度的蔗糖、葡萄糖和果糖处理龙眼叶片后,DlSWEET1在叶片中的表达量均有显著升高;低温、干旱及MeJA(茉莉酸甲酯)处理可显著提高DlSWEET1的表达。农杆菌侵染本氏烟草发现DlSWEET1蛋白定位在细胞膜和细胞核。糖转运活性分析证明DlSWEET1蛋白可以转运葡萄糖、果糖、蔗糖和甘露糖。草莓中瞬时转化DlSWEET1可以显著提升果实中的可溶性糖含量。【结论】瞬时过表达DlSWEET1导致转基因草莓果实的可溶性糖含量增加,为进一步解析DlSWEET1在龙眼果实糖积累中的作用提供理论依据。 展开更多
关键词 龙眼 DlSWEET1 表达分析 亚细胞定位 糖积累
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百香果SUS基因家族鉴定与表达分析
12
作者 包雨莹 彭先蕊 +2 位作者 潘若云 任锐 方庭 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第11期45-51,共7页
百香果(Passiflora edulis Sims)虽原产热带地区,但高温也会影响其开花坐果,进而影响产量。果实糖含量不仅影响果实风味品质,还可以作为渗透调节物质参与高温、干旱、盐害等逆境胁迫。蔗糖合成酶(sucrose synthase,SUS)是蔗糖代谢的关... 百香果(Passiflora edulis Sims)虽原产热带地区,但高温也会影响其开花坐果,进而影响产量。果实糖含量不仅影响果实风味品质,还可以作为渗透调节物质参与高温、干旱、盐害等逆境胁迫。蔗糖合成酶(sucrose synthase,SUS)是蔗糖代谢的关键酶之一,在植物糖积累及非生物胁迫响应中具有重要功能。对百香果SUS基因家族成员进行鉴定和生物信息学分析,并分析其在低温胁迫下的表达变化。运用生物信息学方法,对百香果蔗糖合成酶基因进行全基因组鉴定与基因结构、系统发育关系、蛋白质保守功能域、染色体定位分析,利用转录组数据分析其表达模式,利用qRT-PCR技术分析其在高温处理下的表达。结果显示,百香果中包含5个SUS基因,分布在4条染色体上,外显子数量为13~15个。5个SUS基因家族成员可分为三大类,即SUSⅠ、SUSⅡ、SUSⅢ,百香果SUS基因家族成员启动子中含有激素响应、逆境响应相关的顺式作用元件。表达模式分析表明,PeSUS3基因在百香果叶片和果皮中的表达量均较高。qRT-PCR分析表明,PeSUS1、PeSUS2基因在高温处理后表达量显著下降,PeSUS5基因表达量显著性上升,说明PeSUS1、PeSUS2、PeSUS5基因可能在百香果高温胁迫中发挥重要的调控作用。 展开更多
关键词 百香果 蔗糖合酶 高温胁迫 表达分析
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番木瓜叶片、叶柄胚性愈伤组织的诱导及其体胚植株的发生 被引量:10
13
作者 何玮毅 陈晓静 +2 位作者 申艳红 卢秉国 潘东明 《热带作物学报》 CSCD 2008年第6期690-697,共8页
以"漳红"番木瓜组培苗的叶片和叶柄为外植体,在改良MS+0.5 mg/L KT+1.0mg/L 2,4-D+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+400 mg/L Glu+30 g/L蔗糖的固体培养基上诱导出了胚性愈伤组织。其中,CⅡa型胚性愈伤在一定条件下能够继代增殖,并... 以"漳红"番木瓜组培苗的叶片和叶柄为外植体,在改良MS+0.5 mg/L KT+1.0mg/L 2,4-D+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+400 mg/L Glu+30 g/L蔗糖的固体培养基上诱导出了胚性愈伤组织。其中,CⅡa型胚性愈伤在一定条件下能够继代增殖,并能向CⅡb型转变,CⅡb型胚性愈伤则容易发生体胚。采用两步生根法,将体胚再生植株先接种于1/2 MS+0.5 mg/L IBA+1.0 g/L AC+30 g/L蔗糖的固体培养基中暗培养7 d后,转移至1/2 MS+1.0 g/L AC+25μmol/L VB2+30 g/L蔗糖的固体培养基上光照培养,生根效果最好。移栽后,成活率可达45%以上。 展开更多
关键词 番木瓜 叶片 叶柄 胚性愈伤组织 体胚发生 生根
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中国水仙查尔酮异构酶基因的克隆与表达分析 被引量:9
14
作者 蔡雪玲 陈晓静 +2 位作者 叶一江 何玮毅 申艳红 《热带作物学报》 CSCD 2011年第12期2287-2292,共6页
查尔酮异构酶(CHI)是影响类黄酮合成的一个重要限速酶,在植物花色发育过程中起着重要作用。通过RT-PCR和RACE技术从中国水仙的花瓣中克隆得到3条CHI基因,分别命名为NtCHIW、NtCHIJ和NtCHIY。3个基因均含有一个735 bp的开放阅读框(ORF),... 查尔酮异构酶(CHI)是影响类黄酮合成的一个重要限速酶,在植物花色发育过程中起着重要作用。通过RT-PCR和RACE技术从中国水仙的花瓣中克隆得到3条CHI基因,分别命名为NtCHIW、NtCHIJ和NtCHIY。3个基因均含有一个735 bp的开放阅读框(ORF),编码244个氨基酸。氨基酸序列分析表明:白花水仙与金盏银台、黄花水仙、洋葱、粳稻、拟南芥、油棕榈、葡萄相应基因的氨基酸序列同源性分别为93.03%、93.44%、64.75%、55.42%、50.58%、59.43%、58.20%。荧光定量PCR分析表明:随着花开放的过程,中国水仙的CHI基因转录水平发生变化,说明CHI基因可能参与花色变化的过程。 展开更多
关键词 中国水仙 查尔酮异构酶 基因克隆 序列分析 表达分析
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番木瓜组培苗叶片基因组DNA的微量提取 被引量:6
15
作者 何玮毅 陈晓静 +3 位作者 申艳红 卢秉国 官磊 潘东明 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第1期34-38,共5页
比较了3种从番木瓜组培苗叶片中提取基因组DNA的方法.结果表明:改良CTAB法步骤简单,DNA得率与质量均较高,并能用于转基因植株的PCR检测、限制性内切酶酶切以及后续的反向PCR反应;SDS-KAc法存在RNA残留;试剂盒法的DNA得率与质量均较低.
关键词 番木瓜 组培苗 基因组DNA 微量提取
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多花水仙HDS基因cDNA全长克隆与序列分析 被引量:4
16
作者 吴用 何炎森 +3 位作者 李科 申艳红 李欢 陈晓静 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第10期1825-1830,共6页
以‘黄花水仙2号’和‘金盏银台’为材料,水仙各自花瓣的c DNA为模板,采用RT-PCR和RACE技术克隆出2个HDS基因,分别命名为Nt HDSY和Nt HDSJ,测序结果表明,Nt HDSY和Nt HDSJ基因全长分别为2 592 bp和2 599 bp,2个基因均含有1个2 178 bp的... 以‘黄花水仙2号’和‘金盏银台’为材料,水仙各自花瓣的c DNA为模板,采用RT-PCR和RACE技术克隆出2个HDS基因,分别命名为Nt HDSY和Nt HDSJ,测序结果表明,Nt HDSY和Nt HDSJ基因全长分别为2 592 bp和2 599 bp,2个基因均含有1个2 178 bp的开放阅读框(ORF),编码745个氨基酸。同源性分析表明,黄花水仙2号与金盏银台、铁皮石斛、长春花、大豆、葡萄和苹果的相似系数分别为:97.77%、79.29%、75.29%、75.51%、75.02%和74.40%。Real-time PCR分析表明:Nt HDS基因在花瓣和副冠内的表达量在开花过程的花蕾期与盛花期存在明显差异,推测该基因可能与多花水仙香气物质的合成有关。 展开更多
关键词 多花水仙 HDS基因 MEP途径 基因克隆 序列分析
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非洲菊的组培快繁 被引量:9
17
作者 陈晓静 李梅婷 林馨 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第2期169-172,共4页
以非洲菊红花黄芯品系F1幼苗的带芽短缩茎、无芽短缩茎、叶片和盆花的花托作外植体,进行组培快繁研究.结果表明:诱导愈伤组织及芽的增殖培养基均以MS+3.0 mg.L-1BA+0.1 mg.L-1NAA为佳,生根培养基以1/2 MS+0.2 mg.L-12,4-D为好;带芽短缩... 以非洲菊红花黄芯品系F1幼苗的带芽短缩茎、无芽短缩茎、叶片和盆花的花托作外植体,进行组培快繁研究.结果表明:诱导愈伤组织及芽的增殖培养基均以MS+3.0 mg.L-1BA+0.1 mg.L-1NAA为佳,生根培养基以1/2 MS+0.2 mg.L-12,4-D为好;带芽短缩茎作外植体与无芽短缩茎、嫩叶和花托相比,明显缩短了愈伤组织诱导期和芽苗的诱导分化期. 展开更多
关键词 非洲菊 组织培养 快速繁殖
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‘云香’水仙NtWRKYY1基因的分离与功能分析 被引量:3
18
作者 温秀萍 孙申申 +4 位作者 杨菲颖 李梦思 李欢 李科 陈晓静 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期436-444,共9页
为明确WRKY转录因子在‘云香’水仙中的功能,该研究以‘云香’水仙为材料,克隆了WRKY基因,命名为NtWRKYY1(GenBank登录号为KX056495)。序列分析显示,NtWRKYY1基因开放阅读框(ORF)长度为510bp,编码169个氨基酸。多序列比对和系统进化树... 为明确WRKY转录因子在‘云香’水仙中的功能,该研究以‘云香’水仙为材料,克隆了WRKY基因,命名为NtWRKYY1(GenBank登录号为KX056495)。序列分析显示,NtWRKYY1基因开放阅读框(ORF)长度为510bp,编码169个氨基酸。多序列比对和系统进化树分析显示,NtWRKYY1编码蛋白含1个WRKY结构域和C2H2锌指结构(Cx4Cx23HxH),与AtWRKY57聚在一起,属于第Ⅱc类WRKY转录因子。组织表达和时空表达分析显示,NtWRKYY1基因在花中表达量高于根和叶,且在花瓣及副冠中的表达量随开花过程(花蕾期、始花期、盛花期、衰败期)呈上升趋势。植物激素和非生物胁迫分析显示,NtWRKYY1基因受脱落酸(ABA)、高温、干旱和盐诱导,受茉莉酸甲酯(JA)抑制,表明NtWRKYY1基因可能在‘云香’水仙花朵的衰老过程中起正调节作用,同时参与‘云香’水仙ABA、JA等激素信号转导及高温、干旱、盐碱等非生物胁迫过程的调控。利用In-Fusion克隆技术成功构建过表达载体pMDC140-NtWRKYY1,并采用农杆菌介导叶盘法转化烟草。RT-PCR和GUS染色结果显示,目的基因已成功导入烟草基因组中。 展开更多
关键词 ‘云香’水仙 WRKY转录因子 基因表达 遗传转化
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多花水仙WRKY转录因子的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 李欢 何炎森 +3 位作者 李科 申艳红 吴用 陈晓静 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第12期2378-2383,共6页
以‘黄花水仙2号’和‘金盏银台’为材料,根据课题组已克隆出的多花水仙转录因子WRKY基因片段设计特异引物,通过RACE技术分别从2个水仙品种中克隆出2个不同的WRKY基因,命名为Nt WRKY40a和Nt WRKY40b,开放阅读框(ORF)长度分别为945和951... 以‘黄花水仙2号’和‘金盏银台’为材料,根据课题组已克隆出的多花水仙转录因子WRKY基因片段设计特异引物,通过RACE技术分别从2个水仙品种中克隆出2个不同的WRKY基因,命名为Nt WRKY40a和Nt WRKY40b,开放阅读框(ORF)长度分别为945和951个碱基。序列分析结果表明,两序列均含有WRKYGQK保守结构域;‘黄花水仙2号’与‘金盏银台’、拟南芥、葡萄、青蒿、小麦和粳稻的相似系数分别为:97.27%、45%、43%、47%、41%和43%。Real-time PCR分析结果表明:WRKY基因在花瓣和副冠开花过程中的表达量发生变化,说明其可能参与多花水仙花朵的衰老过程。 展开更多
关键词 中国水仙 WRKY转录因子 基因克隆 序列分析
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‘云香’水仙NAC基因克隆及表达分析 被引量:3
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作者 李梦思 赵潇俐 +3 位作者 吴用 李欢 李科 陈晓静 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期313-319,共7页
从‘云香’水仙转录组文库中筛选出1条NAC基因序列,采用PCR技术克隆得到其c DNA序列。序列分析表明,该NAC基因包含822 bp的开放阅读框,编码273个氨基酸,分子量30 903.9 u,命名为Nt NAC3153(Gen Bank登录号:KU375569)。理化性质分析和多... 从‘云香’水仙转录组文库中筛选出1条NAC基因序列,采用PCR技术克隆得到其c DNA序列。序列分析表明,该NAC基因包含822 bp的开放阅读框,编码273个氨基酸,分子量30 903.9 u,命名为Nt NAC3153(Gen Bank登录号:KU375569)。理化性质分析和多重序列比对显示,Nt NAC3153蛋白是一个无跨膜区域的亲水性蛋白,在N端具有一段保守结构域。系统进化树分析表明,Nt NAC3153与同为单子叶植物的小果野芭蕉Ma NAC、二穗短柄草Bd NAC和小米Si NAC亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,Nt NAC3153基因能够被ABA、盐胁迫和高温诱导表达。研究表明:Nt NAC3153可能参与‘云香’水仙的抗逆调控机制。 展开更多
关键词 '云香’水仙 NAC转录因子 基因克隆 序列分析 非生物胁迫
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