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利用CRISPR/Cas 9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用
被引量：
9
1
作者
余深翼
赵金荣
+3 位作者
郑玲红
朱二鹏
周五朵
吴宝成
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期762-770,共9页
旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,...
旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系;将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5α和JM109细胞中,PCR鉴定筛选到的阳性菌株,并回收其扩增条带进行克隆、测序。CRISPR/Cas 9载体的酶切与测序结果均正确,表明载体构建成功;PCR鉴定结果显示,该系统对三种大肠杆菌均能进行aroA基因的有效敲除,敲除效率为46%~58%;测序结果进一步证实目的基因敲除成功。本试验成功构建大肠杆菌aroA基因CRISPR/Cas 9敲除系统,为进一步研究致病菌aroA基因功能及开发减毒大肠杆菌疫苗提供新型、有效的基因敲除工具。
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关键词
CRISPR/Cas
9系统
大肠杆菌
aroA基因
敲除
同源修复
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职称材料
题名
利用CRISPR/Cas 9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用
被引量：
9
1
作者
余深翼
赵金荣
郑玲红
朱二鹏
周五朵
吴宝成
机构
福建农林大学动物科学学院预防兽医实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期762-770,共9页
基金
福建省畜禽新发疫病诊断和防治技术研究(ky0040052)
文摘
旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系;将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5α和JM109细胞中,PCR鉴定筛选到的阳性菌株,并回收其扩增条带进行克隆、测序。CRISPR/Cas 9载体的酶切与测序结果均正确,表明载体构建成功;PCR鉴定结果显示,该系统对三种大肠杆菌均能进行aroA基因的有效敲除,敲除效率为46%~58%;测序结果进一步证实目的基因敲除成功。本试验成功构建大肠杆菌aroA基因CRISPR/Cas 9敲除系统,为进一步研究致病菌aroA基因功能及开发减毒大肠杆菌疫苗提供新型、有效的基因敲除工具。
关键词
CRISPR/Cas
9系统
大肠杆菌
aroA基因
敲除
同源修复
Keywords
CRISPR/Cas 9 system
Escherichia coli
aroA gene
knockout
homologous repair
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用CRISPR/Cas 9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用
余深翼
赵金荣
郑玲红
朱二鹏
周五朵
吴宝成
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
9
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