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黄麻U6启动子克隆及其转录活性分析
1
作者
黄梦欣
庄灵玲
+6 位作者
程佩佩
李秦
徐建堂
陶爱芬
方平平
祁建民
张立武
《作物学报》
北大核心
2025年第5期1156-1165,共10页
U6启动子是CRISPR/Cas9体系中驱动单向导RNA (single guide RNA, sgRNA)转录的重要元件,内源U6启动子相比外源U6启动子通常具有更高的启动效率。然而,目前黄麻内源U6启动子的研究还尚未见报道。本研究利用拟南芥保守的sgRNA AtU6-26序列...
U6启动子是CRISPR/Cas9体系中驱动单向导RNA (single guide RNA, sgRNA)转录的重要元件,内源U6启动子相比外源U6启动子通常具有更高的启动效率。然而,目前黄麻内源U6启动子的研究还尚未见报道。本研究利用拟南芥保守的sgRNA AtU6-26序列,从黄麻“梅峰4号”基因组中克隆到相似性最高的CcU6.1与CcU6.3两个候选启动子。通过构建CcU6.1与CcU6.3分别驱动GUS报告基因的融合表达载体,利用农杆菌介导的转化法分别转染本氏烟草叶片和黄麻毛状根,通过GUS组织化学染色分析启动子的转录活性。同源比对结果显示,CcU6.1与CcU6.3启动子均具有影响U6启动子转录活性的2个必要元件USE和TATAbox。GUS组织化学染色表明,黄麻这2个U6启动子均具有转录活性,但在烟草叶片和黄麻毛状根中CcU6.1启动子的转录活性均弱于CcU6.3启动子,荧光定量PCR进一步验证了这一结果。考虑到过长的U6启动子可能会削弱其转录活性,于是比较分析CcU6.3与AtU6-26启动子的顺式作用元件,发现CcU6.3启动子5′端截短后的序列即从转录起始位点至–550bp位置,可能会进一步提高其转录活性。本研究率先在黄麻中克隆到具有较高转录活性的U6启动子CcU6.3,为构建黄麻属CRISPR/Cas9基因编辑系统提供了应用潜力的启动子。
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关键词
黄麻
U6启动子
CRISPR/Cas9
本氏烟草
毛状根
转录活性
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职称材料
题名
黄麻U6启动子克隆及其转录活性分析
1
作者
黄梦欣
庄灵玲
程佩佩
李秦
徐建堂
陶爱芬
方平平
祁建民
张立武
机构
福建农林大学
作物
遗传
育种与
综合利用教育部重点
实验
室/
农业
农村部
闽台
作物
生物
育种
重点
实验
室
/福建省
作物
设计
育种
重点
实验
室
福建农林大学农业农村部东南黄红麻科学观测实验站/福建省麻类种质资源共享平台/福建省南方经济作物遗传育种与多用途开发国际科技合作基地
出处
《作物学报》
北大核心
2025年第5期1156-1165,共10页
基金
国家自然科学基金项目(32472219)
福建省自然科学基金项目(2023J01443)
+1 种基金
财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-16)
福建农林大学科技创新专项基金(KFB23001,KFB24080)资助。
文摘
U6启动子是CRISPR/Cas9体系中驱动单向导RNA (single guide RNA, sgRNA)转录的重要元件,内源U6启动子相比外源U6启动子通常具有更高的启动效率。然而,目前黄麻内源U6启动子的研究还尚未见报道。本研究利用拟南芥保守的sgRNA AtU6-26序列,从黄麻“梅峰4号”基因组中克隆到相似性最高的CcU6.1与CcU6.3两个候选启动子。通过构建CcU6.1与CcU6.3分别驱动GUS报告基因的融合表达载体,利用农杆菌介导的转化法分别转染本氏烟草叶片和黄麻毛状根,通过GUS组织化学染色分析启动子的转录活性。同源比对结果显示,CcU6.1与CcU6.3启动子均具有影响U6启动子转录活性的2个必要元件USE和TATAbox。GUS组织化学染色表明,黄麻这2个U6启动子均具有转录活性,但在烟草叶片和黄麻毛状根中CcU6.1启动子的转录活性均弱于CcU6.3启动子,荧光定量PCR进一步验证了这一结果。考虑到过长的U6启动子可能会削弱其转录活性,于是比较分析CcU6.3与AtU6-26启动子的顺式作用元件,发现CcU6.3启动子5′端截短后的序列即从转录起始位点至–550bp位置,可能会进一步提高其转录活性。本研究率先在黄麻中克隆到具有较高转录活性的U6启动子CcU6.3,为构建黄麻属CRISPR/Cas9基因编辑系统提供了应用潜力的启动子。
关键词
黄麻
U6启动子
CRISPR/Cas9
本氏烟草
毛状根
转录活性
Keywords
jute
U6 promoter
CRISPR/Cas9
Nicotiana benthamiana
hairy roots
transcriptional activity
分类号
S563.9 [农业科学—作物学]
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题名
作者
出处
发文年
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1
黄麻U6启动子克隆及其转录活性分析
黄梦欣
庄灵玲
程佩佩
李秦
徐建堂
陶爱芬
方平平
祁建民
张立武
《作物学报》
北大核心
2025
0
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