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肺癌A549细胞源性外泌体中lncRNA DUXAP8对肺癌细胞生长和肿瘤免疫逃逸的作用及其机制
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作者 何小双 徐丽娜 +6 位作者 崔梅 赵宇 王蓓 黄征 王玉超 辛雯艳 邬超 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期958-967,共10页
目的:探讨肺癌A549细胞源性外泌体(Exo)中长链非编码RNA(lncRNA)DUXAP8对肺癌细胞生长和免疫逃逸的影响,并阐明其作用机制。方法:培养人肺癌细胞系A549细胞,提取其Exo并鉴定。采用PKH67标记的Exo处理A549细胞,观察A549细胞摄取Exo情况... 目的:探讨肺癌A549细胞源性外泌体(Exo)中长链非编码RNA(lncRNA)DUXAP8对肺癌细胞生长和免疫逃逸的影响,并阐明其作用机制。方法:培养人肺癌细胞系A549细胞,提取其Exo并鉴定。采用PKH67标记的Exo处理A549细胞,观察A549细胞摄取Exo情况。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测Exo处理前后A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平。将A549细胞分为对照组(不处理)、Exo组(Exo处理A549细胞)、Exo+sh-NC组(Exo处理A549细胞后,转染sh-NC至A549细胞)和Exo+sh-DUXAP8组(Exo处理A549细胞后,转染sh-DUXAP8至A549细胞)。RT-qPCR法检测各组A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平,平板集落形成实验检测各组A549细胞克隆形成能力,5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法检测各组A549细胞增殖能力。各组A549细胞与人外周血淋巴细胞共培养后,流式细胞术检测各组人外周血淋巴细胞中活化的CD8+T淋巴细胞百分率,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测各组人外周血淋巴细胞对A549细胞的杀伤率。结果:Exo囊泡直径为50~150 nm,且分化簇63(CD63)、分化簇9(CD9)、肿瘤易感基因101(TSG101)和热休克蛋白70(HSP70)外泌体特异性标志物蛋白表达阳性,说明Exo提取成功。A549细胞能够很好地摄取PKH67标记的Exo。RT-qPCR法,与单独培养的A549细胞比较,Exo处理后,A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,Exo组A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平升高(P<0.05);与Exo组比较,Exo+sh-DUXAP8组A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平降低(P<0.05),Exo+sh-NC组lncRNA DUXAP8表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。平板集落形成实验,与对照组比较,Exo组A549细胞中集落形成数增加(P<0.05);与Exo组比较,Exo+sh-DUXAP8组A549细胞中集落形成数减少(P<0.05),Exo+sh-NC组A549细胞中集落形成数差异无统计学意义(P>0.05)。EdU染色,与对照组比较,Exo组A549细胞中EdU阳性细胞率升高(P<0.05);与Exo组比较,Exo+sh-DUXAP8组A549细胞中EdU阳性细胞率降低(P<0.05),Exo+sh-NC组A549细胞中EdU阳性细胞率差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术,与对照组比较,Exo组人外周血淋巴细胞中活化CD8+T淋巴细胞百分率降低(P<0.05);与Exo组比较,Exo+sh-DUXAP8组人外周血淋巴细胞中活化CD8+T淋巴细胞百分率升高(P<0.05),Exo+sh-NC组人外周血淋巴细胞中活化的CD8+T淋巴细胞百分率差异无统计学意义(P>0.05)。MTT法,与对照组比较,Exo组人外周血淋巴细胞对A549细胞的杀伤率降低(P<0.05);与Exo组比较,Exo+sh-DUXAP8组人外周血淋巴细胞对A549细胞的杀伤率升高(P<0.05),Exo+sh-NC组人外周血淋巴细胞对A549细胞的杀伤率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肺癌A549细胞源性Exo lncRNA DUXAP8促进肺癌细胞增殖和肿瘤免疫逃逸。 展开更多
关键词 肺肿瘤 外泌体 长链非编码RNA DUXAP8 细胞增殖 免疫逃逸
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IL-25与屋尘螨协同促进嗜酸性粒细胞哮喘过敏反应的作用和机制研究
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作者 徐丽娜 何小双 刘冬 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第4期649-655,共7页
目的探讨白细胞介素(IL)-25在嗜酸性粒细胞哮喘过敏反应中的核心作用。方法40只4~5周龄C57BL/6小鼠随机分为4组,WT+shRNA NT组,WT+HDM组,IL-25 shRNA+IL-25组和IL-25 shRNA+IL-25+HDM组。对应于各分组,采用鼻内滴注法,使用屋尘螨和(或)I... 目的探讨白细胞介素(IL)-25在嗜酸性粒细胞哮喘过敏反应中的核心作用。方法40只4~5周龄C57BL/6小鼠随机分为4组,WT+shRNA NT组,WT+HDM组,IL-25 shRNA+IL-25组和IL-25 shRNA+IL-25+HDM组。对应于各分组,采用鼻内滴注法,使用屋尘螨和(或)IL-25处理小鼠。采用HE染色和PAS染色进行肺组织染色和病理学分析。采用ELISA测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中2型细胞因子的水平。采用流式细胞术(FCM)测定肺组织浸润辅助性T细胞2(Th2)、2型固有淋巴细胞(ILC2)和嗜酸性粒细胞数量变化。采用鼻内滴注法,使用FITC-标记的DQ-卵清蛋白(DQ-OVA)处理小鼠,测定其肺内浸润的嗜酸性粒细胞的抗原呈递能力。结果HE染色和PAS染色结果显示,与WT+shRNA NT组相比,IL-25 shRNA+IL-25+HDM组小鼠肺部存在大量黏液,肺血管、肺泡导管及全肺泡均可见大量嗜酸性粒细胞浸润和炎症性气道上皮下增厚;IL-25 shRNA+IL-25组小鼠肺部仅有少量黏液,肺血管、肺泡导管及全肺泡均可见少许嗜酸性粒细胞浸润和炎症性气道上皮下增厚;而WT+HDM组则无明显差异。与WT+shRNA NT组相比,IL-25 shRNA+IL-25+HDM组小鼠BALF中IL-25、IL-4、IL-5、IL-13、IL-33、干扰素-γ(IFN-γ)的水平明显升高;肺内浸润的Th2、ILC2和嗜酸性粒细胞的水平明显升高;小鼠肺部浸润的嗜酸性粒细胞内FITC-标记的DQ-OVA荧光水平明显升高(P<0.05);IL-25 shRNA+IL-25组上述指标也显示升高,但幅度有限(P<0.05);而WT+HDM组则无明显差异。结论IL-25在嗜酸性粒细胞哮喘的致敏过程和嗜酸性粒细胞抗原呈递中具有重要作用。 展开更多
关键词 嗜酸性粒细胞哮喘 IL-25 TH2 ILC2 过敏 2型免疫反应
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自分泌运动因子和溶血磷脂酸受体3在慢性阻塞性肺疾病患者血清及肺组织中的表达及其意义 被引量:1
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作者 蒋佩芩 张政 +1 位作者 黄钟 卢献灵 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期191-201,共11页
目的:探讨自分泌运动因子(ATX)和溶血磷脂酸受体3(LPA3)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清及肺组织中的表达情况,阐明ATX和LPA3在COPD发生发展过程中的作用。方方法:收集40例COPD患者纳入急性加重期组(AECOPD组),经治疗后处于稳定期者纳... 目的:探讨自分泌运动因子(ATX)和溶血磷脂酸受体3(LPA3)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清及肺组织中的表达情况,阐明ATX和LPA3在COPD发生发展过程中的作用。方方法:收集40例COPD患者纳入急性加重期组(AECOPD组),经治疗后处于稳定期者纳入COPD稳定期组,共计40例,并收集40名健康体检者纳入对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组研究对象血清中ATX水平。另收集80例行肺叶切除术的患者,分为COPD吸烟组(CS组,n=20)、COPD不吸烟组(CNS组,n=20)、非COPD吸烟组(HS组,n=20)和非COPD不吸烟组(HNS组,n=20),收集各组研究对象的一般资料,HE染色观察各组患者肺组织的病理形态表现,免疫组织化学染色法检测各组患者肺组织中ATX和LPA3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组患者肺组织中ATX和LPA3 mRNA表达水平,Pearson相关分析符合正态分布的连续变量的相关性,Spearman相关分析评估其他变量间的相关性。结果:与对照组比较,COPD稳定期组研究对象第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred)和第1秒用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV1/FVC)均明显降低(P<0.05)。与COPD稳定期组和对照组比较,AECOPD组患者血清中ATX水平升高(P<0.05);与对照组比较,COPD稳定期组患者血清中ATX水平升高(P<0.05)。AECOPD组患者血清中ATX水平与COPD评估测试量表(CAT)评分呈正相关关系(r=0.581,P<0.001),与吸烟史、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)和体质量指数(BMI)无相关性(P>0.05);COPD稳定期组患者血清中ATX水平与WBC和CAT评分均呈正相关关系(r=0.384,P=0.014;r=0.463,P=0.003),与FEV1%pred和FEV1/FVC均呈负相关关系(r=-0.393,P=0.012;r=-0.353,P=0.025);与CS组和CNS组比较,HS组和HNS组患者FEV1%pred及FEV1/FVC均升高(P<0.05);免疫组织化学染色,与CS组比较,HS组和HNS组患者肺组织中ATX及LPA3蛋白表达水平降低(P<0.05);与CNS组比较,HS组和HNS组患者肺组织中ATX及LPA3蛋白表达水平降低(P<0.05)。RT-qPCR法,与CS组比较,HS组和HNS组患者肺组织中ATX及LPA3 mRNA表达水平降低(P<0.05);与CNS组比较,HS组和HNS组患者肺组织中ATX及LPA3 mRNA表达水平降低(P<0.05)。相关性分析,COPD患者肺组织中ATX蛋白表达水平与LPA3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.723,P<0.001)。结结论论:COPD患者肺组织中ATX和LPA3 mRNA及蛋白表达水平均升高,AECOPD组和COPD稳定期组患者血清ATX水平均升高,二者可能参与COPD的炎症反应,促进COPD的发生发展。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 自分泌运动因子 溶血磷脂酸 受体 吸烟
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1990-2019年中国哮喘患病、疾病负担趋势及其危险因素研究 被引量:14
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作者 屈媛媛 曹淼 +2 位作者 王静 程丽 何小双 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2024年第13期1594-1600,共7页
背景哮喘是最常见的慢性呼吸道疾病之一,了解其流行现状、趋势及危险因素,对采取有针对性的哮喘防控措施具有重要意义。目的本研究分析1990—2019年我国哮喘患病、疾病负担情况及其趋势,并进行哮喘危险因素的顺位分析,为我国哮喘的有效... 背景哮喘是最常见的慢性呼吸道疾病之一,了解其流行现状、趋势及危险因素,对采取有针对性的哮喘防控措施具有重要意义。目的本研究分析1990—2019年我国哮喘患病、疾病负担情况及其趋势,并进行哮喘危险因素的顺位分析,为我国哮喘的有效防控提供借鉴。方法本研究基于全球疾病负担数据库(GBD)2019,通过伤残调整寿命年(DALY)、早死损失寿命年(YLL)、伤残损失寿命年(YLD)和患病率分析我国1990—2019年不同性别、不同年龄的疾病负担变化趋势,并通过标化DALY率和死亡率的人群归因分值(PAF)分析哮喘危险因素的顺位变化情况。结果2019年我国哮喘年龄标化DALY率、YLL率、YLD率分别为102.81人年/10万、24.50人年/10万和78.31人年/10万,标化患病率为1974.16人年/10万,男性的哮喘年龄标化DALY率、YLL率、YLD率均高于女性,1~9岁和≥65岁组的哮喘年龄标化DALY率、YLL率、YLD率高于其他人群。1990—2019年,≥40岁人群的YLL粗率在逐渐下降,DALY粗率、YLD粗率和患病率在<65岁人群中都有所交叉,但之后呈现出逐年下降的趋势。哮喘二级危险因素的顺位为烟草使用、高BMI和职业性危害。吸烟始终居于造成哮喘疾病负担危险因素的首位,2019年高BMI上升至造成哮喘疾病负担的第二危险因素,且高BMI死亡率的PAF上升至第一位。结论1990—2019年,我国哮喘人群的人均健康损失总体呈下降趋势,1~9岁和≥65岁人群的哮喘疾病负担仍处于较高水平。男性哮喘疾病负担高于女性。哮喘相关危险因素的PAF发生了变化,职业性危害的重要性相对下降,烟草使用、高BMI的影响日益突出。哮喘防治重点可侧重于高危人群(1~9岁、≥65岁、男性、烟草使用、有职业暴露)筛查、戒烟教育、体质量控制以及职业场所监测管理。 展开更多
关键词 哮喘 发病率 患病率 疾病负担 趋势分析 危险因素 伤残调整寿命年
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慢性阻塞性肺疾病患者外周血中冷诱导RNA结合蛋白和髓样细胞触发受体-1的表达水平及其临床意义 被引量:4
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作者 张政 陈雪儿 卢献灵 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第7期1275-1280,共6页
目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血中冷诱导RNA结合蛋白(CIRBP)和髓样细胞触发受体-1(TREM-1)的表达水平及其临床意义。方法选取2022年10月—2023年6月40例住院的COPD患者为急性加重期组,其经过治疗进入稳定期后纳入稳定期组,同... 目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血中冷诱导RNA结合蛋白(CIRBP)和髓样细胞触发受体-1(TREM-1)的表达水平及其临床意义。方法选取2022年10月—2023年6月40例住院的COPD患者为急性加重期组,其经过治疗进入稳定期后纳入稳定期组,同期40例健康体检者为对照组。收集各组一般资料,采集外周血,通过酶联免疫吸附法测定血浆中CIRBP、TREM-1水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法测定CIRBP mRNA和TREM-1 mRNA的相对表达量,并检测COPD患者和健康体检者的肺功能。结果COPD急性加重期外周血中的CIRBP、TREM-1表达水平均高于稳定期组,差异有统计学意义(均P<0.001);急性加重期和稳定期外周血中的CIRBP、TREM-1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.001);在急性加重期和稳定期,CIRBP水平均与TREM-1水平呈正相关;急性加重期CIRBP、TREM-1水平与白细胞计数、中性粒细胞百分比、中性粒细胞/淋巴细胞比率呈正相关;稳定期CIRBP、TREM-1水平与第1秒用力呼气容积占预计值百分比、第1秒用力呼气容积/用力肺活量比值呈负相关,与白细胞计数、中性粒细胞百分比、中性粒细胞/淋巴细胞比率呈正相关。结论CIRBP和TREM-1的表达水平在COPD患者外周血中升高,CIRBP的表达与TREM-1表达具有相关性,并且与肺功能、白细胞计数、中性粒细胞百分比、中性粒细胞与淋巴细胞比率、单核细胞与高密度脂蛋白比率等临床指标相关,提示CIRBP和TREM-1可能共同参与COPD的发生发展。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 冷诱导RNA结合蛋白 髓样细胞触发受体-1
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