小西葫芦黄花叶病毒石河子分离物的分子变异 被引量：3

1

作者 王志江 杨海燕 +1 位作者 向本春 郑银英 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第6期677-682,共6页

为了研究小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)石河子分离物的分子变异情况,本研究采用ELISA及一步法RT-PCR对2010-2014年采自石河子地区的30个葫芦科植物样品进行ZYMV检测,从阳性样品中通过一步法RT-PCR克隆其ZYMV... 为了研究小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)石河子分离物的分子变异情况,本研究采用ELISA及一步法RT-PCR对2010-2014年采自石河子地区的30个葫芦科植物样品进行ZYMV检测,从阳性样品中通过一步法RT-PCR克隆其ZYMV分离物的CP基因,经PCR-SSCP分析,将带型一致的ZYMV分离物进行归类,每种类型中选取1个代表性的分离物进行CP基因测序,分析其核苷酸及推导的氨基酸序列的差异。结果显示:2种检测方法的检出率分别为63.33%和83.33%;根据ZYMV CP基因SSCP带型,将21个分离物分为5种不同的类型;其5个代表性分离物的CP核苷酸序列相似性为93.0%-99.8%,在系统进化树中位于2个不同的亚组;氨基酸序列的相似性为96.1%-99.6%,变异主要集中在N端的前41个氨基酸。这表明ZYMV石河子分离物间存在一定程度的分子变异。 展开更多

关键词 小西葫芦黄花叶病毒 DAS—ELISA PCR—SSCP 分子变异

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用RNAi技术获得抗ToMV和CMV转基因烟草 被引量：2

2

作者 林涛 郑银英 +2 位作者 崔百明 乔亚红 向本春 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第4期430-435,共6页

为了获得同时抗ToMV和CMV的转基因烟草,采用以ToMV和CMV部分CP基因片段作为干扰病毒的靶序列,构建了pBi35SG12RNAi表达载体。利用农杆菌介导法转化西方烟(Nicotiana occidentalis),经卡那霉素筛选、PCR鉴定证明干扰序列已整合到烟草基... 为了获得同时抗ToMV和CMV的转基因烟草,采用以ToMV和CMV部分CP基因片段作为干扰病毒的靶序列,构建了pBi35SG12RNAi表达载体。利用农杆菌介导法转化西方烟(Nicotiana occidentalis),经卡那霉素筛选、PCR鉴定证明干扰序列已整合到烟草基因组中,并对ToMV和CMV混合侵染表现抗性。 展开更多

关键词 番茄花叶病毒 黄瓜花叶病毒 RNAI载体 转基因烟草

在线阅读 下载PDF 职称材料

棉花腈水解酶基因GhNIT响应非生物胁迫和激素的表达分析

3

作者 潘泽 李鸿彬 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2018年第4期443-447,共5页

腈水解酶是植物中调控生长素合成色胺(Tryptamine,TAM)途径的关键酶,在生长素的合成及进一步调控植物发育和逆境胁迫响应过程中发挥着重要作用。为了认识腈水解酶在植物生长发育中的功能,本研究在前期获得棉花腈水解酶基因GhNIT的基础上... 腈水解酶是植物中调控生长素合成色胺(Tryptamine,TAM)途径的关键酶,在生长素的合成及进一步调控植物发育和逆境胁迫响应过程中发挥着重要作用。为了认识腈水解酶在植物生长发育中的功能,本研究在前期获得棉花腈水解酶基因GhNIT的基础上,分析了该基因参与棉花纤维发育的表达特征及组织特异性特征,结果表明:Gh NIT基因在棉花开花后16 d和25 d的纤维组织中及花器官(花瓣和花药)中具有较高的表达。克隆获得该基因1500 bp的启动子序列并进行了顺式作用元件分析,pGhNIT启动子包含典型的核心元件TATA框和CAAT框,此外,还包含TC-rich repeats、MBS等元件,尤其是包含许多响应非生物胁迫和激素的元件如热激、干旱和氧化等胁迫响应元件以及赤霉素(Gibberellic acid,GA)和光响应元件,如Box-4、Box-1、G-box等。pGhNIT启动子元件组成分析结果暗示该基因的表达可能受非生物胁迫和植物激素的诱导。进一步以棉花幼蕾为材料进行干旱、高温、低温、黑暗、氧化胁迫等逆境处理,及赤霉素和生长素处理,分析Gh NIT基因的表达特征,结果表明:GhNIT在4℃处理3 h后被显著诱导表达,且其在黑暗处理16 h再恢复光照后表达量增加;此外,Gh NIT的表达显著受高温、聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)和H2O2诱导;在GA处理2 h和吲哚-3-乙酸(Indole-3-cetic cid,IAA)处理1 h后,GhNIT的表达显著上调。本研究结果可为深入研究腈水解酶参与棉纤维发育及调控植物生长发育的重要功能提供良好参考。 展开更多

关键词 陆地棉 腈水解酶 启动子 非生物胁迫 植物激素

在线阅读 下载PDF 职称材料

芽胞杆菌高产纤维素酶菌株的诱变选育与培养基优化 被引量：7

4

作者 郭建强 柴秀娟 +2 位作者 庞学兵 裴娟 王爱英 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期263-270,共8页

为获得高产纤维素酶菌株,采用紫外(UV)诱变和紫外-亚硝基胍(UV-NTG)复合诱变方法对新疆吐鲁番地区土壤中分离得到的产纤维素酶菌株芽胞杆菌C-8进行诱变筛选,并通过二次正交旋转组合试验和响应面试验对诱变筛选得到的菌株进行培养基的优... 为获得高产纤维素酶菌株,采用紫外(UV)诱变和紫外-亚硝基胍(UV-NTG)复合诱变方法对新疆吐鲁番地区土壤中分离得到的产纤维素酶菌株芽胞杆菌C-8进行诱变筛选,并通过二次正交旋转组合试验和响应面试验对诱变筛选得到的菌株进行培养基的优化。结果表明,UV诱变菌株UV-5和UV-NTG比出发菌株C-8纤维素酶活分别提高了1.15倍和3.23倍;当发酵培养基中碳源浓度为3%、氮源浓度为1.5%、吐温-80的浓度为0.15%时,纤维素酶活达到453.20 U·m L-1,是出发菌株C-8的5.49倍和复合诱变菌株UV-NTG-10的1.7倍。本研究结果为纤维素酶的扩大发酵以及后期工业化生产提供了理论依据。 展开更多

关键词 芽胞杆菌 诱变选育 纤维素酶 二次正交旋转组合试验 响应面优化

在线阅读 下载PDF 职称材料

小拟南芥高盐胁迫诱导cDNA文库的构建与测序分析 被引量：14

5

作者 院海英 徐芳 +2 位作者 吕新华 崔百明 黄先忠 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第1期1-4,共4页

以新疆小拟南芥为材料,分离了小拟南芥经500mmol/L NaCl胁迫处理的幼苗总RNA,采用改良的SMARTcDNA合成方法合成第一链cDNA,采用LD PCR的方法合成第二链cDNA,经BP反应重组到入门载体pDONR207上,构建了小拟南芥高盐胁迫的入门cDNA文库。... 以新疆小拟南芥为材料,分离了小拟南芥经500mmol/L NaCl胁迫处理的幼苗总RNA,采用改良的SMARTcDNA合成方法合成第一链cDNA,采用LD PCR的方法合成第二链cDNA,经BP反应重组到入门载体pDONR207上,构建了小拟南芥高盐胁迫的入门cDNA文库。文库插入片段平均大小为1.1kb,阳性克隆率为94%。文库经随机挑选克隆测序,生物信息学分析初步获得了10个有功能的基因,其中包含各种酶如水解酶、氧化还原酶等;功能蛋白如离子运输通道蛋白、胁迫诱导蛋白,细胞色素蛋白及激素受体蛋白基因等。可以利用入门文库构建各种目的cDNA文库,本研究为将来从小拟南芥中筛选耐盐基因奠定了基础。 展开更多

关键词 新疆小拟南芥 耐盐 入门文库 表达文库 BP重组

在线阅读 下载PDF 职称材料

棉花DELLA蛋白GhGAI2b基因的克隆和功能初步分析 被引量：7

6

作者 陈英杰 詹杰鹏 +2 位作者 王志江 崔百明 郑银英 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第5期635-640,共6页

DELLA蛋白是赤霉素信号途径的负调节因子,在棉花纤维发育中有着重要作用。本研究采用同源克隆方法,从棉花中克隆DELLA蛋白Gh GAI2b基因,构建p BP35S:Gh GAI2b和p BP35S:Ghgai2b植物过表达载体,通过农杆菌介导的滴花法转化Col野生型拟南... DELLA蛋白是赤霉素信号途径的负调节因子,在棉花纤维发育中有着重要作用。本研究采用同源克隆方法,从棉花中克隆DELLA蛋白Gh GAI2b基因,构建p BP35S:Gh GAI2b和p BP35S:Ghgai2b植物过表达载体,通过农杆菌介导的滴花法转化Col野生型拟南芥。结果表明,棉花DELLA蛋白Gh GAI2b包含了DELLA蛋白家族中所有的典型保守区域;转基因拟南芥表现出莲座叶半径变短,植株矮化,花序紧凑,花器官发育迟缓等生长发育受抑制表型。说明棉花DELLA蛋白Gh GAI2b基因可能参与GA信号途径抑制植物生长发育。 展开更多

关键词 棉花 赤霉素 DELLA蛋白 GhGAI2b基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

棉花脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆、原核表达与纯化 被引量：14

7

作者 李学宁 杜军伟 李鸿彬 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2010年第5期542-545,共4页

为进一步探讨脱氢抗坏血酸还原酶的生物学功能,克隆棉花的脱氢抗坏血酸还原酶基因,对该基因进行了原核表达,并对重组蛋白进行纯化和分析。通过RT-PCR方法扩增脱氢抗坏血酸还原酶基因全长,利用BamH I和Xhol I酶切位点将其克隆至组氨酸(hi... 为进一步探讨脱氢抗坏血酸还原酶的生物学功能,克隆棉花的脱氢抗坏血酸还原酶基因,对该基因进行了原核表达,并对重组蛋白进行纯化和分析。通过RT-PCR方法扩增脱氢抗坏血酸还原酶基因全长,利用BamH I和Xhol I酶切位点将其克隆至组氨酸(histidine,His)融合蛋白表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(isopropy--βD-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,用SDS-PAGE鉴定表达产物,并用亲和层析柱纯化重组表达的pET28a-DHAR蛋白。结果表明:重组体PET28a-DHAR经测序和酶切鉴定证实构建成功。导入大肠杆菌BL21进行表达,SDS-PAGE分析目的蛋白高效表达,相对分子量为26 kD左右,并获得了纯化的His-DHAR融合蛋白。 展开更多

关键词 棉花 脱氢抗坏血酸还原酶基因 克隆 原核表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

棉花DELLA蛋白GhGAI4a基因在拟南芥中功能初步分析 被引量：6

8

作者 吕西洋 崔百明 +3 位作者 段琛 陈英杰 黄先忠 郑银英 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第5期529-535,共7页

为了探究棉花DELLA蛋白基因GhGAI4a在拟南芥中的功能,构建植物表达载体pBP35S∶GhGAI4a和pBP35S∶Ghgai4a,利用农杆菌介导的花滴法将其转入Col野生型拟南芥。结果显示,2个载体各自获得6个独立的转基因拟南芥纯合株系。分别统计48-96h种... 为了探究棉花DELLA蛋白基因GhGAI4a在拟南芥中的功能,构建植物表达载体pBP35S∶GhGAI4a和pBP35S∶Ghgai4a,利用农杆菌介导的花滴法将其转入Col野生型拟南芥。结果显示,2个载体各自获得6个独立的转基因拟南芥纯合株系。分别统计48-96h种子萌发率,测量生长7d后幼苗的主根长度,与非转基因植株相比,过量表达GhGAI4a、Ghgai4a对拟南芥种子萌发及主根生长具有明显的抑制作用。1μmol/L GA处理转基因植株,GhGAI4a转基因植株主根长和萌发率均增大,而Ghgai4a转基因植株主根长度和萌发率均无显著变化。 展开更多

关键词 棉花 GhGAI4a基因 DELLA蛋白 赤霉素

在线阅读 下载PDF 职称材料

MLL启动子驱动SST基因转化甜菜的抗旱性分析 被引量：5

9

作者 梁文洁 张丽 +3 位作者 郭新勇 王爱英 向本春 祝建波 《江苏农业科学》 2018年第5期43-48,共6页

将洋葱(Allium cepa)的蔗糖-果糖基转移酶基因SST与甜菜根部特异性启动子MLL重组,以p BI121为起始载体,构建p BI121-MLL-SST,通过农杆菌介导法转化甜菜(Beta vulgaris)品种STFD4,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,简称PCR... 将洋葱(Allium cepa)的蔗糖-果糖基转移酶基因SST与甜菜根部特异性启动子MLL重组,以p BI121为起始载体,构建p BI121-MLL-SST,通过农杆菌介导法转化甜菜(Beta vulgaris)品种STFD4,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,简称PCR)鉴定转化植株,并用逆转录PCR(reverse transcription PCR,简称RT-PCR)技术检测SST基因的表达。利用干旱胁迫处理进行抗旱性分析,结果表明,与对照(CK)相比,转SST植株叶片萎蔫较迟且程度较轻,其叶片相对含水量和光系统Ⅱ相对量子产率的降低幅度、相对电导率和丙二醛含量的提高幅度均低于对照甜菜植株。以上结果表明,SST基因可明显提高甜菜的抗旱性,为进一步研究该基因在甜菜中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 蔗糖-果糖基转移酶(SST) 植物表达载体 根部特异性启动子 甜菜 转化

在线阅读 下载PDF 职称材料

转菜豆几丁质酶和葡聚糖酶基因抗病棉花与野西瓜苗和苘麻间的基因漂移和生存竞争力分析 被引量：1

10

作者 邱红林 张林华 +4 位作者 刘超 吴名付 何黎 祝建波 王爱英 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期432-439,共8页

利用培育的转菜豆几丁质酶和葡聚糖酶双价基因(pBLGC)的抗病棉花高代株系与同科植物(野西瓜苗和苘麻)杂交及其DNA渗入试验,研究北疆生态区基因漂移的可能性。通过裸地种植的方式,在棉花苗期、蕾期、花铃期和吐絮期对转基因抗病棉花与田... 利用培育的转菜豆几丁质酶和葡聚糖酶双价基因(pBLGC)的抗病棉花高代株系与同科植物(野西瓜苗和苘麻)杂交及其DNA渗入试验,研究北疆生态区基因漂移的可能性。通过裸地种植的方式,在棉花苗期、蕾期、花铃期和吐絮期对转基因抗病棉花与田间杂草的株高、群落的种类及种群密度、生物多样性和生物量进行监测,分析转基因抗病棉花与田间杂草的生存竞争能力。试验结果表明:棉花与同科植物(野西瓜苗和苘麻)远缘杂交不能正常结实。通过转基因棉花花粉DNA将目标基因渗入杂草基因组经检测均未获得阳性植株,说明转基因抗病棉花的靶标基因转移至杂草基因组的可能性很小。在裸地种植的田间正常灌水和自然条件下,不同区域物种植株株高以及种群密度等指标表明转基因棉花并未增强自身与杂草的竞争能力,转化为杂草的可能性几乎为零。 展开更多

关键词 转基因抗病棉花 杂草群落 生物量 生物多样性 生物安全性评价

在线阅读 下载PDF 职称材料

GDSL脂肪酶增强棉花对大丽轮枝菌的抗性

11

作者 安晶 潘泽 李鸿彬 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第4期420-424,共5页

大丽轮枝菌是影响棉花生长发育的一种通过土传真菌维管束的病菌,严重影响棉花纤维的产量和品质。为研究棉花GDSL脂肪酶(GDSL lipase,GLIP)在植物响应大丽轮枝菌中的重要功能,本研究利用大丽轮枝菌悬浮液对新陆早42号及其转GhGLIP基因的... 大丽轮枝菌是影响棉花生长发育的一种通过土传真菌维管束的病菌,严重影响棉花纤维的产量和品质。为研究棉花GDSL脂肪酶(GDSL lipase,GLIP)在植物响应大丽轮枝菌中的重要功能,本研究利用大丽轮枝菌悬浮液对新陆早42号及其转GhGLIP基因的棉花株系叶片进行处理,分析转GhGLIP棉花株系对大丽轮枝菌的生理生化响应。结果表明,棉花GDSL脂肪酶基因GhGLIP能够响应大丽轮枝菌的刺激,转GhGLIP基因棉花株系可显著抑制大丽轮枝菌导致的叶片细胞死亡。与未处理相比,经大丽轮枝菌处理后的野生型和转基因棉花株系植株的GDSL脂肪酶活力显著增加。同时,转基因棉花株系植株过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、苯丙氨酸解氨酶和多酚氧化物酶的表达显著提升,说明GhGLIP基因诱导了棉花对大丽轮枝菌的抗性。本研究为棉花抵抗大丽轮枝菌的分子机制解析,及进一步利用基因工程技术培育抗病棉花材料提供了有效参考。 展开更多

关键词 GDSL脂肪酶 大丽轮枝菌 棉花抗病 抗氧化系统酶类

在线阅读 下载PDF 职称材料

新疆雪莲DAD1基因提高烟草的抗旱性与抗盐性 被引量：4

12

作者 孙建富 陈尚珂 +1 位作者 王爱英 祝建波 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第4期84-86,共3页

利用已构建好的pCMB IA 2301-35S-DAD1植物表达载体,利用叶盘法转化烟草获得转基因烟草植株。在PEG6000模拟干旱、盐(NaC l)胁迫条件下,对转基因烟草的相对含水量、脯氨酸、丙二醛的含量进行测定分析。结果表明:转基因烟草对干旱、高盐... 利用已构建好的pCMB IA 2301-35S-DAD1植物表达载体,利用叶盘法转化烟草获得转基因烟草植株。在PEG6000模拟干旱、盐(NaC l)胁迫条件下,对转基因烟草的相对含水量、脯氨酸、丙二醛的含量进行测定分析。结果表明:转基因烟草对干旱、高盐的耐受性都有一定程度的提高。说明DAD1衰老调节因子基因可以减缓烟草在逆境条件下的衰老,提高了烟草的抗逆性。 展开更多

关键词 DAD1基因 转基因烟草 脯氨酸 丙二醛

在线阅读 下载PDF 职称材料

转基因棉花室内种质筛选新方法研究 被引量：3

13

作者 寇伟 李榕 +2 位作者 陈英杰 崔百明 郑银英 《中国棉花》 2014年第2期22-26,共5页

为进一步改进转基因棉花室内筛选系统,使用5000mg·L-1浓度卡那霉素分别对转Bt基因棉花和非转基因棉花品种新陆早33的种子进行卡那霉素影响侧根生成的实验研究,经过卡那霉素溶液处理的棉花种子在基质中培养5d后进行数据统计,然后分... 为进一步改进转基因棉花室内筛选系统,使用5000mg·L-1浓度卡那霉素分别对转Bt基因棉花和非转基因棉花品种新陆早33的种子进行卡那霉素影响侧根生成的实验研究,经过卡那霉素溶液处理的棉花种子在基质中培养5d后进行数据统计,然后分别提取生成和不生成侧根的棉花幼苗子叶DNA,进一步经聚合酶链式反应(PCR)鉴定确认。结果表明:用5000mg·L-1的卡那霉素对2个品种进行筛选时,Bt棉89%有侧根形成,而新陆早33仅2%有侧根发生。PCR鉴定结果也显示有侧根生成的棉花幼苗具有卡那霉素抗性基因NPTII和抗虫基因Bt。实验结果与预期结果一致,所以这种筛选新方法可以作为有效快捷的转基因棉花室内筛选方案。 展开更多

关键词 卡那霉素(kanamycin) 侧根 筛选 转基因 棉花

在线阅读 下载PDF 职称材料

靶向加工番茄elF4E1的CRISPR/Cas9载体有效性验证 被引量：1

14

作者 付紫梅 袁伦 +3 位作者 邵冬南 郝小军 崔百明 向本春 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期230-237,共8页

【目的】验证基于CRISPR/Cas9系统构建的靶向编辑加工番茄(Solanum lycopersicum)e IF4E1基因载体的有效性,为CRISPR/Cas9系统在培育PVY抗性植株中的应用提供技术支持。【方法】构建靶向编辑番茄真核翻译起始因子el F4E1基因的CRISPR/C... 【目的】验证基于CRISPR/Cas9系统构建的靶向编辑加工番茄(Solanum lycopersicum)e IF4E1基因载体的有效性,为CRISPR/Cas9系统在培育PVY抗性植株中的应用提供技术支持。【方法】构建靶向编辑番茄真核翻译起始因子el F4E1基因的CRISPR/Cas9系统表达载体,用农杆菌渗透法瞬时转化番茄植株,PCR扩增已转化植株靶位点周围DNA序列后用HaeⅢ进行酶切,回收未切开的条带与p GEM-T载体连接后进行单克隆测序。【结果】对测得的9个克隆序列进行比对分析,在PAM(protospacer adjacent motifs)上游的6~8 bp的碱基处均发生突变,并且都为单碱基的替换,导致多肽链中单个氨基酸的替换。【结论】利用CRISPR/Cas9基因组编辑系统构建的载体能够特异性地靶向加工番茄e IF4E1基因,为利用CRISPR/Cas9系统敲除e IF4E1基因,获得抗PVY病毒的番茄育种材料奠定了基础。 展开更多

关键词 加工番茄 PVY elF4E1 CRISPR/Cas9 瞬时转化

在线阅读 下载PDF 职称材料

拟南芥AtSuc3和AtSuc4基因的克隆及双价植物表达载体的构建

15

作者 张彦伟 祝建波 +2 位作者 沈海涛 王爱英 向本春 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2010年第1期6-10,共5页

蔗糖转运蛋白在调节同化产物的分配过程中起重要作用。为了分析拟南芥蔗糖转运蛋白基因AtSuc3、At-Suc4的功能和协同作用,以哥伦比亚型拟南芥为材料,通过RT-PCR技术克隆了蔗糖转运蛋白基因(sucrose/H+cotransporters,SUCs)AtSuc3和AtSuc... 蔗糖转运蛋白在调节同化产物的分配过程中起重要作用。为了分析拟南芥蔗糖转运蛋白基因AtSuc3、At-Suc4的功能和协同作用,以哥伦比亚型拟南芥为材料,通过RT-PCR技术克隆了蔗糖转运蛋白基因(sucrose/H+cotransporters,SUCs)AtSuc3和AtSuc4的cDNA,利用甘薯贮藏蛋白基因(sporamin)的根部特异性启动子,构建了含有含有AtSuc3和AtSuc4 cDNA的单价植物表达载体pBI2301-q3-s3、pBI2301-q4-s4和双价植物表达载体pBI2301-q3-s3-q4-s4,为进一步分析该植物表达载体在调控库源关系中的作用以及在经济作物中的应用奠定基础。 展开更多

关键词 蔗糖转运蛋白 AtSuc3 AtSuc4 植物表达载体 构建

在线阅读 下载PDF 职称材料

通过pR1aS导肽提高植物中绿色荧光蛋白的激发强度

16

作者 王辉 李小红 +2 位作者 王爱英 沈海涛 祝建波 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2010年第1期1-5,共5页

绿色荧光蛋白在植物细胞胞质表达中对转化植物细胞的再生存在不利的影响,为增强绿色荧光蛋白在植物细胞中的表达,在mgfp的5'端连接了pR1aS信号肽序列,同时在3'末端引入滞留在内质网中的特异序列KDEL,成功构建了植物表达载体pBLG... 绿色荧光蛋白在植物细胞胞质表达中对转化植物细胞的再生存在不利的影响,为增强绿色荧光蛋白在植物细胞中的表达,在mgfp的5'端连接了pR1aS信号肽序列,同时在3'末端引入滞留在内质网中的特异序列KDEL,成功构建了植物表达载体pBLG-pR1aS-gfp,经转基因烟草表达分析,结果表明:转化体植株显著增加了绿色荧光蛋白在烟草中的表达,同时消除了绿色荧光蛋白对植物潜在的光毒害。这为植物转基因转化频率的研究和转基因植物安全性评价提供了一种有利的工具。 展开更多

关键词 pR1aS导肽 绿色荧光蛋白 激发强度 烟草

在线阅读 下载PDF 职称材料

加工番茄PVY^(N:O) HC-Pro、STV RdRp酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活验证

17

作者 路遥 周东 郑银英 《江苏农业科学》 2018年第17期49-52,共4页

马铃薯Y病毒(potato virus Y,简称PVY)和南方番茄病毒(southern tomato virus,简称STV)是加工番茄上非常普遍的病毒,以从加工番茄c DNA文库中筛选与病毒功能蛋白互作的基因为目标,构建PVY HC-Pro、STV RdRp Cyto Trap酵母双杂交诱饵载体... 马铃薯Y病毒(potato virus Y,简称PVY)和南方番茄病毒(southern tomato virus,简称STV)是加工番茄上非常普遍的病毒,以从加工番茄c DNA文库中筛选与病毒功能蛋白互作的基因为目标,构建PVY HC-Pro、STV RdRp Cyto Trap酵母双杂交诱饵载体,为抗病基因的筛选工作奠定基础。通过PCR技术,扩增PVY HC-Pro、STV RdRp片段分别克隆到诱饵载体p Sos,用酶切、测序结果正确的2个诱饵载体重组质粒转化酵母感受态cdc25H,进行自激活检测及毒性验证。将不同组合的酵母转化液涂布于SD/Glu(-UL)培养基(SD/Glu指含有葡萄糖的SD培养基,-UL指缺失尿嘧啶、亮氨酸2种氨基酸)平板上,于25℃培养4 d后,挑取3个单菌落分别划线于2个SD/Glu(-UL)和2个SD/Gal(-UL)培养基上,并分别置于25、37℃继续培养5 d。结果表明,在25℃培养条件下,SD/Glu(-UL)和SD/Gal(-UL)培养基上酵母菌生长正常;在37℃培养条件下,SD/Glu(-UL)培养基上无酵母菌的生长,SD/Gal(-UL)培养基上阳性组合酵母生长正常,阴性组合酵母均不生长。构建的p Sos-HC-Pro、p Sos-RdRp诱饵载体没有转录自激活活性和毒害作用,可用于Cyto Trap酵母双杂交系统。 展开更多

关键词 加工番茄 PVY STV 酵母双杂交 自激活 诱饵载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

抑制NtVTC1基因的表达延缓烟草生长发育

18

作者 陈丽华 李鸿彬 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2018年第5期617-623,共7页

目的研究VTC1通过调控细胞内抗坏血酸(Ascorbic acid, AsA)的合成参与植物生长发育和响应逆境的重要功能。方法构建烟草VTC1基因的RNAi干扰表达载体RNAi-NtVTC1并转化烟草,通过抑制烟草VTC1基因的表达分析其影响植物发育的重要功能。结... 目的研究VTC1通过调控细胞内抗坏血酸(Ascorbic acid, AsA)的合成参与植物生长发育和响应逆境的重要功能。方法构建烟草VTC1基因的RNAi干扰表达载体RNAi-NtVTC1并转化烟草,通过抑制烟草VTC1基因的表达分析其影响植物发育的重要功能。结果将构建的干扰载体RNAi-NtVTC1转化烟草,成功获得了转基因株系RI。半定量PCR(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结果表明转基因烟草株系RI中NtVTC1基因的表达显著被抑制。AsA含量测定结果表明:与野生型烟草相比,转基因烟草株系RI的AsA含量均显著降低,为野生型的30%～40%。对烟草的表型观察发现,转基因烟草株系RI的发育显著受到抑制,尤其是在植株整体发育、叶片延展发育、开花等方面表现出显著延迟的表型。烟草抗氧化系统酶活性测定结果表明:转基因烟草株系RI中抗氧化系统酶活性如抗坏血酸过氧化物酶(APX)、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)、过氧化物酶(CAT)和谷胱甘肽还原酶的酶活性(GR)都显著降低。结论 VTC1基因在植物的生长发育过程中发挥着重要作用,为进一步深入研究VTC1基因的功能提供了良好参考。 展开更多

关键词 陆地棉 烟草 抗坏血酸合成 VTC1 RNA干扰 抗氧化系统

在线阅读 下载PDF 职称材料