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布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0339基因的原核表达及免疫反应性分析被引量：2: 1; 作者刘来珍孙志华 +3 位作者刘娟史静雪陈创夫张辉《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2015年第6期716-720,共5页; 本研究对布鲁氏菌分泌蛋白BMEI0339进行了表达纯化、免疫反应性分析,并研究了该蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的细胞因子表达的影响。首先从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI0339基因片段,亚克隆至融合表达载体p E... 展开更多; 关键词布鲁氏菌 BMEI0339 原核表达细胞因子胚胎滋养层细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

布鲁菌DK63＿426基因缺失株的构建及生物学特性研究被引量：1: 2; 作者李明奇王小凤 +5 位作者郭嘉赵天艺刘航张樊吴长新张辉《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第1期31-36,共6页; 目的本研究构建了羊布鲁菌16M DK 63_426基因缺失株,分析其在细胞内的生存繁殖和致炎能力。方法以羊布鲁菌16M株基因组为模板,利用融合PCR技术将DK 63_426基因的上下游同源臂和卡那抗性基因融合,连接到克隆载体上,通过基因重组构建布鲁... 展开更多; 关键词布鲁菌缺失株脂多糖 DK 63_426基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达及功能分析: 3; 作者豆晓霞刘洋 +5 位作者李敏荆明龙李明奇王小凤陈创夫张辉《江苏农业科学》 2018年第12期33-38,共6页; 为构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达载体,并进行表达、鉴定。从羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)16M株的基因组中克隆BMEI0742基因片段,亚克隆到pMD19-T载体中并测序,克隆至表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-B... 展开更多; 关键词布鲁氏菌 BMEI0742基因鉴定原核表达反应原性; 在线阅读下载PDF 职称材料

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因的原核表达: 4; 作者刘来珍孙志华 +3 位作者刘娟史静雪陈创夫张辉《草食家畜》 2015年第5期25-30,共6页; 【目的】构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因的原核表达载体,并进行免疫原性及其对人胚胎滋养层细胞(HPT-8)细胞因子表达量影响的分析。【方法】本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI0580基因片段,亚... 展开更多; 关键词布鲁氏菌 BMEI0580基因原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI1069基因的原核表达与分析: 5; 作者刘来珍孙志华 +3 位作者刘娟史静雪陈创夫张辉《现代畜牧兽医》 2015年第3期6-11,共6页; 为构建布鲁氏菌分泌蛋白BMEI1069基因的原核表达载体,进行分析,分析该蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)细胞因子表达量的影响,本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI1069基因片段,亚克隆到p MD19-T载体中并测序,... 展开更多; 关键词布鲁氏菌 BMEI1069 原核表达细胞因子胚胎滋养层细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白基因VceA的原核表达、纯化及功能分析被引量：3: 6; 作者史静雪刘来珍 +5 位作者李敏荆明龙刘洋张豫刘航张辉《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第1期83-88,共6页; 本研究对布鲁氏菌分泌蛋白VceA基因进行了原核表达与纯化,并分析其反应原性,致炎特性和分子特性。应用PCR技术从布鲁氏菌2308基因组中扩增VceA基因,亚克隆至PMD19-T载体后,进行测序,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-VceA,然后转化至E.coli BL... 展开更多; 关键词布鲁氏菌 Ⅳ型分泌系统 VceA基因细胞因子; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛种布鲁氏菌2308参考株Δ VceC基因缺失株的构建与鉴定被引量：2: 7; 作者李敏史静雪 +4 位作者李志强荆明龙刘洋陈创夫张辉《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第6期714-719,共6页; 为了研究布鲁氏菌四型分泌系统VceC蛋白的功能,构建牛种布鲁氏菌2308参考株△vceC的基因突变株,本研究以牛种布鲁氏菌参考株2308的分泌蛋白VceC为研究对象,以牛种布鲁氏菌参考株基因组为模板,高保真(pfu酶)扩增VceC基因的上下游同源臂基... 展开更多; 关键词布鲁氏菌 vceC基因同源重组稳定遗传; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0339基因的原核表达及免疫反应性分析被引量：2: 1; 作者刘来珍孙志华刘娟史静雪陈创夫张辉; 机构石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室; 出处《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2015年第6期716-720,共5页; 基金国家自然科学基金项目(31460650); 文摘本研究对布鲁氏菌分泌蛋白BMEI0339进行了表达纯化、免疫反应性分析,并研究了该蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的细胞因子表达的影响。首先从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI0339基因片段,亚克隆至融合表达载体p ET-28a,构建表达重组质粒p ET-28a-BMEI0339,并利用大肠杆菌进行表达。Western blotting方法检测其免疫学特性;用纯化的重组蛋白感染细胞,并检测IL-1、IL-10和TNF-α表达量。结果显示:成功构建了p ET-28a-BMEI0339原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了BMEI0339蛋白,Western blotting检测其具有免疫反应性,该蛋白作用细胞后发现TNF-α的表达量低于BSA对照组,差异极显著(P<0.01);IL-1和IL-10的表达量差异不显著(P>0.05)。本研究成功表达了布鲁氏菌分泌蛋白BMEI0339,证实其具有一定的免疫原性,表明该蛋白影响了胚胎滋养层细胞TNF-α的表达。本研究为研究布鲁氏菌感染宿主细胞的致病机理提供理论基础。; 关键词布鲁氏菌 BMEI0339 原核表达细胞因子胚胎滋养层细胞; Keywords Brucella BMEIO339 prokaryotic expression cytokine embryonic trophoblast cells; 分类号 S852.5 [农业科学—基础兽医学] R516.7 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名布鲁菌DK63＿426基因缺失株的构建及生物学特性研究被引量：1: 2; 作者李明奇王小凤郭嘉赵天艺刘航张樊吴长新张辉; 机构石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室; 出处《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第1期31-36,共6页; 基金国际科技合作项目(GJHZ201709) 新疆生产建设兵团人才项目(CZ027202,2017CB002); 文摘目的本研究构建了羊布鲁菌16M DK 63_426基因缺失株,分析其在细胞内的生存繁殖和致炎能力。方法以羊布鲁菌16M株基因组为模板,利用融合PCR技术将DK 63_426基因的上下游同源臂和卡那抗性基因融合,连接到克隆载体上,通过基因重组构建布鲁菌16M DK 63_426基因缺失株16MΔDK 63_426,观察布鲁菌亲本株16M和16MΔDK 63_426的生长变化趋势,建立侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,检测亲本株和缺失株16MΔDK 63_426在胞内的生存能力,检测IL-6、TNF-α细胞因子释放量。结果成功构建了16MΔDK 63_426;在体外相同培养条件下该缺失株与亲本株生长趋势相似,培养12 h即进入对数生长期,30 h进入平台期;16MΔDK 63_426在浸染RAW264.7细胞12 h胞内存活率极显著低于亲本株(P<0.01),在浸染8 h时IL-6的分泌量缺失株组均显著低于亲本株(P<0.05),TNF-α的分泌量缺失株组均显著高于亲本株(P<0.05),在侵染12 h时IL-6的分泌量缺失株组均极显著低于亲本株(P<0.01),TNF-α的分泌量缺失株组均极显著高于亲本株(P<0.01)。结论DK 63_426基因的缺失可影响布鲁菌的胞内存活,影响相关炎症因子的表达,为布鲁菌感染机制的研究奠定理论基础。; 关键词布鲁菌缺失株脂多糖 DK 63_426基因; Keywords Brucella deletion strain lipopolysaccharide DK 63_426 gene; 分类号 S852.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达及功能分析: 3; 作者豆晓霞刘洋李敏荆明龙李明奇王小凤陈创夫张辉; 机构石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室; 出处《江苏农业科学》 2018年第12期33-38,共6页; 基金国家国际科技合作专项(编号:2015DFR31110); 文摘为构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达载体,并进行表达、鉴定。从羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)16M株的基因组中克隆BMEI0742基因片段,亚克隆到pMD19-T载体中并测序,克隆至表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-BMEI0742利用大肠杆菌进行表达,并进行Western-Blot检测,对该蛋白功能进行生物信息学分析。成功构建了pET-28a-BMEI0742原核表达载体,SDS-PAGE检测结果显示,重组蛋白的分子量约是50 ku,BMEI0742蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,不存在信号肽,二级结构以α-螺旋为主并利用Phyre2服务器成功构建了该蛋白的三维模型。本研究成功表达了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因,并成功获得了BMEI0742蛋白,该蛋白具有与布鲁氏菌自身蛋白相同的抗原性,为布鲁氏菌翻译延伸因子Tu,为进一步研究其免疫性和保护性以及在布鲁氏菌的致病机制奠定基础。; 关键词布鲁氏菌 BMEI0742基因鉴定原核表达反应原性; 分类号 S855.99 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因的原核表达: 4; 作者刘来珍孙志华刘娟史静雪陈创夫张辉; 机构石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室; 出处《草食家畜》 2015年第5期25-30,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31460650); 文摘【目的】构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因的原核表达载体,并进行免疫原性及其对人胚胎滋养层细胞(HPT-8)细胞因子表达量影响的分析。【方法】本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI0580基因片段,亚克隆到pMD19-T载体中并测序,克隆至表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-BMEI0580利用大肠杆菌进行表达,并进行Western-Blot检测,ELISA方法检测细胞因子的表达量。【结果】成功构建了pET-28a-BMEI0580原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了BMEI0580基因,经过SDS-PAGE检测,重组蛋白的分子量大约是57kDa,Western-Blot检测其具有免疫特性。【结论】本实验成功表达了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因,为进一步研究其免疫性和保护性奠定了基础。; 关键词布鲁氏菌 BMEI0580基因原核表达; Keywords brucella BMEI0580 gene prokaryotic expression; 分类号 S855.1 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI1069基因的原核表达与分析: 5; 作者刘来珍孙志华刘娟史静雪陈创夫张辉; 机构石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室; 出处《现代畜牧兽医》 2015年第3期6-11,共6页; 基金国家自然科学基金(31460650); 文摘为构建布鲁氏菌分泌蛋白BMEI1069基因的原核表达载体,进行分析,分析该蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)细胞因子表达量的影响,本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI1069基因片段,亚克隆到p MD19-T载体中并测序,构建表达重组质粒p ET-28a-BMEI1069。转染大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用Western-Blot方法检测其免疫学特性,用纯化的重组蛋白感染细胞,并检测细胞因子含量。结果表明,获得了p ET-28a-BMEI1069原核表达载体,在大肠杆菌中表达了BMEI1069蛋白,经过SDS-PAGE检测,重组蛋白的分子量大约是58 k Da,western blotting检测显示具有免疫特性,细胞加入BMEI1069重组蛋白后细胞因子IL-1、IL-10和TNF-α的表达均高于PBS对照组,差异显著(P<0.05)。本试验成功表达了布鲁氏菌分泌蛋白BMEI1069,证实其有一定的免疫特性,并且重组蛋白可以影响细胞因子的表达。这将为研究分泌蛋白在免疫逃逸和维持持续性感染的机制方面奠定基础。; 关键词布鲁氏菌 BMEI1069 原核表达细胞因子胚胎滋养层细胞; Keywords Brucella BMEI1069 Prokaryotic expression Cytokine HPT-8; 分类号 S855.12 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白基因VceA的原核表达、纯化及功能分析被引量：3: 6; 作者史静雪刘来珍李敏荆明龙刘洋张豫刘航张辉; 机构石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室; 出处《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第1期83-88,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31402166) 国际科技合作项目(2013BC005); 文摘本研究对布鲁氏菌分泌蛋白VceA基因进行了原核表达与纯化,并分析其反应原性,致炎特性和分子特性。应用PCR技术从布鲁氏菌2308基因组中扩增VceA基因,亚克隆至PMD19-T载体后,进行测序,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-VceA,然后转化至E.coli BL21(DE3)表达菌中,IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析,Western Blot检测其反应原性;用重组蛋白作用于细胞,检测炎症相关细胞因子的分泌量;并对该蛋白进行生物信息学分析。结果显示:PCR扩增出VceA基因,SDS-PAGE显示纯化的VceA融合蛋白大约在37 kD处,Western Blot也出现了杂交带。细胞实验表明重组蛋白刺激细胞后产生的IL-18,IL-1β,TGF-β1的含量均显著高于BSA对照组(P<0.05)。生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,存在信号肽,属于分泌型蛋白,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,并利用Phyre2软件成功构建了该蛋白的三维模型。结果表明,成功克隆并表达了布鲁氏菌Vce A蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,并具有致炎作用。这为进一步研究布鲁氏菌分泌蛋白的致病机制奠定了基础。; 关键词布鲁氏菌 Ⅳ型分泌系统 VceA基因细胞因子; Keywords Brucella Type IV secretion system Vce A cytokine; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛种布鲁氏菌2308参考株Δ VceC基因缺失株的构建与鉴定被引量：2: 7; 作者李敏史静雪李志强荆明龙刘洋陈创夫张辉; 机构石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室; 出处《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第6期714-719,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31402166); 文摘为了研究布鲁氏菌四型分泌系统VceC蛋白的功能,构建牛种布鲁氏菌2308参考株△vceC的基因突变株,本研究以牛种布鲁氏菌参考株2308的分泌蛋白VceC为研究对象,以牛种布鲁氏菌参考株基因组为模板,高保真(pfu酶)扩增VceC基因的上下游同源臂基因;以卡那抗性基因质粒为模板高保真扩增卡那抗性基因,运用融合PCR将上下游同源臂和卡那抗性基因融合,用TA克隆的方法将融合片段连接到克隆载体上,再用电转化的方法将载体转入布鲁氏菌2308感受态细胞中,最后用卡那抗性筛选并检测其遗传稳定性。将亲本株2308缺失株2308△VceC在相同起始浓度下震荡培养,观察其生长变化趋势;侵染人胚胎滋养层细胞(HPT-8),比较其在胞内的生存能力。结果显示:利用T载体克隆和抗性替换的方法成功构建了2308的VceC的突变株,与亲本株相比,2308△VceC在体外培养生长趋势与亲本株相似,在12 h时进入对数生长期,30 h时进入平台期,胞内CFU显示侵染12 h后缺失株胞内细菌数量明显下降,亲本株2308和2308-Δ VceC缺失突变株在12 h时差异显著。本研究为布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统的功能研究奠定了基础。; 关键词布鲁氏菌 vceC基因同源重组稳定遗传; Keywords Brucella VceC gene homologous recombination stable inheritance; 分类号 S511 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0339基因的原核表达及免疫反应性分析	刘来珍孙志华刘娟史静雪陈创夫张辉	《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS	2015	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	布鲁菌DK63＿426基因缺失株的构建及生物学特性研究	李明奇王小凤郭嘉赵天艺刘航张樊吴长新张辉	《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心	2020	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达及功能分析	豆晓霞刘洋李敏荆明龙李明奇王小凤陈创夫张辉	《江苏农业科学》	2018	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因的原核表达	刘来珍孙志华刘娟史静雪陈创夫张辉	《草食家畜》	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI1069基因的原核表达与分析	刘来珍孙志华刘娟史静雪陈创夫张辉	《现代畜牧兽医》	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白基因VceA的原核表达、纯化及功能分析	史静雪刘来珍李敏荆明龙刘洋张豫刘航张辉	《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS	2017	3	在线阅读下载PDF 职称材料
7	牛种布鲁氏菌2308参考株Δ VceC基因缺失株的构建与鉴定	李敏史静雪李志强荆明龙刘洋陈创夫张辉	《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS	2017	2	在线阅读下载PDF 职称材料