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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白纳米抗体的筛选及其对病毒复制的抑制效应
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作者 宋雯妍 张瀚文 +5 位作者 吴澳迪 张丽燕 刘照 叶桐桐 陈创夫 盛金良 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期258-270,共13页
为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并探究其对病毒复制的抑制效应。使用原核表达系统将PRRSV-GP5蛋白大量表达后经镍柱亲和层析法纯化,使用所获的重组... 为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并探究其对病毒复制的抑制效应。使用原核表达系统将PRRSV-GP5蛋白大量表达后经镍柱亲和层析法纯化,使用所获的重组GP5蛋白免疫羊驼,并于第0、14、28、42天时采血,检测羊驼体内抗体效价后分离全血淋巴细胞,提取细胞总RNA,反转录后使用巢式PCR扩增出重链抗体可变区(VHH)片段,并与pCANTAB-5E载体相连后转化入TG1感受态细胞,利用噬菌体展示技术构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库。经连续三轮特异性噬菌体的筛选与富集后,淘选出与PRRSV-GP5蛋白高结合力的纳米抗体,通过间接ELISA方法鉴定其反应原性,后将所获的纳米抗体基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,利用Lipofectamine3000转染至Marc^(-1)45细胞内,与PRRSV分别共孵育0、24、36、48、60、72 h,以探究所筛针对PRRSV-GP5蛋白的纳米抗体于胞内对病毒复制与转录产生的影响。结果表明,成功对PRRSV-GP5蛋白进行原核表达并纯化,得到浓度为2.16 mg·mL^(-1)的重组蛋白,对羊驼三次免疫14 d后,其体内抗体效价高达1∶819200,构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库,库容量达2.93×107 CFU·mL^(-1),插入率为98%。经对噬菌体抗体文库连续三轮淘选富集后,最终获得2株不同氨基酸序列的纳米抗体。间接ELISA结果显示,2株纳米抗体均与PRRSV-GP5蛋白具有良好的亲和力。将2株纳米抗体转染至Marc^(-1)45细胞内,它们分别于36与60 h时显著阻碍PRRSV的复制与转录,展现出了较好的阻碍病毒复制的能力。本研究首次筛选出针对PRRSV-GP5蛋白的特异性纳米抗体,且经验证所筛纳米抗体具备抑制PRRSV在细胞内复制的能力,研究结果为抗PRRSV新型药物的研发奠定了试验依据与物质基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 纳米抗体 噬菌体展示技术 病毒复制
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哈萨克马不同发育阶段睾丸组织学观察与分析 被引量:1
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作者 何良军 廖秋萍 +4 位作者 邓海峰 董红 毋状元 田方 陈静波 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1541-1546,共6页
【目的】对雄性哈萨克马四个发育阶,即马驹、周岁马、3岁马和5岁以上马的睾丸组织进行组织学观察与分析,了解不同阶段睾丸组织的特点,为种公马的科学管理和使用提供理论依据。【方法】采用石蜡组织切片制作技术和显微观察的方法。【结... 【目的】对雄性哈萨克马四个发育阶,即马驹、周岁马、3岁马和5岁以上马的睾丸组织进行组织学观察与分析,了解不同阶段睾丸组织的特点,为种公马的科学管理和使用提供理论依据。【方法】采用石蜡组织切片制作技术和显微观察的方法。【结果】随着马的发育成熟,马的睾丸组织体积逐渐增大,睾丸组织曲精细管的直径也依次增加。幼驹的睾丸组织尚未发育完整,为睾丸索。周岁马的曲精细管已经形成,但是生殖细胞的发育还不完全。比较3岁马和成年马的睾丸大小,曲精细管和曲精细管内的生殖细胞的数量,3岁马的睾丸体积接近成年马,但是睾丸的宽度和长度略小于成年马(P<0.05)。3岁马曲精细管的直径和细管内的精子数也略小于成年马,但差异不显著(P>0.05),精子细胞数目之间也无显著差异(P>0.05)。【结论】新疆哈萨克公马在生产中选择4岁以上的公马做种用是科学和合理的。 展开更多
关键词 哈萨克马 睾丸 组织
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哈萨克马不同发育阶段睾丸组织学研究 被引量:1
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作者 何良军 廖秋萍 +4 位作者 邓海峰 董红 毋状元 田方 陈静波 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期376-382,共7页
【目的】研究对雄性哈萨克马四个发育阶段,即马驹、周岁马、3岁马和5岁以上马的睾丸组织进行组织学观察与分析,了解不同阶段睾丸组织的特点,为种公马的科学管理和使用提供理论依据。【方法】采用石蜡组织切片制作技术和显微观察的方法... 【目的】研究对雄性哈萨克马四个发育阶段,即马驹、周岁马、3岁马和5岁以上马的睾丸组织进行组织学观察与分析,了解不同阶段睾丸组织的特点,为种公马的科学管理和使用提供理论依据。【方法】采用石蜡组织切片制作技术和显微观察的方法。【结果】随着马的发育成熟,马的睾丸组织体积逐渐增大,睾丸组织曲精细管的直径也依次增加。幼驹的睾丸组织尚未发育完全,为睾丸索;周岁马的曲精细管已经形成,但是生殖细胞的发育还不完全。比较3岁马和成年马的睾丸大小以及曲精细管和曲精细管内的生殖细胞的数量,3岁马的睾丸体积接近成年马,但是睾丸的宽度和长度略小于成年马(P<0.05)。3岁马曲精细管的直径和细管内的精子数也略小于成年马,但差异不显著(P>0.05),精子细胞数目之间也无显著差异(P>0.05)。【结论】新疆哈萨克公马在生产中选择4岁以上的公马做种用合理的。 展开更多
关键词 哈萨克马 睾丸 组织
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不同年龄马睾丸组织中miRNA-34家族含量的变化 被引量:1
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作者 何良军 王时伟 +3 位作者 邓海峰 董红 田方 陈静波 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期40-44,共5页
为研究microRNA(miRNA)-34家族在马不同发育阶段睾丸组织内的表达规律,应用实时荧光定量PCR方法,以GAPDH作为内参基因,分别对miRNA-34家族(miRNA-34a、miRNA-34b和miRNA-34c)在3个发育阶段哈萨克马睾丸组织表达情况进行检测。结果表明mi... 为研究microRNA(miRNA)-34家族在马不同发育阶段睾丸组织内的表达规律,应用实时荧光定量PCR方法,以GAPDH作为内参基因,分别对miRNA-34家族(miRNA-34a、miRNA-34b和miRNA-34c)在3个发育阶段哈萨克马睾丸组织表达情况进行检测。结果表明miRNA-34a在马睾丸发育过程中表达量较为稳定,在不同发育阶段睾丸组织内无显著差异(P>0.05)。miRNA-34b和miRNA-34c在马驹和周岁马睾丸组织中的表达量较低,在这两个年龄段表达量无显著差异(P>0.05)。而在成年马阶段出现明显上升,成年马miRNA-34b和miRNA-34c表达量与马驹和周岁马表达量有极显著的差异(P<0.01)。位于同一基因簇上的miRNA-34b和miRNA-34c具有极为类似的表达模式和结构,分析认为马的miRNA-34b和miRNA-34c也具有冗余功能。 展开更多
关键词 哈萨克马 miRNA-34家族 实时荧光定量PCR
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地方优良牛种——阿勒泰白头牛
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作者 吾热力哈孜 别克木汗 《农村实用科技信息》 2006年第11期23-23,共1页
阿勒泰白头牛以具有早熟、繁殖能力强、生长发育快、耐高寒、耐高温、耐粗饲、适应性好和抗病能力强等优良特性而深受新疆广大农牧民青睐。它还具有较好的生产能力,肉质嫩,乳脂率高,体型美观,性格温驯,是一种古老而原始的地方优良... 阿勒泰白头牛以具有早熟、繁殖能力强、生长发育快、耐高寒、耐高温、耐粗饲、适应性好和抗病能力强等优良特性而深受新疆广大农牧民青睐。它还具有较好的生产能力,肉质嫩,乳脂率高,体型美观,性格温驯,是一种古老而原始的地方优良牛种。 展开更多
关键词 阿勒泰 牛种 繁殖能力 生长发育 优良特性 抗病能力 生产能力 耐高温
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