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小西葫芦黄花叶病毒石河子分离物的分子变异 被引量：3
1
作者 王志江 杨海燕 +1 位作者 向本春 郑银英 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第6期677-682,共6页
为了研究小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)石河子分离物的分子变异情况,本研究采用ELISA及一步法RT-PCR对2010-2014年采自石河子地区的30个葫芦科植物样品进行ZYMV检测,从阳性样品中通过一步法RT-PCR克隆其ZYMV... 为了研究小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)石河子分离物的分子变异情况,本研究采用ELISA及一步法RT-PCR对2010-2014年采自石河子地区的30个葫芦科植物样品进行ZYMV检测,从阳性样品中通过一步法RT-PCR克隆其ZYMV分离物的CP基因,经PCR-SSCP分析,将带型一致的ZYMV分离物进行归类,每种类型中选取1个代表性的分离物进行CP基因测序,分析其核苷酸及推导的氨基酸序列的差异。结果显示:2种检测方法的检出率分别为63.33%和83.33%;根据ZYMV CP基因SSCP带型,将21个分离物分为5种不同的类型;其5个代表性分离物的CP核苷酸序列相似性为93.0%-99.8%,在系统进化树中位于2个不同的亚组;氨基酸序列的相似性为96.1%-99.6%,变异主要集中在N端的前41个氨基酸。这表明ZYMV石河子分离物间存在一定程度的分子变异。 展开更多
关键词 小西葫芦黄花叶病毒 DAS—ELISA PCR—SSCP 分子变异
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应用RNAi技术获得抗ToMV和CMV转基因烟草 被引量：2
2
作者 林涛 郑银英 +2 位作者 崔百明 乔亚红 向本春 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第4期430-435,共6页
为了获得同时抗ToMV和CMV的转基因烟草,采用以ToMV和CMV部分CP基因片段作为干扰病毒的靶序列,构建了pBi35SG12RNAi表达载体。利用农杆菌介导法转化西方烟(Nicotiana occidentalis),经卡那霉素筛选、PCR鉴定证明干扰序列已整合到烟草基... 为了获得同时抗ToMV和CMV的转基因烟草,采用以ToMV和CMV部分CP基因片段作为干扰病毒的靶序列,构建了pBi35SG12RNAi表达载体。利用农杆菌介导法转化西方烟(Nicotiana occidentalis),经卡那霉素筛选、PCR鉴定证明干扰序列已整合到烟草基因组中,并对ToMV和CMV混合侵染表现抗性。 展开更多
关键词 番茄花叶病毒 黄瓜花叶病毒 RNAI载体 转基因烟草
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新疆加工番茄SlWRKY35基因的克隆及功能初步分析
3
作者 黄丽雯 汲晓慧 +1 位作者 刘旭亮 王爱英 《中国蔬菜》 北大核心 2025年第6期64-73,共10页
为初步探讨新疆加工番茄SlWRKY35基因的生物学功能,以加工番茄亚心87-5为材料,应用PCR技术对SlWRKY35基因克隆,并进行生物信息学分析;构建了SlWRKY35过表达载体,并通过农杆菌转化法转化加工番茄,应用PCR进行鉴定。为探究该基因的初步功... 为初步探讨新疆加工番茄SlWRKY35基因的生物学功能,以加工番茄亚心87-5为材料,应用PCR技术对SlWRKY35基因克隆,并进行生物信息学分析;构建了SlWRKY35过表达载体,并通过农杆菌转化法转化加工番茄,应用PCR进行鉴定。为探究该基因的初步功能,测定了转基因加工番茄叶片叶绿素含量、叶绿素前体物质含量,并对叶绿素合成途径相关基因的表达量进行分析。结果表明:加工番茄SlWRKY35基因开放阅读框长度为1146 bp,编码了381个氨基酸。SlWRKY35蛋白含有WRKY结构域,属于不稳定蛋白。与野生型番茄相比,过表达SlWRKY35加工番茄叶片叶绿素含量显著提高,叶绿素前体物质含量均显著提高,叶绿素合成途径相关基因ALAD、CHLH、CHLM、POR和CAO上调表达。过表达SlWRKY35通过上调叶绿素合成途径相关基因的表达,促进叶绿素前体物质含量的提高,最终加强了加工番茄叶片叶绿素的积累。研究结果可为进一步探索加工番茄SlWRKY35基因的功能机制提供依据。 展开更多
关键词 加工番茄 SlWRKY35 基因克隆 叶绿素
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棉花腈水解酶基因GhNIT响应非生物胁迫和激素的表达分析
4
作者 潘泽 李鸿彬 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2018年第4期443-447,共5页
腈水解酶是植物中调控生长素合成色胺(Tryptamine,TAM)途径的关键酶,在生长素的合成及进一步调控植物发育和逆境胁迫响应过程中发挥着重要作用。为了认识腈水解酶在植物生长发育中的功能,本研究在前期获得棉花腈水解酶基因GhNIT的基础上... 腈水解酶是植物中调控生长素合成色胺(Tryptamine,TAM)途径的关键酶,在生长素的合成及进一步调控植物发育和逆境胁迫响应过程中发挥着重要作用。为了认识腈水解酶在植物生长发育中的功能,本研究在前期获得棉花腈水解酶基因GhNIT的基础上,分析了该基因参与棉花纤维发育的表达特征及组织特异性特征,结果表明:Gh NIT基因在棉花开花后16 d和25 d的纤维组织中及花器官(花瓣和花药)中具有较高的表达。克隆获得该基因1500 bp的启动子序列并进行了顺式作用元件分析,pGhNIT启动子包含典型的核心元件TATA框和CAAT框,此外,还包含TC-rich repeats、MBS等元件,尤其是包含许多响应非生物胁迫和激素的元件如热激、干旱和氧化等胁迫响应元件以及赤霉素(Gibberellic acid,GA)和光响应元件,如Box-4、Box-1、G-box等。pGhNIT启动子元件组成分析结果暗示该基因的表达可能受非生物胁迫和植物激素的诱导。进一步以棉花幼蕾为材料进行干旱、高温、低温、黑暗、氧化胁迫等逆境处理,及赤霉素和生长素处理,分析Gh NIT基因的表达特征,结果表明:GhNIT在4℃处理3 h后被显著诱导表达,且其在黑暗处理16 h再恢复光照后表达量增加;此外,Gh NIT的表达显著受高温、聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)和H2O2诱导;在GA处理2 h和吲哚-3-乙酸(Indole-3-cetic cid,IAA)处理1 h后,GhNIT的表达显著上调。本研究结果可为深入研究腈水解酶参与棉纤维发育及调控植物生长发育的重要功能提供良好参考。 展开更多
关键词 陆地棉 腈水解酶 启动子 非生物胁迫 植物激素
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转过氧化氢酶基因KatG棉花的抗旱性 被引量：15
5
作者 蔡永智 祝建波 +2 位作者 郝晓云 王爱英 徐登献 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期56-61,共6页
以导入过氧化氢酶基因KatG的第3代转基因棉花为供试材料,通过大田试验,从卡那霉素检测出来的棉花植株中,经PCR筛选出阳性植株并进行抗旱性研究。结果显示,转基因棉花发芽率达86%以上,苗期叶绿素含量有显著增加;在苗期、蕾期和花期水分... 以导入过氧化氢酶基因KatG的第3代转基因棉花为供试材料,通过大田试验,从卡那霉素检测出来的棉花植株中,经PCR筛选出阳性植株并进行抗旱性研究。结果显示,转基因棉花发芽率达86%以上,苗期叶绿素含量有显著增加;在苗期、蕾期和花期水分胁迫下,转KatG基因棉花在蕾期与花期的过氧化氢酶(CAT)活性显著增加;净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、胞间CO2摩尔分数(Ci)和光系统Ⅱ最大光化学效率(Fv/Fm)显著高于对照;农艺性状的分析表明,转基因棉花抗旱性有明显提高;在干旱胁迫条件下,转KatG基因棉花表现出优良的生长和生理优势,可提高棉花抗旱能力。 展开更多
关键词 棉花 过氧化氢酶基因 农艺性状 生理指标 抗旱性
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转天山雪莲冷调节蛋白基因烟草的获得及其抗寒性鉴定 被引量：9
6
作者 郭新勇 程晨 +4 位作者 王重 王恒良 喻娜 王爱英 祝建波 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期1-10,共10页
从已建立的天山雪莲cDNA文库中随机挑取单克隆,采用通用引物M13扩增出基因序列并测序,然后将该序列在GenBank中进行比对,根据该序列设计特异引物进行PCR,最终获得了冷调节蛋白基因siCOR的完整开放读码框(ORF);构建植物表达载体,通过农... 从已建立的天山雪莲cDNA文库中随机挑取单克隆,采用通用引物M13扩增出基因序列并测序,然后将该序列在GenBank中进行比对,根据该序列设计特异引物进行PCR,最终获得了冷调节蛋白基因siCOR的完整开放读码框(ORF);构建植物表达载体,通过农杆菌介导法获得转基因烟草,用RT-PCR对转化烟草进行鉴定,收取种子后筛选出纯合的T3株系,并通过冷冻胁迫进行抗寒性分析。结果表明:(1)siCOR大小661bp,与禾本科植物粳稻的冷调节蛋白基因一致性最高(65.04%)。(2)与野生型植株相比,转siCOR基因烟草均叶片浓绿、无分支侧芽,生长快;在冷冻胁迫条件下,转siCOR基因的烟草叶片相对含水量、PSⅡ相对量子产率降低幅度、相对电导率和丙二醛含量的升高幅度均低于野生型烟草植株,而且转siCOR基因烟草植株叶片出现萎蔫症状的时间较迟、程度较轻,受到的伤害也较轻。研究发现,在冷冻胁迫条件下,转siCOR基因烟草植株表现出良好的生理和生长优势,显示出了较强的抗寒特征。 展开更多
关键词 天山雪莲 sicolR基因 烟草 抗寒性
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纤维素酶在青贮饲料中的作用及其基因克隆的研究进展 被引量：10
7
作者 胡爽 王炜 +2 位作者 山其木格 杨红兰 包慧芳 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2008年第2期242-247,共6页
以新鲜的青绿饲料作物、牧草等为原料,通过厌氧微生物的发酵制成的青贮饲料,能达到长期保存原料营养特性的目的,在反刍动物的饲养中得到了广泛的应用。在青贮饲料中添加纤维素酶制剂能有效的提高其营养价值,已成为当前动物营养学研究中... 以新鲜的青绿饲料作物、牧草等为原料,通过厌氧微生物的发酵制成的青贮饲料,能达到长期保存原料营养特性的目的,在反刍动物的饲养中得到了广泛的应用。在青贮饲料中添加纤维素酶制剂能有效的提高其营养价值,已成为当前动物营养学研究中的一个热点。随着分子生物学技术的不断发展,构建产纤维素酶的基因工程菌引起了人们更多的关注,这样不仅能提高青贮饲料的营养价值,有效地消除抗营养因子,而且具有很高的实用性和经济性。就青贮饲料的特点、纤维素酶的组成和纤维素酶在青贮饲料中的作用,及纤维素酶基因的克隆研究作一综述。 展开更多
关键词 青贮饲料 纤维素酶 基因克隆
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棉花GhDHAR3基因克隆、功能序列分析及烟草的遗传转化 被引量：13
8
作者 王芳 王斐 +1 位作者 孙辉 李鸿彬 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期88-93,共6页
对棉花EST数据库进行同源搜索、比对和序列拼接,经RT-PCR从陆地棉纤维组织中扩增得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR3的cDNA,其开放阅读框为792bp,编码由263个氨基酸组成的蛋白质。同源性比对分析显示GhDHAR3蛋白具有较高的保守性,进化... 对棉花EST数据库进行同源搜索、比对和序列拼接,经RT-PCR从陆地棉纤维组织中扩增得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR3的cDNA,其开放阅读框为792bp,编码由263个氨基酸组成的蛋白质。同源性比对分析显示GhDHAR3蛋白具有较高的保守性,进化树分析表明其与拟南芥AtDHAR3亲缘关系较近。利用软件进行蛋白质序列分析,GhDHAR3蛋白具有GST-N家族和GST-C-DHAR典型的结构域,分别属于硫氧还蛋白超家族和GST-C末端超家族。将GhDHAR3基因构建到植物真核表达载体pCAMBIA2300中,利用农杆菌通过叶盘法转化烟草,经PCR分子鉴定,获得了含GhDHAR3转基因烟草植株。首次克隆棉花DHAR基因,通过结构域分析其可能的作用并成功转化烟草。 展开更多
关键词 棉花 脱氢抗坏血酸还原酶 植物表达载体构建 遗传转化
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棉花高频体细胞胚胎发生及再生体系建立 被引量：9
9
作者 顾冉冉 薛金教 +2 位作者 袁英歌 彭明 崔百明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期145-149,156,共6页
棉花的体细胞胚胎发生率低,限制了转基因棉花的发展。为了扩大可再生棉花的基因型,发展新疆优质棉花的特点,以新疆的主要栽培品种新陆早33为材料,以下胚轴为外植体,使用葡萄糖,麦芽糖作为主要碳源,用Phytagel固化,对不同激素的浓度组合... 棉花的体细胞胚胎发生率低,限制了转基因棉花的发展。为了扩大可再生棉花的基因型,发展新疆优质棉花的特点,以新疆的主要栽培品种新陆早33为材料,以下胚轴为外植体,使用葡萄糖,麦芽糖作为主要碳源,用Phytagel固化,对不同激素的浓度组合和培养条件进行探索,对棉花胚性愈伤的诱导到体细胞胚胎的发生阶段进行优化,体细胞胚胎成熟以后进行萌发培养可以获得正常的植株。通过试验证明,有利于棉花的愈伤组织生长的激素浓度为KT 0.1 mg/L,2,4-D 0.1 mg/L,下胚轴的中部诱导愈伤形态最好。体细胞胚胎发生阶段以KT,IBA组合,以低盐培养基进行子叶胚的成苗,建立了再生体系。 展开更多
关键词 棉花 体细胞胚胎 再生植株 组织培养
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棉花乙烯合成基因促进拟南芥和烟草不定根发生的研究 被引量：6
10
作者 张萍 王斐 +2 位作者 徐登献 孙辉 李鸿彬 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2394-2398,共5页
从棉花纤维cDNA中克隆获得乙烯合成基因GhACO3,构建了植物过量表达载体p35S∷GhACO3。通过花序侵染法和叶盘法分别转化拟南芥和烟草,利用卡那霉素筛选及分子检测获得转基因阳性拟南芥和烟草植株。结果表明,GhACO3基因已整合到拟南芥和... 从棉花纤维cDNA中克隆获得乙烯合成基因GhACO3,构建了植物过量表达载体p35S∷GhACO3。通过花序侵染法和叶盘法分别转化拟南芥和烟草,利用卡那霉素筛选及分子检测获得转基因阳性拟南芥和烟草植株。结果表明,GhACO3基因已整合到拟南芥和烟草基因组中;经过纯合筛选后获得转基因T2代拟南芥植株;与野生型拟南芥相比,GhACO3基因对拟南芥不定根发生具有显著促进作用;与野生型烟草植株相比,转GhACO3基因烟草不定根发生得到了显著的促进。研究表明,GhACO3基因的过量表达能够促进拟南芥和烟草不定根的形成发育,为进一步探讨GhACO3的生物学功能和进行转基因育种奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花GhACO3 乙烯 不定根发生 拟南芥 烟草
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植物乳杆菌高密度增殖发酵条件的研究 被引量：10
11
作者 张广敏 王炜 +4 位作者 张晓琳 包慧芳 崔卫东 詹发强 林润峰 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期643-650,共8页
为了研制新型微生态制剂,对常用益生菌株——植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的增殖条件进行研究。通过单因素和响应面方法对植物乳杆菌Lp-2的发酵培养基成分进行了筛选和优化,确定了最佳培养基。最后,研究了大规模培养工艺及其培... 为了研制新型微生态制剂,对常用益生菌株——植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的增殖条件进行研究。通过单因素和响应面方法对植物乳杆菌Lp-2的发酵培养基成分进行了筛选和优化,确定了最佳培养基。最后,研究了大规模培养工艺及其培养过程的放大。试验表明:蔗糖29 g/L,酵母膏31 g/L,蛋白胨25g/L,K2HPO420 g/L,NaAc 6 g/L,柠檬酸氢二铵2 g/L,Tween80 2 g/L,MgSO40.1 g/L,MnSO40.1 g/L,在25℃、100r/min的培养条件下在3 t发酵罐培养9.6 h,所得植物乳杆菌的最大产量约为1010CFU/mL。实验表明了此植物乳杆菌增殖优化方案成效明显,可以放大推广生产。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 发酵剂 高密度培养
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芽胞杆菌高产纤维素酶菌株的诱变选育与培养基优化 被引量：7
12
作者 郭建强 柴秀娟 +2 位作者 庞学兵 裴娟 王爱英 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期263-270,共8页
为获得高产纤维素酶菌株,采用紫外(UV)诱变和紫外-亚硝基胍(UV-NTG)复合诱变方法对新疆吐鲁番地区土壤中分离得到的产纤维素酶菌株芽胞杆菌C-8进行诱变筛选,并通过二次正交旋转组合试验和响应面试验对诱变筛选得到的菌株进行培养基的优... 为获得高产纤维素酶菌株,采用紫外(UV)诱变和紫外-亚硝基胍(UV-NTG)复合诱变方法对新疆吐鲁番地区土壤中分离得到的产纤维素酶菌株芽胞杆菌C-8进行诱变筛选,并通过二次正交旋转组合试验和响应面试验对诱变筛选得到的菌株进行培养基的优化。结果表明,UV诱变菌株UV-5和UV-NTG比出发菌株C-8纤维素酶活分别提高了1.15倍和3.23倍;当发酵培养基中碳源浓度为3%、氮源浓度为1.5%、吐温-80的浓度为0.15%时,纤维素酶活达到453.20 U·m L-1,是出发菌株C-8的5.49倍和复合诱变菌株UV-NTG-10的1.7倍。本研究结果为纤维素酶的扩大发酵以及后期工业化生产提供了理论依据。 展开更多
关键词 芽胞杆菌 诱变选育 纤维素酶 二次正交旋转组合试验 响应面优化
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天山雪莲SikGLP基因的克隆及表达分析 被引量：6
13
作者 刘超 张林华 +3 位作者 邱红林 王爱英 胡鸢雷 祝建波 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期461-467,共7页
从天山雪莲cDNA文库中分析得到一个类萌发素蛋白基因序列,命名为SikGLP。生物信息学分析表明,该基因包含1个633 bp的完整开放阅读框,编码210个氨基酸。SikGLP分子量为21.6 kDa,理论等电点是6.81,并且是具有信号肽的疏水性蛋白。氨基酸... 从天山雪莲cDNA文库中分析得到一个类萌发素蛋白基因序列,命名为SikGLP。生物信息学分析表明,该基因包含1个633 bp的完整开放阅读框,编码210个氨基酸。SikGLP分子量为21.6 kDa,理论等电点是6.81,并且是具有信号肽的疏水性蛋白。氨基酸多序列比对发现GLP序列保守性较高,具有的GLP的典型特征。17个物种间的系统发育树可以看出与葡萄GLP进化关系最近。Real time-PCR检测表明,SikGLP基因受低温、甲基紫精和PEG诱导表达,可能在胁迫初期对提高植物防御起作用。 展开更多
关键词 天山雪莲 类萌发素蛋白 实时定量PCR
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天山雪莲LEA14基因克隆及功能分析 被引量：6
14
作者 张林华 刘超 +3 位作者 邱红林 王爱英 邓福军 祝建波 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1071-1078,共8页
从天山雪莲叶片低温诱导的EST文库中获得了1个胚胎发育晚期丰富蛋白基因(LEA)cDNA全长序列。序列分析表明,该基因含有1个468bp编码155个氨基酸的开放阅读框。NCBI保守域预测此蛋白属于LEA_2家族,命名为SiLEA14。系统进化分析表明,该蛋... 从天山雪莲叶片低温诱导的EST文库中获得了1个胚胎发育晚期丰富蛋白基因(LEA)cDNA全长序列。序列分析表明,该基因含有1个468bp编码155个氨基酸的开放阅读框。NCBI保守域预测此蛋白属于LEA_2家族,命名为SiLEA14。系统进化分析表明,该蛋白与北柴胡的LEA-2蛋白亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,SiLEA14表达量在低温、盐和干旱胁迫条件下迅速升高。亚细胞定位结果表明,SiLEA14蛋白定位于细胞核中。利用农杆菌介导法将该基因导入烟草,测定并分析转基因植株在冷冻和盐胁迫处理下的生理指标,结果表明,SiLEA14基因在烟草中的过量表达提高了烟草的抗冻和耐盐能力。 展开更多
关键词 天山雪莲 SiLEA14 基因克隆 功能分析
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棉花单脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆及原核表达 被引量：6
15
作者 钱雯婕 王斐 +2 位作者 石峰 葛娟 李鸿彬 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期118-122,共5页
以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST数据库中MDAR基因序列的已知信息,利用5′-RACE获得GhMDAR基因全长。结果显示,该基因开放读码框为1 305bp,编码包含435个氨基酸的蛋白质,分子质量约为52ku。构建原核表达载体pET28a-GhMDAR并转化... 以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST数据库中MDAR基因序列的已知信息,利用5′-RACE获得GhMDAR基因全长。结果显示,该基因开放读码框为1 305bp,编码包含435个氨基酸的蛋白质,分子质量约为52ku。构建原核表达载体pET28a-GhMDAR并转化大肠杆菌,经过测序和酶切鉴定后,成功构建重组体pET28a-GhMDAR;将重组体导入大肠杆菌BL21诱导表达,经过SDS-PAGE分析,显示成功获得分子质量为52ku左右的诱导表达蛋白GhMDAR。 展开更多
关键词 棉花纤维 单脱氢抗坏血酸还原酶基因 5′-RACE克隆 原核表达
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红番3号加工番茄遗传转化再生体系的建立 被引量：7
16
作者 乔亚红 郑银英 +4 位作者 李诗林 田桂英 张丽丽 林涛 向本春 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1636-1643,共8页
本研究以加工番茄红番3号子叶为外植体,对加工番茄再生体系无菌苗的苗龄、培养基激素的配比和培养基基质选择方面进行优化。结果表明:8～10 d的子叶为最佳的外植体。以MS为基本培养基,附加不同浓度IAA(0.05、0.10、0.15、0.20mg·L... 本研究以加工番茄红番3号子叶为外植体,对加工番茄再生体系无菌苗的苗龄、培养基激素的配比和培养基基质选择方面进行优化。结果表明:8～10 d的子叶为最佳的外植体。以MS为基本培养基,附加不同浓度IAA(0.05、0.10、0.15、0.20mg·L-1)分别与不同浓度6-BA(1.0、1.5、2.0、2.5mg·L-1)/ZT(0.1、0.5、1.5、2.0mg·L-1)的组合。经诱芽比较,在不同浓度6-BA/ZT与不同浓度IAA组合中,诱导出愈伤组织和不定芽分化最高的培养基为MS+ZT 0.5mg·L-1+IAA 0.1mg·L-1+植物凝胶2g·L-1。以1/2MS添加不同浓度IAA(0.05、0.10、0.15、0.20mg·L-1)进行生根比较,再生芽在1/2MS+IAA 0.1mg·L-1生根培养基上生根最好。 展开更多
关键词 加工番茄 子叶 遗传转化 再生体系
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棉花GhDHAR2基因克隆、功能序列分析及原核表达 被引量：11
17
作者 田大鹏 葛娟 +1 位作者 石峰 李鸿彬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期65-69,共5页
通过RT-PCR方法从棉花纤维组织中克隆得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR2的cDNA,该基因开放阅读框为639 bp,编码212个氨基酸的蛋白质。同源性序列对比分析显示,GhDHAR2蛋白具有较高的保守性,具有典型的功能结构域,包括GST-N家族和GST-C-... 通过RT-PCR方法从棉花纤维组织中克隆得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR2的cDNA,该基因开放阅读框为639 bp,编码212个氨基酸的蛋白质。同源性序列对比分析显示,GhDHAR2蛋白具有较高的保守性,具有典型的功能结构域,包括GST-N家族和GST-C-DHAR家族的功能结构域;进化树分析显示GhDHAR2和拟南芥AtDHAR2在进化关系上较近。将GhDHAR2基因连接到原核表达载体pET-28a中,将重组载体pET28a-GhDHAR2转入到表达菌株BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达出重组GhDHAR2蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分析显示重组蛋白大小约为28 kD,诱导表达的重组蛋白具有较高的DHAR活性。首次克隆了棉花GhDHAR2基因,通过结构域分析其可能的作用,并成功进行蛋白体外表达及酶活性分析。 展开更多
关键词 棉花 脱氢抗坏血酸还原酶基因克隆 原核表达 DHAR酶活力
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棉花GhACO1基因植物表达载体构建及拟南芥遗传转化 被引量：6
18
作者 张萍 王斐 +1 位作者 孙辉 李鸿彬 《生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期19-22,共4页
乙烯参与植物生长发育等许多生理过程,在许多植物细胞中,ACO基因通过促进乙烯合成调控着植物器官的形成发育。研究通过PCR方法从棉花基因组中克隆得到1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶1(GhACO1)基因,并将该基因构建到植物表达载体PBI121中,其... 乙烯参与植物生长发育等许多生理过程,在许多植物细胞中,ACO基因通过促进乙烯合成调控着植物器官的形成发育。研究通过PCR方法从棉花基因组中克隆得到1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶1(GhACO1)基因,并将该基因构建到植物表达载体PBI121中,其中GhACO1基因位于CaMV35S启动子和GUS报告基因之间。通过花滴法将GhACO1基因转化拟南芥,利用卡那霉素对转化植株进行初步筛选,对卡那霉素阳性植株进行进一步的PCR检测和GUS组织化学分析。结果表明:GhACO1基因已经整合到拟南芥基因组中;GUS组织化学分析显示,在转基因拟南芥叶、茎和根中都表现出GUS活性。研究结果为进一步探讨GhACO1的生物学功能和基因工程改良棉花纤维品质奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花 GhACO1 表达载体构建 乙烯
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小拟南芥高盐胁迫诱导cDNA文库的构建与测序分析 被引量：14
19
作者 院海英 徐芳 +2 位作者 吕新华 崔百明 黄先忠 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第1期1-4,共4页
以新疆小拟南芥为材料,分离了小拟南芥经500mmol/L NaCl胁迫处理的幼苗总RNA,采用改良的SMARTcDNA合成方法合成第一链cDNA,采用LD PCR的方法合成第二链cDNA,经BP反应重组到入门载体pDONR207上,构建了小拟南芥高盐胁迫的入门cDNA文库。... 以新疆小拟南芥为材料,分离了小拟南芥经500mmol/L NaCl胁迫处理的幼苗总RNA,采用改良的SMARTcDNA合成方法合成第一链cDNA,采用LD PCR的方法合成第二链cDNA,经BP反应重组到入门载体pDONR207上,构建了小拟南芥高盐胁迫的入门cDNA文库。文库插入片段平均大小为1.1kb,阳性克隆率为94%。文库经随机挑选克隆测序,生物信息学分析初步获得了10个有功能的基因,其中包含各种酶如水解酶、氧化还原酶等;功能蛋白如离子运输通道蛋白、胁迫诱导蛋白,细胞色素蛋白及激素受体蛋白基因等。可以利用入门文库构建各种目的cDNA文库,本研究为将来从小拟南芥中筛选耐盐基因奠定了基础。 展开更多
关键词 新疆小拟南芥 耐盐 入门文库 表达文库 BP重组
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过量表达棉花GDSL脂肪酶提高甘蓝型油菜油脂含量的研究 被引量：4
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作者 郝晓云 蔡永智 +3 位作者 袁哈利 李榕 王斐 李鸿彬 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期63-68,73,共7页
GDSL脂肪酶作为一种脂质水解酶具有广泛的底物特异性，在植物的油脂代谢、生长发育等众多生理过程中发挥着重要作用。利用RT—PCR技术从发育的陆地棉种子中克隆得到棉花的GDSL脂肪酶基因的cDNA，该基因开放读码框为1068bp，编码含有356... GDSL脂肪酶作为一种脂质水解酶具有广泛的底物特异性，在植物的油脂代谢、生长发育等众多生理过程中发挥着重要作用。利用RT—PCR技术从发育的陆地棉种子中克隆得到棉花的GDSL脂肪酶基因的cDNA，该基因开放读码框为1068bp，编码含有356个氨基酸的蛋白质。对棉花种子发育不同时期进行半定量PCR分析的结果表明，在种子发育15—20d时，GhGLIP基因的表达量较高。将该基因构建到真核表达载体pCAMBIA2300中，转入农杆菌GV3101后转化甘蓝型油菜野油19，通过筛选和鉴定获得转基因阳性油菜株系。转基因油菜的GDSL脂肪酶活力获得了显著提高，转基因油菜种子的油脂含量比野生型油菜提高了8．68％，提高比率为24．3％。 展开更多
关键词 棉花种子 GDSL脂肪酶 油脂含量 甘蓝型油菜
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