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布鲁氏菌Bp26蛋白原核表达的优化与间接ELISA检测方法的建立
被引量：
1
1
作者
刘尚博
王振华
+1 位作者
秦建华
郑可
《现代畜牧科技》
2024年第10期27-31,共5页
为原核表达布鲁氏菌Bp26蛋白,利用布鲁氏菌M5-90疫苗株扩增得到Bp26基因片段,克隆构建pET28a-XXA-HRV 3C-Bp26原核表达载体,通过诱导表达和Ni-NTA亲和纯化得到XXA-HRV 3C-Bp26重组蛋白,再使用PreScission Protease酶切得到无标签的Bp26...
为原核表达布鲁氏菌Bp26蛋白,利用布鲁氏菌M5-90疫苗株扩增得到Bp26基因片段,克隆构建pET28a-XXA-HRV 3C-Bp26原核表达载体,通过诱导表达和Ni-NTA亲和纯化得到XXA-HRV 3C-Bp26重组蛋白,再使用PreScission Protease酶切得到无标签的Bp26蛋白。通过SDS-PAGE和Western Blot试验结果,证明成功表达XXA-HRV 3C-Bp26重组蛋白,且蛋白是可溶性表达,并通过酶切获得了无任何标签的Bp26蛋白。以Bp26蛋白做为诊断抗原,初步建立布鲁氏菌间接ELISA检测方法,通过与商用布鲁氏菌ELISA检测试剂盒对256份羊血清样本进行检测,符合率为93.75%,证明建立的布鲁氏菌间接ELISA检测方法可以做为临床中的一种布鲁氏菌病检测方法。
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关键词
布鲁氏菌
Bp26蛋白
间接ELISA
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职称材料
羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立
2
作者
刘尚博
王振华
+1 位作者
郑可
秦建华
《今日畜牧兽医》
2024年第8期1-4,共4页
为了寻找一种能够鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株与其他布氏杆菌菌株的双重实时荧光定量PCR检测方法。针对布氏杆菌菌株的16S rRNA和Bp26基因,各设计一套引物和探针,并优化反应体系和反应程序。以布氏杆菌A19、S2、M5-90和M5-90△26四种...
为了寻找一种能够鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株与其他布氏杆菌菌株的双重实时荧光定量PCR检测方法。针对布氏杆菌菌株的16S rRNA和Bp26基因,各设计一套引物和探针,并优化反应体系和反应程序。以布氏杆菌A19、S2、M5-90和M5-90△26四种疫苗株以及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的特异性。克隆构建PCR_16S rRNA_Bp26标准品,通过倍比稀释进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的灵敏度。使用该方法与虎红平板凝集试验、试管凝集试验进行检测结果对比,评价该方法的可行性。结果显示,本方法特异性好,布氏杆菌A19、S2、M5-90三种疫苗株均同时出现Bp26基因和16S rRNA基因的扩增,布氏杆菌M5-90△26疫苗株只出现16S rRNA基因的扩增,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌均未出现扩增曲线。该方法建立的16S rRNA基因序列扩增通道和Bp26基因序列扩增通道对标准品的最低检测限均达5 copies/μL。该方法对临床样本的检测结果与虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测结果符合率较高,说明建立的羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR检测方法可用于临床的检测,为鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株免疫与布氏杆菌野毒株感染提供一种可行的检测方法。
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关键词
布氏杆菌
M5-90△26疫苗株
双重实时荧光定量PCR
鉴别诊断
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职称材料
题名
布鲁氏菌Bp26蛋白原核表达的优化与间接ELISA检测方法的建立
被引量：
1
1
作者
刘尚博
王振华
秦建华
郑可
机构
河北农业大学
石家庄圣博生物科技有限公司
广西壮族自治区人民医院
出处
《现代畜牧科技》
2024年第10期27-31,共5页
基金
河北省现代农业产业技术体系第三期奶牛创新团队建设项目奶牛疫病防控与减抗(HBCT2023180201)。
文摘
为原核表达布鲁氏菌Bp26蛋白,利用布鲁氏菌M5-90疫苗株扩增得到Bp26基因片段,克隆构建pET28a-XXA-HRV 3C-Bp26原核表达载体,通过诱导表达和Ni-NTA亲和纯化得到XXA-HRV 3C-Bp26重组蛋白,再使用PreScission Protease酶切得到无标签的Bp26蛋白。通过SDS-PAGE和Western Blot试验结果,证明成功表达XXA-HRV 3C-Bp26重组蛋白,且蛋白是可溶性表达,并通过酶切获得了无任何标签的Bp26蛋白。以Bp26蛋白做为诊断抗原,初步建立布鲁氏菌间接ELISA检测方法,通过与商用布鲁氏菌ELISA检测试剂盒对256份羊血清样本进行检测,符合率为93.75%,证明建立的布鲁氏菌间接ELISA检测方法可以做为临床中的一种布鲁氏菌病检测方法。
关键词
布鲁氏菌
Bp26蛋白
间接ELISA
Keywords
Brucella
Bp26 protein
iELISA
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立
2
作者
刘尚博
王振华
郑可
秦建华
机构
河北农业大学动物医学院
石家庄圣博生物科技有限公司
广西壮族自治区人民医院
出处
《今日畜牧兽医》
2024年第8期1-4,共4页
基金
河北省现代农业产业技术体系第三期奶牛创新团队建设项目奶牛疫病防控与减抗(HBCT2023180201)。
文摘
为了寻找一种能够鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株与其他布氏杆菌菌株的双重实时荧光定量PCR检测方法。针对布氏杆菌菌株的16S rRNA和Bp26基因,各设计一套引物和探针,并优化反应体系和反应程序。以布氏杆菌A19、S2、M5-90和M5-90△26四种疫苗株以及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的特异性。克隆构建PCR_16S rRNA_Bp26标准品,通过倍比稀释进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的灵敏度。使用该方法与虎红平板凝集试验、试管凝集试验进行检测结果对比,评价该方法的可行性。结果显示,本方法特异性好,布氏杆菌A19、S2、M5-90三种疫苗株均同时出现Bp26基因和16S rRNA基因的扩增,布氏杆菌M5-90△26疫苗株只出现16S rRNA基因的扩增,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌均未出现扩增曲线。该方法建立的16S rRNA基因序列扩增通道和Bp26基因序列扩增通道对标准品的最低检测限均达5 copies/μL。该方法对临床样本的检测结果与虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测结果符合率较高,说明建立的羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR检测方法可用于临床的检测,为鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株免疫与布氏杆菌野毒株感染提供一种可行的检测方法。
关键词
布氏杆菌
M5-90△26疫苗株
双重实时荧光定量PCR
鉴别诊断
分类号
S859.797 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
布鲁氏菌Bp26蛋白原核表达的优化与间接ELISA检测方法的建立
刘尚博
王振华
秦建华
郑可
《现代畜牧科技》
2024
1
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职称材料
2
羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立
刘尚博
王振华
郑可
秦建华
《今日畜牧兽医》
2024
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