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基于重组酶介导等温扩增技术的鸡滑液囊支原体检测方法建立和初步应用
被引量：
8
1
作者
卞红春
余树培
+5 位作者
杨凌
陈静华
陈丽珠
程珂
尹彦
夏文龙
《中国家禽》
北大核心
2022年第7期37-42,共6页
为建立一种鸡滑液囊支原体(MS)快速简便的检测方法,研究根据MS vlhA基因保守序列设计3对引物,通过引物筛选和条件优化,建立了基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的MS检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评估。应用该方法对68份鸡咽喉拭子...
为建立一种鸡滑液囊支原体(MS)快速简便的检测方法,研究根据MS vlhA基因保守序列设计3对引物,通过引物筛选和条件优化,建立了基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的MS检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评估。应用该方法对68份鸡咽喉拭子临床样品进行检测,并和农业行业标准中的PCR方法进行对比。结果显示:该方法最佳引物为vlhA F3/vlhA R3,在38℃孵育25 min即可完成靶基因扩增,并且特异性强,与鸡毒支原体(MG)、禽多杀性巴氏杆菌、鸡沙门菌、鸡大肠杆菌、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒(AIBV)、鸡传染性法氏囊病病毒等其他鸡病病原体无交叉反应;灵敏度高,对MS基因组DNA的最低检出限度为15.5 pg;应用该方法从68份临床样品中检出阳性样品29份,与PCR方法检测结果一致。研究表明,建立的RAA方法快速简便,不依赖昂贵的仪器设备,有望用于基层实验室或MS的临床快速诊断。
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关键词
鸡滑液囊支原体
重组酶介导等温扩增
检测
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职称材料
反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)快速检测基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒
被引量：
2
2
作者
陈耀
仲欣雨
+8 位作者
吴陈雨
丁雪
黄璟
王欢莉
范忠军
孙静
陈星逸
余树培
夏文龙
《中国动物检疫》
CAS
2023年第1期121-127,共7页
为建立一种基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速检测方法,根据其ORF6基因保守序列设计了3对特异性引物,通过引物筛选及条件优化,建立了基因2型PRRSV的反转录-重组酶介导...
为建立一种基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速检测方法,根据其ORF6基因保守序列设计了3对特异性引物,通过引物筛选及条件优化,建立了基因2型PRRSV的反转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided isothermal amplification,RT-RAA)快速检测方法。结果显示:该方法在40℃恒温孵育25 min即可完成靶序列扩增;特异性强,和猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒均无交叉反应;灵敏度高,最低检出限为2×10^(0)TCID_(50)/μL,是常规RT-PCR方法的10倍;应用该方法对39份疑似PRRSV感染的临床样品进行检测,检出阳性样品25份,和实验室前期建立的荧光定量RT-PCR方法检测结果一致。以上结果说明,本研究建立的RT-RAA检测方法简便快速、特异性强、灵敏度高、临床适用性好,为PRRSV感染的快速诊断提供了新的技术手段。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
基因2型
反转录-重组酶介导等温扩增
快速检测
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职称材料
题名
基于重组酶介导等温扩增技术的鸡滑液囊支原体检测方法建立和初步应用
被引量：
8
1
作者
卞红春
余树培
杨凌
陈静华
陈丽珠
程珂
尹彦
夏文龙
机构
江苏省
盐城市
畜牧兽医站
盐城
师范学院海洋与
生物
工程
学院
盐城市动物生物制剂工程技术研究中心
出处
《中国家禽》
北大核心
2022年第7期37-42,共6页
基金
江苏现代农业(蛋鸡)产业技术体系盐城推广示范基地项目(JATS[2021]233)
盐城师范学院科研启动基金(YCTU201801)。
文摘
为建立一种鸡滑液囊支原体(MS)快速简便的检测方法,研究根据MS vlhA基因保守序列设计3对引物,通过引物筛选和条件优化,建立了基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的MS检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评估。应用该方法对68份鸡咽喉拭子临床样品进行检测,并和农业行业标准中的PCR方法进行对比。结果显示:该方法最佳引物为vlhA F3/vlhA R3,在38℃孵育25 min即可完成靶基因扩增,并且特异性强,与鸡毒支原体(MG)、禽多杀性巴氏杆菌、鸡沙门菌、鸡大肠杆菌、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒(AIBV)、鸡传染性法氏囊病病毒等其他鸡病病原体无交叉反应;灵敏度高,对MS基因组DNA的最低检出限度为15.5 pg;应用该方法从68份临床样品中检出阳性样品29份,与PCR方法检测结果一致。研究表明,建立的RAA方法快速简便,不依赖昂贵的仪器设备,有望用于基层实验室或MS的临床快速诊断。
关键词
鸡滑液囊支原体
重组酶介导等温扩增
检测
Keywords
Mycoplasma synoviae
recombinase-aided isothermal amplification
detection
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)快速检测基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒
被引量：
2
2
作者
陈耀
仲欣雨
吴陈雨
丁雪
黄璟
王欢莉
范忠军
孙静
陈星逸
余树培
夏文龙
机构
盐城
师范学院海洋与
生物
工程
学院
盐城市动物生物制剂工程技术研究中心
盐城市
畜牧兽医站
出处
《中国动物检疫》
CAS
2023年第1期121-127,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(31902303)
江苏省高等学校大学生创新创业训练计划项目(202110324112H)。
文摘
为建立一种基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速检测方法,根据其ORF6基因保守序列设计了3对特异性引物,通过引物筛选及条件优化,建立了基因2型PRRSV的反转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided isothermal amplification,RT-RAA)快速检测方法。结果显示:该方法在40℃恒温孵育25 min即可完成靶序列扩增;特异性强,和猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒均无交叉反应;灵敏度高,最低检出限为2×10^(0)TCID_(50)/μL,是常规RT-PCR方法的10倍;应用该方法对39份疑似PRRSV感染的临床样品进行检测,检出阳性样品25份,和实验室前期建立的荧光定量RT-PCR方法检测结果一致。以上结果说明,本研究建立的RT-RAA检测方法简便快速、特异性强、灵敏度高、临床适用性好,为PRRSV感染的快速诊断提供了新的技术手段。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
基因2型
反转录-重组酶介导等温扩增
快速检测
Keywords
PRRSV
genotype-2
RT-RAA
rapid detection
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于重组酶介导等温扩增技术的鸡滑液囊支原体检测方法建立和初步应用
卞红春
余树培
杨凌
陈静华
陈丽珠
程珂
尹彦
夏文龙
《中国家禽》
北大核心
2022
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)快速检测基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒
陈耀
仲欣雨
吴陈雨
丁雪
黄璟
王欢莉
范忠军
孙静
陈星逸
余树培
夏文龙
《中国动物检疫》
CAS
2023
2
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职称材料
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