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高糖诱导人肾小球系膜细胞CTGF启动子去甲基化及基因表达
被引量：
6
1
作者
易斌
张浩
+3 位作者
周宏
蔡旭
孙剑
刘妍
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期747-750,共4页
目的:观察高糖刺激和甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-dCyd)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子的甲基化水平和基因表达的影响。方法:用不同终浓度的5-aza-dCyd(0、1、2、5、10μmol/L)刺激HMCs,于48h提取...
目的:观察高糖刺激和甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-dCyd)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子的甲基化水平和基因表达的影响。方法:用不同终浓度的5-aza-dCyd(0、1、2、5、10μmol/L)刺激HMCs,于48h提取细胞基因组DNA、总RNA和蛋白质;用不同浓度的葡萄糖(5 mmol/L、30 mmol/L)刺激细胞,于0、24、48、72 h收集细胞;应用甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞CTGF基因启动子甲基化状态,RT-PCR检测CTGFmRNA表达,Western blot检测CTGF蛋白表达。结果:不同浓度5-aza-dCyd处理HMCs 48 h后,0、1、2、5μmol/L5-aza-dCyd组CTGF基因启动子呈半甲基化状态,均有微量CTGFmRNA和蛋白的表达,差异无统计学意义(均P>0.05);10μmol/L5-aza-dCyd组甲基化条带阴性,呈完全去甲基化状态,CTGF mRNA和蛋白表达均增加,与0μmol/L组比较差异有统计学意义(P<0.01)。5 mmol/L葡萄糖组HMCs各时间点CTGF基因启动子均呈半甲基化状态,表达微量CTGFmRNA和蛋白质,差异无统计学意义(均P>0.05);30 mmol/L葡萄糖组CTGF启动子在0 h呈半甲基化状态,甲基化条带较强;24 h甲基化条带减弱,48 h甲基化条带阴性,呈完全去甲基化状态,24 h、48 h、72 h CTGF mRNA和蛋白质表达均增加,与5 mmol/L组相应时间点比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:高糖和甲基化抑制剂5-aza-dCyd均可诱导人肾小球系膜细胞CTGF基因启动子的去甲基化并增加CTGF的表达,提示DNA甲基化可能参与了人肾小球系膜细胞CTGF基因表达的调控。
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关键词
高糖
系膜细胞
结缔组织生长因子
DNA甲基化
5-氮杂-2′-脱氧胞苷
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题名
高糖诱导人肾小球系膜细胞CTGF启动子去甲基化及基因表达
被引量：
6
1
作者
易斌
张浩
周宏
蔡旭
孙剑
刘妍
机构
中南大学湘雅三
医院
肾
内科
益阳市中心医院肾内科
广东省第二人民
医院
肾
内科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期747-750,共4页
基金
教育部高等院校博士点基金新教师项目(20080533l159)
文摘
目的:观察高糖刺激和甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-dCyd)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子的甲基化水平和基因表达的影响。方法:用不同终浓度的5-aza-dCyd(0、1、2、5、10μmol/L)刺激HMCs,于48h提取细胞基因组DNA、总RNA和蛋白质;用不同浓度的葡萄糖(5 mmol/L、30 mmol/L)刺激细胞,于0、24、48、72 h收集细胞;应用甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞CTGF基因启动子甲基化状态,RT-PCR检测CTGFmRNA表达,Western blot检测CTGF蛋白表达。结果:不同浓度5-aza-dCyd处理HMCs 48 h后,0、1、2、5μmol/L5-aza-dCyd组CTGF基因启动子呈半甲基化状态,均有微量CTGFmRNA和蛋白的表达,差异无统计学意义(均P>0.05);10μmol/L5-aza-dCyd组甲基化条带阴性,呈完全去甲基化状态,CTGF mRNA和蛋白表达均增加,与0μmol/L组比较差异有统计学意义(P<0.01)。5 mmol/L葡萄糖组HMCs各时间点CTGF基因启动子均呈半甲基化状态,表达微量CTGFmRNA和蛋白质,差异无统计学意义(均P>0.05);30 mmol/L葡萄糖组CTGF启动子在0 h呈半甲基化状态,甲基化条带较强;24 h甲基化条带减弱,48 h甲基化条带阴性,呈完全去甲基化状态,24 h、48 h、72 h CTGF mRNA和蛋白质表达均增加,与5 mmol/L组相应时间点比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:高糖和甲基化抑制剂5-aza-dCyd均可诱导人肾小球系膜细胞CTGF基因启动子的去甲基化并增加CTGF的表达,提示DNA甲基化可能参与了人肾小球系膜细胞CTGF基因表达的调控。
关键词
高糖
系膜细胞
结缔组织生长因子
DNA甲基化
5-氮杂-2′-脱氧胞苷
Keywords
high glucose
mesangial cells
connective tissue growth factor
DNA methylation
5-aza-2′-deoxycytidine
分类号
R692.6 [医药卫生—泌尿科学]
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作者
出处
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被引量
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1
高糖诱导人肾小球系膜细胞CTGF启动子去甲基化及基因表达
易斌
张浩
周宏
蔡旭
孙剑
刘妍
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
6
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