检索结果-维普期刊中文期刊服务平台

大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定被引量：5: 1; 作者牛夏忆李淼 +2 位作者张倩陈云雨刘晓平《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期1992-1998,共7页; 目的:原核表达和分离纯化人β-catenin(138-781 aa)蛋白并制备特异性大鼠抗人β-catenin多克隆抗体。方法:利用PCR扩增β-catenin基因片段并克隆至pET-30a(+)表达载体构建重组质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(D... 展开更多; 关键词 Β-CATENIN 原核表达亲和层析荧光偏振大鼠多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人HER3胞外域Ⅰ区183-227aa的原核表达及大鼠多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2; 作者朱磊袁平川 +3 位作者赵志刚王鑫王国栋颜亮《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期806-813,共8页; 目的原核表达、纯化由人表皮生长因子受体3(HER3)183-227aa肽段(HER3Ⅰ)和麻疹病毒蛋白288-302aa肽段(MVF)融合构建的重组肽(MVF-HER3Ⅰ),并制备其多克隆抗体。方法将MVF与HER3Ⅰ融合构建重组肽MVF-HER3Ⅰ,用化学合成法合成重组肽基因,... 展开更多; 关键词人表皮生长因子受体3 二聚化融合表达亲和层析多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

大鼠抗人表皮生长因子受体3(ErbB3)二聚化界面区多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 3; 作者朱磊王鑫 +1 位作者袁平川王国栋《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期551-556,共6页; 目的制备由人表皮生长因子受体3(ErbB3)二聚化界面区第236至308位氨基酸肽段(ErbB3Ⅱ)与麻疹病毒蛋白第288至302位氨基酸肽段(MVF)连接而成的融合蛋白MVF-ErbB3Ⅱ,并制备和表征其大鼠多克隆抗体.方法化学合成法合成MVF-ErbB3Ⅱ的基因,利... 展开更多; 关键词人表皮生长因子受体3(ErbB3) 原核表达二聚化多克隆抗体免疫沉淀; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人β-catenin原核表达条件的优化及生物学活性鉴定被引量：6: 4; 作者牛夏忆韩茂椿 +2 位作者李淼陈云雨刘晓平《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期58-66,共9页; 优化重组人β-catenin(138~686 aa)在大肠埃希菌中的原核表达条件,经分离纯化后进行生物学活性鉴定。利用基因工程技术,将构建的重组质粒β-catenin-pET-30a(+)转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后进行β-catenin原核... 展开更多; 关键词 Β-CATENIN 表达优化亲和层析荧光偏振酶联免疫吸附测定实验; 在线阅读下载PDF 职称材料

大鼠抗新冠病毒主蛋白酶多克隆抗体的制备与鉴定被引量：4: 5; 作者闫干干戚海燕 +3 位作者闫浩浩付正豪刘晓平陈云雨《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1032-1037,共6页; 目的原核表达与分离纯化新冠病毒主蛋白酶(Mpro)并制备大鼠抗Mpro多克隆抗体用于研究Mpro在2019冠状病毒病(COVID-19)中的免疫学功能。方法将密码子优化的新冠病毒Mpro基因连接到pET-28a载体中,构建重组质粒pET-28a-Mpro。再将其转化到E... 展开更多; 关键词新冠病毒主蛋白酶原核表达多克隆抗体 ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

过表达TrxR1重组HEK293细胞株的构建和鉴定: 6; 作者吕晓梅周知音 +4 位作者朱丽周吉黄慧丹张超刘晓平《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期554-560,共7页; 目的构建稳定过表达硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)的HEK293细胞株,为TrxR1的功能研究以及靶向TrxR1药物筛选提供细胞模型。方法通过PCR扩增,连接转化以及Sanger双脱氧测序构建并筛选出TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1,转染HEK29... 展开更多; 关键词硫氧还蛋白还原酶1 慢病毒包装过表达细胞模型; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定被引量：5: 1; 作者牛夏忆李淼张倩陈云雨刘晓平; 机构皖南医学院药物筛选与评价研究所; 出处《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期1992-1998,共7页; 基金国家自然科学基金(81703546) 安徽省自然科学基金(1808085QH265) +2 种基金皖南医学院大学生科研资助金(WK2018S54)资助项目; 文摘目的:原核表达和分离纯化人β-catenin(138-781 aa)蛋白并制备特异性大鼠抗人β-catenin多克隆抗体。方法:利用PCR扩增β-catenin基因片段并克隆至pET-30a(+)表达载体构建重组质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经原核表达优化后,诱导β-catenin蛋白表达,以SDS-PAGE和Western blot实验进行鉴定。采用亲和层析方法分离纯化β-catenin蛋白,以荧光偏振实验进行生物学活性鉴定。用β-catenin蛋白为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体,随后采用ELISA和Western blot实验检测多克隆抗体的效价和抗原特异性。结果:成功进行了β-catenin蛋白的原核表达与分离纯化。荧光偏振实验表明纯化的β-catenin蛋白具有良好的生物学活性。ELISA实验表明抗人β-catenin多克隆抗体效价可达1∶128 000。Western blot实验证实抗人β-catenin多克隆抗体具有良好的抗原特异性。结论:成功进行了大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定,为深入研究β-catenin的生物学功能奠定了实验基础。; 关键词 Β-CATENIN 原核表达亲和层析荧光偏振大鼠多克隆抗体; Keywords β-catenin Bacterial expression Affinity chromatography Fluorescence polarization Rat polyclonal antibody; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人HER3胞外域Ⅰ区183-227aa的原核表达及大鼠多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2; 作者朱磊袁平川赵志刚王鑫王国栋颜亮; 机构安徽省多糖药物工程技术研究中心皖南医学院药物研发中心活性生物大分子研究安徽省重点实验室皖南医学院药物筛选与评价研究所; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期806-813,共8页; 基金国家自然科学基金(81802651) 安徽省自然科学基金(1808085QH291,1908085MH248) +2 种基金皖南医学院大学生科研资助金(WK2019S43)。; 文摘目的原核表达、纯化由人表皮生长因子受体3(HER3)183-227aa肽段(HER3Ⅰ)和麻疹病毒蛋白288-302aa肽段(MVF)融合构建的重组肽(MVF-HER3Ⅰ),并制备其多克隆抗体。方法将MVF与HER3Ⅰ融合构建重组肽MVF-HER3Ⅰ,用化学合成法合成重组肽基因,并将其与pET21b质粒和含有硫氧还蛋白(Trx)基因的pET32a质粒连接构建重组肽表达质粒,重组质粒用双酶切法鉴定。将重组质粒导入到大肠杆菌BL21(DE3)并进行表达参数优化及诱导表达。融合蛋白依次经镍离子亲和层析、肠激酶酶切和再次镍离子亲和层析制备重组肽。表达和纯化过程中的样品纯度和相对分子质量用SDS-PAGE分析。以纯化的重组肽为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体。用ELISA法测定抗重组肽多克隆抗体效价,免疫印迹和免疫沉淀法分析抗重组肽多克隆抗体对重组肽和非变性状态HER3的识别,激光共聚焦法分析抗重组肽多克隆抗体与MCF7细胞的结合,磺酰罗丹明B染色法测定在有无神经调节素刺激下抗重组肽多克隆抗体对高表达HER3的MCF7细胞的增殖抑制作用。结果成功构建了重组肽的两种表达质粒,重组肽基因不能单独表达,但和Trx融合后可在37℃、0.2 mmol/L IPTG条件下呈可溶高表达。融合蛋白经亲和层析、酶切和再次亲和层析后得到重组肽。重组肽可刺激大鼠产生效价达1:512000的抗重组肽多克隆抗体。该抗体不仅可特异性识别重组肽,还可特异性沉淀非变性HER3和结合于MCF7细胞的细胞膜。不管有无神经调节素刺激,该抗体均呈浓度依赖性地抑制HER3高表达的MCF7细胞的增殖(P<0.01)。结论成功进行了重组肽MVF-HER3Ⅰ的原核表达和纯化,制备并鉴定了抗MVF-HER3Ⅰ多克隆抗体,为在体内外深入研究该抗体对HER3信号通路的影响打下基础。; 关键词人表皮生长因子受体3 二聚化融合表达亲和层析多克隆抗体; Keywords HER3 dimerization fusion expression affinity chromatography polyclonal antibody; 分类号 R392-33 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大鼠抗人表皮生长因子受体3(ErbB3)二聚化界面区多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 3; 作者朱磊王鑫袁平川王国栋; 机构安徽省多糖药物工程技术研究中心皖南医学院药物筛选与评价研究所皖南医学院药物研发中心活性生物大分子研究安徽省重点实验室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期551-556,共6页; 基金安徽省自然科学基金(1808085QH291,1908085MH248) 安徽省高校自然科学基金(KJ2018A0255) +1 种基金皖南医学院大学生科研资助基金(WK2019S43)。; 文摘目的制备由人表皮生长因子受体3(ErbB3)二聚化界面区第236至308位氨基酸肽段(ErbB3Ⅱ)与麻疹病毒蛋白第288至302位氨基酸肽段(MVF)连接而成的融合蛋白MVF-ErbB3Ⅱ,并制备和表征其大鼠多克隆抗体.方法化学合成法合成MVF-ErbB3Ⅱ的基因,利用DNA连接酶与pET-21b载体连接成重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)进行MVF-ErbB3Ⅱ原核表达,MVF-ErbB3Ⅱ经镍离子亲和层析法纯化后,免疫大鼠制备多克隆抗体,采用ELISA检测抗体滴度,Western blot法、免疫共沉淀法(IP)和流式细胞术鉴定抗体特异性和靶向性.结果SDS-PAGE证实大肠杆菌成功表达了MVF-ErbB3Ⅱ蛋白,ELISA结果表明多克隆抗体具有较高的抗体效价,Western blot法、IP和流式细胞术结果表明多克隆抗体具有良好的MVF-ErbB3Ⅱ及非变性ErbB3特异性和二聚化界面靶向性.结论成功进行了MVF-ErbB3Ⅱ原核表达和分离纯化及大鼠抗MVF-ErbB3Ⅱ多克隆抗体的制备和表征.; 关键词人表皮生长因子受体3(ErbB3) 原核表达二聚化多克隆抗体免疫沉淀; Keywords ErbB3 prokaryotic expression dimerization,polyclonal antibody(pcAb) immunoprecipitation(IP); 分类号 R446.4 [医药卫生—诊断学] R446.62 [医药卫生—诊断学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人β-catenin原核表达条件的优化及生物学活性鉴定被引量：6: 4; 作者牛夏忆韩茂椿李淼陈云雨刘晓平; 机构皖南医学院药物筛选与评价研究所; 出处《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期58-66,共9页; 基金国家自然科学基金项目(81703546) 安徽省自然科学基金项目(1808085QH265) +3 种基金皖南医学院大学生科研资助金项目(WK2018S54)。; 文摘优化重组人β-catenin(138~686 aa)在大肠埃希菌中的原核表达条件,经分离纯化后进行生物学活性鉴定。利用基因工程技术,将构建的重组质粒β-catenin-pET-30a(+)转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后进行β-catenin原核表达。为了提高β-catenin表达量,从诱导时间、诱导温度与IPTG诱导浓度3个单因素方面进行原核表达条件优化。β-catenin经HisTrap层析柱分离纯化后,以荧光偏振实验和酶联免疫吸附测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)进行生物学活性鉴定。构建的工程菌经原核表达条件优化后,确定诱导温度25℃、诱导时间10 h、0.2 mmol/L IPTG作为β-catenin最佳原核表达条件。荧光偏振实验和ELISA实验说明,纯化的β-catenin具有良好的生物学活性。本研究成功进行了重组人β-catenin原核表达条件的优化与生物学活性鉴定,为深入研究β-catenin在肿瘤免疫抵抗中的生物学功能奠定了实验基础。; 关键词 Β-CATENIN 表达优化亲和层析荧光偏振酶联免疫吸附测定实验; Keywords β-catenin expression optimization affinity chromatography fluorescence polarization ELISA; 分类号 Q93-331 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大鼠抗新冠病毒主蛋白酶多克隆抗体的制备与鉴定被引量：4: 5; 作者闫干干戚海燕闫浩浩付正豪刘晓平陈云雨; 机构皖南医学院药物筛选与评价研究所; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1032-1037,共6页; 基金国家自然科学基金(81703546) 安徽省自然科学基金(1808085QH265) +2 种基金皖南医学院大学生科研资助金(WK2021XS54)。; 文摘目的原核表达与分离纯化新冠病毒主蛋白酶(Mpro)并制备大鼠抗Mpro多克隆抗体用于研究Mpro在2019冠状病毒病(COVID-19)中的免疫学功能。方法将密码子优化的新冠病毒Mpro基因连接到pET-28a载体中,构建重组质粒pET-28a-Mpro。再将其转化到E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,经原核表达条件优化后,以亲和层析法分离纯化Mpro。将纯化的Mpro作为抗原免疫大鼠,制备抗Mpro多克隆抗体。以ELISA和Western blot实验鉴定抗Mpro多克隆抗体的效价、抗原特异性与灵敏性。结果利用大肠杆菌原核表达技术,确定了Mpro的最佳表达条件并成功进行了分离纯化。ELISA与Western blot实验结果证实,制备的抗Mpro多克隆抗体效价可达1∶256000,且具有良好的抗原特异性与灵敏性。结论成功制备了高特异性大鼠抗Mpro多克隆抗体,为研究Mpro在COVID-19中的免疫学功能奠定了实验基础。; 关键词新冠病毒主蛋白酶原核表达多克隆抗体 ELISA; Keywords SARS-CoV-2 main protease(Mpro) prokaryotic expression polyclonal antibody ELISA; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学] R392-33 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名过表达TrxR1重组HEK293细胞株的构建和鉴定: 6; 作者吕晓梅周知音朱丽周吉黄慧丹张超刘晓平; 机构皖南医学院药物筛选与评价研究所附属弋矶山医院生殖医学中心; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期554-560,共7页; 基金国家自然科学基金(82104011) 安徽省自然科学基金(2108085MH319) +1 种基金安徽省高校自然科学研究重大项目(KJ2019ZD30)。; 文摘目的构建稳定过表达硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)的HEK293细胞株,为TrxR1的功能研究以及靶向TrxR1药物筛选提供细胞模型。方法通过PCR扩增,连接转化以及Sanger双脱氧测序构建并筛选出TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1,转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞株。后续研究分为3组进行:①TrxR1过表达HEK293细胞:pLVX-Puro-TXNRD1载体稳定转染细胞;②对照HEK293细胞:pLVX-Puro空载病毒载体稳定转染细胞;③正常HEK293细胞;通过RT-qPCR、Western blot实验检测上述3组细胞中TrxR1的mRNA以及蛋白表达情况;通过胰岛素终点法以及TRFS-green探针成像检测上述3种细胞内TrxR1的酶活力;通过CCK8实验检测上述3种细胞对TrxR1特异性抑制剂auranofin的敏感性。结果构建载体经DNA测序,成功获得插入TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1。与HEK293以及HEK293-NC细胞相比,HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1的mRNA和蛋白高表达,且酶活力也同样显著上升(P<0.005);而与HEK293以及HEK293-NC细胞相比,auranofin对HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1酶活力以及细胞增殖的抑制效率均显著下降(P<0.005)。结论通过构建pLVX-Puro-TXNRD1慢病毒载体,成功获得过表达TrxR1酶的HEK293细胞株,该细胞对特异性靶向TrxR1的抑制剂的抗增殖作用具有抵抗,因而可用于靶向TrxR1药物的筛选。; 关键词硫氧还蛋白还原酶1 慢病毒包装过表达细胞模型; Keywords thioredoxin reductase 1 lentiviral packaging overexpression cell model; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] R965.1 [医药卫生—药理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定	牛夏忆李淼张倩陈云雨刘晓平	《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2019	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	重组人HER3胞外域Ⅰ区183-227aa的原核表达及大鼠多克隆抗体的制备与鉴定	朱磊袁平川赵志刚王鑫王国栋颜亮	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2020	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	大鼠抗人表皮生长因子受体3(ErbB3)二聚化界面区多克隆抗体的制备与鉴定	朱磊王鑫袁平川王国栋	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2021	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	重组人β-catenin原核表达条件的优化及生物学活性鉴定	牛夏忆韩茂椿李淼陈云雨刘晓平	《微生物学杂志》 CAS CSCD	2020	6	在线阅读下载PDF 职称材料
5	大鼠抗新冠病毒主蛋白酶多克隆抗体的制备与鉴定	闫干干戚海燕闫浩浩付正豪刘晓平陈云雨	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2021	4	在线阅读下载PDF 职称材料
6	过表达TrxR1重组HEK293细胞株的构建和鉴定	吕晓梅周知音朱丽周吉黄慧丹张超刘晓平	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料