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Orexin-A通过调节促离子型谷氨酸受体促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复
1
作者 何光侣 储婉玉 +7 位作者 李妍 盛鑫 罗浩 徐爱萍 卞命杰 张环环 汪萌芽 郑超 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第5期1023-1030,共8页
目的探讨Orexin-A对促离子型谷氨酸受体的调节在大鼠脊髓损伤(SCI)运动功能恢复中的作用。方法36只7~14 d新生SD大鼠随机平均分为6组:对照组、假手术组、SCI+生理盐水组、SCI+DNQX组、SCI+Orexin组和SCI+Orexin+DNQX组。除了对照组和假... 目的探讨Orexin-A对促离子型谷氨酸受体的调节在大鼠脊髓损伤(SCI)运动功能恢复中的作用。方法36只7~14 d新生SD大鼠随机平均分为6组:对照组、假手术组、SCI+生理盐水组、SCI+DNQX组、SCI+Orexin组和SCI+Orexin+DNQX组。除了对照组和假手术组外,其他各组施以SCI手术,术后连续3 d,每天分别向SCI各组鞘内注射对应的药物1次。分别在术前1 d,术后1、3和7 d,应用BBB评分和斜板试验评估各组大鼠运动功能;在膜片钳实验中,将对照组、假手术组、SCI组和SCI+Orexin组大鼠麻醉后,制作脊髓切片,通过酶消化和机械吹打分离出腹角神经元,通过灌流谷氨酸,比较各组大鼠脊髓腹角神经元谷氨酸受体介导电流的翻转电位、动力学指标的差异。结果在术后3 d、7 d,SCI+Orexin组的BBB评分和抓握倾斜角度比SCI+生理盐水组、SCI+DNQX组和SCI+Orexin+DNQX组皆升高(P<0.01)。在术后第7天,SCI+Orexin+DNQX组高于SCI+DNQX组(P<0.01)。SCI组脊髓腹角神经元谷氨酸电流的翻转电位高于SCI+Orexin组和假手术组(P<0.01)。在谷氨酸电流动力学指标中,SCI组的上升斜率比SCI+Orexin组和假手术组皆增大(P<0.05)。在衰减时间项,SCI组比SCI+Orexin组、假手术组皆减小(P<0.05)。结论Orexin-A可能通过调节(改善)促离子型谷氨酸受体的功能促进脊髓损伤后运动功能的恢复。 展开更多
关键词 OREXIN-A 促离子型谷氨酸受体 脊髓损伤 脊髓腹角神经元 膜片钳记录
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依托咪酯降低新生大鼠离体脊髓腹角神经元的兴奋性及抑制nAChR的功能 被引量：5
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作者 朱苏月 黄艳 +5 位作者 靳娜 杨鑫宇 张环环 徐爱萍 汪萌芽 郑超 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期676-682,共7页
目的研究依托咪酯(ET)对脊髓腹角神经元电生理特性及烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的影响。方法选用19只7~12 d新生SD大鼠,麻醉后,将含有腰骶膨大的脊髓分离并切片,用木瓜蛋白酶(0.18 g/30 mL人工脑脊液)消化切片并孵育40 min,显微镜下选... 目的研究依托咪酯(ET)对脊髓腹角神经元电生理特性及烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的影响。方法选用19只7~12 d新生SD大鼠,麻醉后,将含有腰骶膨大的脊髓分离并切片,用木瓜蛋白酶(0.18 g/30 mL人工脑脊液)消化切片并孵育40 min,显微镜下选取腹角,用抛光的巴斯德吸管进行急性机械分离神经元,对贴壁的健康神经元结合药理学方法进行穿孔膜片钳记录实验。在电流钳模式下,先记录脊髓腹角神经元自发动作电位(AP),然后结合预处理给药方式,分别记录不同浓度的ET对脊髓腹角神经元自发AP影响。在电压钳模式下,先应用尼古丁在脊髓腹角神经元诱导出内向电流,然后结合预处理给药方式,记录在不同浓度的ET、不同钳制电位以及不同使用时间的情况下,ET对尼古丁在脊髓腹角神经元诱导的内向电流的影响。结果急性分离的脊髓腹角神经元状态良好,具有形状多样的胞体和完整的突起;共记录到21例脊髓腹角神经元有自发AP,经0.3、3.0、30.0μmol/L(3.0μmol/L相当于临床浓度)不同浓度的ET持续灌流2 min后,与给药前比较,结果12例神经元的AP幅度、锋电位幅度及超射分别被浓度依赖性抑制(P<0.01);自发放电频率降低(P<0.01)。另外9例神经元的AP被3.0或30.0μmol/L的ET完全取消;在相同钳制电位下(VH=-70 mV),分别经0.3、3.0和30.0μmol/L的ET预处理2 min后,对0.4 mmol/L尼古丁诱导的电流幅度显示出浓度依赖性压抑作用(P<0.01,n=7)。将钳制电位分别设定为-30、-50、-70 mV,应用30.0μmol/L的ET预处理2 min后,对0.4 mmol/L尼古丁诱导的电流幅度呈电压依赖性压抑作用(P<0.01,每个钳制电位下n=6)。在30.0μmol/L的ET预处理6 min过程中,分别于0、2、4、6 min时先后4次暴露于0.4 mmol/L的尼古丁(每次暴露时间为2 s),随着暴露次数增多,尼古丁电流幅度逐渐减小;但若在6 min的预处理过程中,仅在开始(0 min)和结束(6 min)时两次暴露于相同浓度尼古丁,则6 min时,电流幅度抑制率较4次暴露尼古丁时的抑制率明显降低(P<0.01,n=6)。结论ET以浓度依赖的方式降低脊髓腹角神经元的兴奋性,并且以浓度依赖、电压依赖和使用依赖的方式压抑nAChR功能。 展开更多
关键词 依托咪酯 脊髓腹角神经元 N型乙酰胆碱受体 穿孔膜片钳记录
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Orexin-A通过激活OX_(1)R、OX_(2)R和非Ca^(2+)依赖的PKC抑制新生大鼠脊髓腹角神经元的γ-氨基丁酸电流 被引量：1
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作者 杨鑫宇 朱苏月 +6 位作者 靳娜 李妍 甄骋 张环环 徐爱萍 汪萌芽 郑超 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期694-701,共8页
目的研究orexin-A对脊髓腹角神经元促离子型γ-氨基丁酸(GABA)受体功能的影响及其机制。方法选取7~12 d的新生SD大鼠,麻醉后分离出含腰骶膨大的脊髓节段并切片。使用木瓜蛋白酶(Papain,0.18 g/30 mL人工脑脊液)消化切片并孵育40~60 min... 目的研究orexin-A对脊髓腹角神经元促离子型γ-氨基丁酸(GABA)受体功能的影响及其机制。方法选取7~12 d的新生SD大鼠,麻醉后分离出含腰骶膨大的脊髓节段并切片。使用木瓜蛋白酶(Papain,0.18 g/30 mL人工脑脊液)消化切片并孵育40~60 min。显微镜下保留腹角,使用抛光的不同口径的巴斯德吸管急性机械分离单个细胞,待细胞贴壁后,应用膜片钳记录联合药理学方法对状态良好的神经元开展研究。在电压钳模式下记录,结合预处理给药方式,应用GABA受体激动剂γ-氨基丁酸记录在脊髓腹角神经元诱发的电流,给予orexin-A观察其对GAB A电流的调制作用,先后给予OX1R选择性拮抗剂SB334867、OX2R选择性拮抗剂TCSOX229、PKC抑制剂Bis-Ⅳ、PKC激动剂PMA、PKA抑制剂Rp-cAMP、Ca2+螯合剂BAPTA等药物分析orexin-A对GABA电流调制的作用机制。结果分离的脊髓腹角神经元形态良好,胞体形状多样,表面光洁,立体感较强且突起较长;给予orexin-A后,GABA诱发的电流幅值被显著制抑(P<0.001,n=49),抑制率为(67.48±12.50)%;同时给予SB334867和TCSOX229可完全取消orexin-A对GABA电流的抑制作用(P=0.93,n=6);单独应用SB334867(P=0.001,n=8)或TCSOX229(P=0.02,n=8)均部分解除orexin-A对GAB A电流的压抑作用;给予Bis-Ⅳ后,orexin-A不再压抑GAB A电流(P=0.31,n=5);PMA可模拟orexin-A的作用,显著抑制GAB A电流,抑制率为(60.79±10.94)%,在此基础上,orexin-A不能进一步压抑GAB A电流(P=0.15,n=6)。给予Rp-cAMP后,orexin-A仍可显著压抑 GABA 电流(P=0.001,n=5)。在无 Ca2+细胞外液(P=0.004,n=8)或胞内应用BAPTA (P=0.04,n=7)时,orexin-A对GABA电流的压抑作用不受影响。结论 Orexin-A抑制脊髓腹角神经元的GABA电流,该效应可能经由OX1R和OX2R共同介导以及非Ca2+依赖的PKC信号通路的参与。 展开更多
关键词 OREXIN-A Orexin受体 脊髓腹角神经元 Γ-氨基丁酸 膜片钳记录 蛋白激酶C
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