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溶酶体膜蛋白Sidt2缺失导致肝脏细胞自噬受损
被引量:
1
1
作者
耿梦雅
王李卓
+8 位作者
章尧
裴文俊
漆梦湘
杨梦
许家豪
梁洋洋
吕坤
何春玲
高家林
《南方医科大学学报》
CSCD
北大核心
2021年第8期1207-1213,共7页
目的研究溶酶体膜蛋白Sidt2缺失后对肝脏自噬的影响。方法利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏(HL7702)细胞模型,对自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12进行蛋白水平检测,同时使用免疫荧光方法对LC3B及P62...
目的研究溶酶体膜蛋白Sidt2缺失后对肝脏自噬的影响。方法利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏(HL7702)细胞模型,对自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12进行蛋白水平检测,同时使用免疫荧光方法对LC3B及P62进行共定位,检测自噬小体对P62货物蛋白的识别与封存以及自噬溶酶体的降解。对LC3B及LAMP1进行免疫荧光共定位,检测自噬小体与溶酶体融合过程。使用LysoTracker对酸性溶酶体进行示踪。结果成功构建HL7702细胞Sidt2^(+/+)组及Sidt2^(-/-)组,HL7702细胞Sidt2^(-/-)组较Sidt2^(+/+)组相比,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ及P62表达均增多(P<0.01),免疫荧光结果显示LC3B及P62亦明显增多(P<0.001),同时自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12表达减少(P<0.05)。LC3B与P62共定位降低,LC3B与LAMP1共定位降低,酸性溶酶体数量减少(P<0.05)。结论Sidt2基因的缺失导致人肝脏细胞自噬小体对P62货物蛋白的识别和封存障碍,同时酸性溶酶体数量减少、自噬小体与溶酶体融合障碍导致自噬溶酶体途径受阻,最终导致LC3B与P62发生堆积,肝脏细胞自噬受损。
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关键词
Sidt2
自噬小体
溶酶体
融合
货物蛋白
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职称材料
溶酶体膜蛋白sidt2介导肝脏细胞的凋亡:不通过抑制自噬溶酶体途径
2
作者
许家豪
耿梦雅
+12 位作者
刘海军
裴文俊
顾静
漆梦湘
章尧
吕坤
宋迎迎
刘苗苗
胡鑫
余翠
何春玲
王李卓
高家林
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期637-643,共7页
目的研究溶酶体膜蛋白Sidt2敲除后在肝脏细胞中调控凋亡的途径。方法利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏(HL7702)细胞模型,检测Sidt2和自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白水平,MDC染色观察自噬体形成情况,通过EdU和流式细胞实验观察...
目的研究溶酶体膜蛋白Sidt2敲除后在肝脏细胞中调控凋亡的途径。方法利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏(HL7702)细胞模型,检测Sidt2和自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白水平,MDC染色观察自噬体形成情况,通过EdU和流式细胞实验观察Sidt2对肝脏细胞增殖活性和凋亡的影响,并且使用0、10、25、50、100、200μmol/L的氯喹(CQ)摸索肝脏细胞CQ饱和浓度,检测对其自噬流的影响,以及使用CQ进一步探索影响肝脏细胞的增殖活性其凋亡水平的机制。结果成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组及Sidt2-/-组。Sidt2基因缺失可导致肝脏细胞增殖被抑制和凋亡水平的增加,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和P62在蛋白水平上的表达均增加且自噬体含量增加(P<0.05)。结果显示50μmol/LCQ作用下肝脏细胞自噬达到饱和状态,50μmol/L CQ使Sidt2基因缺失时LC3B和P62的表达均增加(P<0.05),且CQ进一步降低肝脏细胞活性,并促进其凋亡水平(P<0.05)。结论在离体水平上,Sidt2基因剔除后,HL7702细胞可表现自噬通路的异常,并且不通过抑制自噬溶酶体途径介导和调控凋亡。
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关键词
Sidt2
人肝脏细胞
凋亡
自噬
增殖
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职称材料
题名
溶酶体膜蛋白Sidt2缺失导致肝脏细胞自噬受损
被引量:
1
1
作者
耿梦雅
王李卓
章尧
裴文俊
漆梦湘
杨梦
许家豪
梁洋洋
吕坤
何春玲
高家林
机构
皖南医学院
弋矶山医院内分泌科
皖南医学院
弋矶山医院内分泌糖尿病研究所
皖南医学院
临床
医学院
皖南医学院
安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室
皖南医学院基础医学院生化教研室
皖南医学院
中心实验室
皖南医学院
重大疾病非编码RNA转化研究安徽普通高校重点实验室
出处
《南方医科大学学报》
CSCD
北大核心
2021年第8期1207-1213,共7页
基金
国家自然科学基金(81471002,81800766)
2018年安徽省重点研究与开发计划项目(1804h08020241)
+5 种基金
安徽省自然科学基金(1708085MH188)
活性生物大分子研究安徽省重点实验室自主研究课题(LAB201808)
安徽省高等学校人文社会科学研究项目(SK2019A0214)
皖南医学院校级重点科研基金项目(WK2020Z02)
皖医弋矶山医院“高峰”培育计划(GF2019J07)
皖医弋矶山医院“攀峰”培育计划(PF2019013)。
文摘
目的研究溶酶体膜蛋白Sidt2缺失后对肝脏自噬的影响。方法利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏(HL7702)细胞模型,对自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12进行蛋白水平检测,同时使用免疫荧光方法对LC3B及P62进行共定位,检测自噬小体对P62货物蛋白的识别与封存以及自噬溶酶体的降解。对LC3B及LAMP1进行免疫荧光共定位,检测自噬小体与溶酶体融合过程。使用LysoTracker对酸性溶酶体进行示踪。结果成功构建HL7702细胞Sidt2^(+/+)组及Sidt2^(-/-)组,HL7702细胞Sidt2^(-/-)组较Sidt2^(+/+)组相比,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ及P62表达均增多(P<0.01),免疫荧光结果显示LC3B及P62亦明显增多(P<0.001),同时自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12表达减少(P<0.05)。LC3B与P62共定位降低,LC3B与LAMP1共定位降低,酸性溶酶体数量减少(P<0.05)。结论Sidt2基因的缺失导致人肝脏细胞自噬小体对P62货物蛋白的识别和封存障碍,同时酸性溶酶体数量减少、自噬小体与溶酶体融合障碍导致自噬溶酶体途径受阻,最终导致LC3B与P62发生堆积,肝脏细胞自噬受损。
关键词
Sidt2
自噬小体
溶酶体
融合
货物蛋白
Keywords
Sidt2
autophagosomes
lysosomes
fusion
cargo proteins
分类号
R575 [医药卫生—消化系统]
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职称材料
题名
溶酶体膜蛋白sidt2介导肝脏细胞的凋亡:不通过抑制自噬溶酶体途径
2
作者
许家豪
耿梦雅
刘海军
裴文俊
顾静
漆梦湘
章尧
吕坤
宋迎迎
刘苗苗
胡鑫
余翠
何春玲
王李卓
高家林
机构
皖南医学院
弋矶山医院内分泌科
皖南医学院
弋矶山医院内分泌糖尿病研究所
皖南医学院
临床
医学院
皖南医学院
安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室
皖南医学院基础医学院生化教研室
皖南医学院
中心实验室
皖南医学院
重大疾病非编码RNA转化研究安徽普通高校重点实验室
皖南医学院
第二附属医院内分泌科
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期637-643,共7页
基金
国家自然科学基金(81471002,81800766)
安徽省自然科学基金(2108085MH267)
+5 种基金
安徽省大学生创新创业训练计划项目(202010368117)
活性生物大分子研究安徽省重点实验室自主研究课题(LAB201808)
2022年皖南医学院大学生科研资助项目(WK2022XS50)
皖南医学院校级重点科研基金项(WK2020Z02)
皖医弋矶山医院“高峰”培育计划(GF2019J07)
皖医弋矶山医院“攀峰”培育计划(PF2019013)。
文摘
目的研究溶酶体膜蛋白Sidt2敲除后在肝脏细胞中调控凋亡的途径。方法利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏(HL7702)细胞模型,检测Sidt2和自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白水平,MDC染色观察自噬体形成情况,通过EdU和流式细胞实验观察Sidt2对肝脏细胞增殖活性和凋亡的影响,并且使用0、10、25、50、100、200μmol/L的氯喹(CQ)摸索肝脏细胞CQ饱和浓度,检测对其自噬流的影响,以及使用CQ进一步探索影响肝脏细胞的增殖活性其凋亡水平的机制。结果成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组及Sidt2-/-组。Sidt2基因缺失可导致肝脏细胞增殖被抑制和凋亡水平的增加,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和P62在蛋白水平上的表达均增加且自噬体含量增加(P<0.05)。结果显示50μmol/LCQ作用下肝脏细胞自噬达到饱和状态,50μmol/L CQ使Sidt2基因缺失时LC3B和P62的表达均增加(P<0.05),且CQ进一步降低肝脏细胞活性,并促进其凋亡水平(P<0.05)。结论在离体水平上,Sidt2基因剔除后,HL7702细胞可表现自噬通路的异常,并且不通过抑制自噬溶酶体途径介导和调控凋亡。
关键词
Sidt2
人肝脏细胞
凋亡
自噬
增殖
Keywords
Sidt2
human liver cells
apoptosis
autophagy
proliferation
分类号
R575 [医药卫生—消化系统]
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溶酶体膜蛋白Sidt2缺失导致肝脏细胞自噬受损
耿梦雅
王李卓
章尧
裴文俊
漆梦湘
杨梦
许家豪
梁洋洋
吕坤
何春玲
高家林
《南方医科大学学报》
CSCD
北大核心
2021
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溶酶体膜蛋白sidt2介导肝脏细胞的凋亡:不通过抑制自噬溶酶体途径
许家豪
耿梦雅
刘海军
裴文俊
顾静
漆梦湘
章尧
吕坤
宋迎迎
刘苗苗
胡鑫
余翠
何春玲
王李卓
高家林
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