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人FL基因高效真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达
被引量：
3
1
作者
王冠军
马俐君
+1 位作者
李梁
裴雪涛
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期305-308,共4页
目的 :构建人FL真核表达载体 pIRES1neo/hFL ,观察其在COS 7细胞中的表达。方法 :采用RT PCR方法自人白血病细胞系TF 1中克隆可溶型FL(Flt3 ligand)cDNA片段 ,测序鉴定正确后 ,插入真核表达载体 pIRES1neo中的EcoRI和BamHI位点 ,构建hF...
目的 :构建人FL真核表达载体 pIRES1neo/hFL ,观察其在COS 7细胞中的表达。方法 :采用RT PCR方法自人白血病细胞系TF 1中克隆可溶型FL(Flt3 ligand)cDNA片段 ,测序鉴定正确后 ,插入真核表达载体 pIRES1neo中的EcoRI和BamHI位点 ,构建hFL真核表达载体 pIRES1neo/hFL。脂质体介导法将其转染COS 7细胞 ,72h以RT PCR检测转染细胞中外源hFL基因的转录、ELISA法及脐血CD34 + 细胞增殖实验测定转染细胞上清中hFL的含量和活性。结果 :酶切鉴定表明成功构建了重组真核表达载体 pIRES1neo/hFL ;外源hFL基因能在转染细胞中有效转录 ;ELISA法测得 72h后培养上清中的hFL含量为每 2 4小时 2 5 1ng/ 10 6cells,并且分泌的hFL具有良好的生物学活性。结论 :构建hFL真核表达载体在COS 7细胞中具有良好的表达活性。
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关键词
FL
真核表达载体
COS-7细胞
表达活性
生物学活性
专职抗原递呈细胞
APC
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题名
人FL基因高效真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达
被引量：
3
1
作者
王冠军
马俐君
李梁
裴雪涛
机构
白求恩医科大学第一临床医学院血液肿瘤科
北京军事
医学
科
学院
输血研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期305-308,共4页
基金
国家重点基础研究发展规划 ( 973 )项目!(G19990 5 3 90 3 )资助
文摘
目的 :构建人FL真核表达载体 pIRES1neo/hFL ,观察其在COS 7细胞中的表达。方法 :采用RT PCR方法自人白血病细胞系TF 1中克隆可溶型FL(Flt3 ligand)cDNA片段 ,测序鉴定正确后 ,插入真核表达载体 pIRES1neo中的EcoRI和BamHI位点 ,构建hFL真核表达载体 pIRES1neo/hFL。脂质体介导法将其转染COS 7细胞 ,72h以RT PCR检测转染细胞中外源hFL基因的转录、ELISA法及脐血CD34 + 细胞增殖实验测定转染细胞上清中hFL的含量和活性。结果 :酶切鉴定表明成功构建了重组真核表达载体 pIRES1neo/hFL ;外源hFL基因能在转染细胞中有效转录 ;ELISA法测得 72h后培养上清中的hFL含量为每 2 4小时 2 5 1ng/ 10 6cells,并且分泌的hFL具有良好的生物学活性。结论 :构建hFL真核表达载体在COS 7细胞中具有良好的表达活性。
关键词
FL
真核表达载体
COS-7细胞
表达活性
生物学活性
专职抗原递呈细胞
APC
Keywords
hFL Eukaryotic expression vector COS 7 cells
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人FL基因高效真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达
王冠军
马俐君
李梁
裴雪涛
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001
3
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