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AAV载体介导的视网膜基因转移实验研究被引量：10: 1; 作者单清张杰 +4 位作者任华王登龙伊洪涛吴小兵钱焕文《眼科新进展》 CAS 2001年第4期225-227,共3页; 目的　以绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP)作为标记基因 ,观察腺相关病毒 (AAV )载体介导视网膜基因转移作用 ,为视网膜疾病的基因治疗打下基础。方法　制备重组腺相关病毒 r AAV- gfp;将纯化的 r AAV- gfp病毒 10 μL (10... 展开更多; 关键词视网膜基因转移腺相关病毒载体绿色荧光蛋白 AAV GFP; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种通用型重组2型腺伴随病毒载体的构建及外源基因表达的研究被引量：2: 2; 作者张桐王文亮 +4 位作者侯云德杨新科颜子颖孙立连王伯云《西安医科大学学报》 CSCD 1997年第3期312-316,320,共6页; 以野生型2型人腺伴随病毒（AAV－2）基因组载体pSSV9－int-为基础，构建了一种携带和表达真核基因的基础AAV载体pSSV9／MulV－neosv，表达了neo基因，并采用该载体组建了携带人白细胞介素-2cDNA的重组AAV载体pSSV9／MulV－neosv－IL－2... 展开更多; 关键词腺伴随病毒载体构建基因表达基因载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

福氏志贺菌gyrA和parC基因QRDR序列的测定与同源性分析被引量：5: 3; 作者张继瑜金奇侯云德《动物医学进展》 CSCD 2002年第3期47-50,59,共5页; 测定了我国痢疾流行病原志贺菌福氏2 a 3 0 1株与喹喏酮类药物耐药性相关的 gyr A( DNA旋转酶 A亚单位 )和 par C(拓扑异构酶IVA亚单位 )基因 ,并将 gyr A和 par C基因QRDR(喹喏酮类药物耐药性决定区 )核苷酸序列与几种动物和人的病原... 展开更多; 关键词福氏志贺菌 GYRA PARC基因 QRDR序列测定同源性分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达被引量：7: 4; 作者周世力李琳琳何雅青《分析科学学报》 CAS CSCD 2007年第2期157-159,共3页; 将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导... 展开更多; 关键词肠道病毒71型 VP1 大肠杆菌BL21; 在线阅读下载PDF 职称材料

含巨细胞病毒早期启动子的EPO逆转录病毒表达载体的构建被引量：3: 5; 作者陈广南梁希若吴淑华《广州医学院学报》 1997年第2期1-4,共4页; 本文构建了含巨细胞病毒（CMV）早期启动子的红细胞生成素（EPO）逆转录病毒表达我体。困逆转录病毒表达我体pN2A需用外源启动子才能表达国的基因，故把CMV早期启动手及包括除信号肽中第2、3和4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列... 展开更多; 关键词红细胞生成素(EPO) 逆转录病毒载体基因重组; 在线阅读下载PDF 职称材料

腺病毒载体介导的RNAi对SK-BR-3细胞c-Met表达的影响: 6; 作者赵慧陈东 +2 位作者袁振华王忠山吴小兵《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期549-552,共4页; 目的:通过腺病毒载体介导的RNA干扰技术抑制乳腺癌细胞HGF受体c-Met的表达,抑制乳腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。方法:PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至SK-BR-3细胞;RNA狭缝杂交检... 展开更多; 关键词 c—Met 肝细胞生长因子腺病毒 RNA干扰; 在线阅读下载PDF 职称材料

福氏2a志贺菌301株染色质基因文库的构建: 7; 作者杨朵张笑冰 +2 位作者朱俊萍金奇楚雍烈《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期469-471,共3页; 目的　构建福氏 2a志贺氏菌 3 0 1株染色质DNA基因文库 ,为下一步全基因组序列测定打下基础。方法　Murry法提取福氏 2a志贺氏菌染色质DNA ,采用鸟枪法策略 ,分别经 8种限制性内切酶消化后克隆至载体质粒中 ,并经双脱氧链末端终止法测... 展开更多; 关键词福氏2a志贺氏菌鸟枪法基因文库构建; 在线阅读下载PDF 职称材料

2型腺伴随病毒生物安全性的初步形态学观察: 8; 作者张桐王文亮 +2 位作者候云德杨新科王伯云《西安医科大学学报》 CSCD 1998年第2期164-167,共4页; 用野生型AAV－2感染宿主293细胞后对细胞进行了形态学观察，并采用AAVCap基因探针检测了感染细胞标本中的野生型AAVDNA；采用携带β-半乳糖苷酶基因，而不含AAVrep基因及其表达产物的重组AAV作对照，感染293细胞后检测细胞内β-半乳糖... 展开更多; 关键词腺伴随病毒形态学 293细胞安全性载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名AAV载体介导的视网膜基因转移实验研究被引量：10: 1; 作者单清张杰任华王登龙伊洪涛吴小兵钱焕文; 机构军事医学科学院放射医学研究所病毒基因工程国家重点实验室; 出处《眼科新进展》 CAS 2001年第4期225-227,共3页; 基金国家 8 63重大项目资助 (编号 :Z2 0 -0 5 -0 2 ); 文摘目的　以绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP)作为标记基因 ,观察腺相关病毒 (AAV )载体介导视网膜基因转移作用 ,为视网膜疾病的基因治疗打下基础。方法　制备重组腺相关病毒 r AAV- gfp;将纯化的 r AAV- gfp病毒 10 μL (10× 10 1 2 TU· L- 1 )分别注射于青紫兰灰兔及日本大耳白兔视网膜下 ,于一定时间内取眼球或用眼底照相机进行观察。结果　注射 r AAV- gfp后未见兔眼术后细菌感染及明显免疫反应 ,在荧光显微镜下观察 GFP表达情况 ,3周时可见明显的绿色荧光分布于 RPE细胞层 ,5、6周荧光强度比3周增强 ,荧光范围也有所扩大。直至 10周荧光范围进一步扩大 ,强度更强。眼底照相机观察显示 ,最早 4周观察到眼底 GFP表达 ,至 7个月 (观察仍在继续 )仍然维持在高水平。结论　视网膜下注射 r AAV- gfp病毒可在 RPE细胞内稳定表达报告基因 gfp;AAV载体可望用于视网膜疾病的基因治疗。; 关键词视网膜基因转移腺相关病毒载体绿色荧光蛋白 AAV GFP; Keywords retina gene transfer adeno associated virus vector green fluorescent protein; 分类号 R774.1 [医药卫生—眼科]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种通用型重组2型腺伴随病毒载体的构建及外源基因表达的研究被引量：2: 2; 作者张桐王文亮侯云德杨新科颜子颖孙立连王伯云; 机构第四军医大学病理学教研室中国预防医学科学院病毒研究所病毒基因工程国家重点实验室; 出处《西安医科大学学报》 CSCD 1997年第3期312-316,320,共6页; 文摘以野生型2型人腺伴随病毒（AAV－2）基因组载体pSSV9－int-为基础，构建了一种携带和表达真核基因的基础AAV载体pSSV9／MulV－neosv，表达了neo基因，并采用该载体组建了携带人白细胞介素-2cDNA的重组AAV载体pSSV9／MulV－neosv－IL－2，转染A549细胞后表达了人白细胞介素-2基因。为应用腺伴随病毒作基因治疗研究提供了实验基础。; 关键词腺伴随病毒载体构建基因表达基因载体; Keywords adeno-associated virus construction of vectors gene expression; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学] R373 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名福氏志贺菌gyrA和parC基因QRDR序列的测定与同源性分析被引量：5: 3; 作者张继瑜金奇侯云德; 机构中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所病毒基因工程国家重点实验室; 出处《动物医学进展》 CSCD 2002年第3期47-50,59,共5页; 基金国家重大基础研究规划 (973)项目 (G19990 5 4 10 5 ); 文摘测定了我国痢疾流行病原志贺菌福氏2 a 3 0 1株与喹喏酮类药物耐药性相关的 gyr A( DNA旋转酶 A亚单位 )和 par C(拓扑异构酶IVA亚单位 )基因 ,并将 gyr A和 par C基因QRDR(喹喏酮类药物耐药性决定区 )核苷酸序列与几种动物和人的病原菌进行了同源性和遗传进化比较分析。结果显示 ,志贺菌福氏 2 agyr A和 par C基因 QRDR序列分别与宋内氏志贺菌、大肠杆菌 O1 57、大肠杆菌 K1 2、阴沟肠杆菌、坂口肠道杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、肺炎克氏杆菌、产道克氏杆菌、空肠弯曲杆菌、弗氏柠檬酸杆菌具有显著同源性(均大于 88% ) ,表明 gyr A和 par C是这些细菌中的看家基因 ,推测在各种细菌中具有类似的起源 ,因此对在不同细菌之间进行喹喏酮类药物耐药性的研究非常有利。 QRDR的遗传进化分析表明 ,同属或相近属细菌 gyr A或 par CQRDR的遗传距离明显接近 ,其中与大肠杆菌属的距离最近 ,认为可列到同一个属 ,结果有力支持了近年提出的大肠杆菌与志贺菌属于同族细菌的理论。; 关键词福氏志贺菌 GYRA PARC基因 QRDR序列测定同源性分析; Keywords S. flexneri animal pathogens gyrA parC identity genetics and evolution; 分类号 S852.612 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达被引量：7: 4; 作者周世力李琳琳何雅青; 机构江汉大学医学与生命科学学院病毒基因工程国家重点实验室深圳市疾病与预防控制中心; 出处《分析科学学报》 CAS CSCD 2007年第2期157-159,共3页; 基金湖北省科技攻关计划(No.2005AA301C56); 文摘将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导的BL21中检测到分子量与预期大小相符的大约60 kDa的融合蛋白。利用表达产物作为抗原,对EV71感染病人阳性血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的检测用抗原。; 关键词肠道病毒71型 VP1 大肠杆菌BL21; Keywords Enterovirus 71 VP1 E. coli BL21; 分类号 Q51 [生物学—生物化学] Q939.11 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名含巨细胞病毒早期启动子的EPO逆转录病毒表达载体的构建被引量：3: 5; 作者陈广南梁希若吴淑华; 机构病毒基因工程国家重点实验室; 出处《广州医学院学报》 1997年第2期1-4,共4页; 基金广州医学院青年科研基金; 文摘本文构建了含巨细胞病毒（CMV）早期启动子的红细胞生成素（EPO）逆转录病毒表达我体。困逆转录病毒表达我体pN2A需用外源启动子才能表达国的基因，故把CMV早期启动手及包括除信号肽中第2、3和4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列的EPO次全基因片段一起克隆到pN2A载体neo基因下游的多聚接头上的单一酶切位点BglⅡ上，构建成重组质粒pN2ACMVEPO。; 关键词红细胞生成素(EPO) 逆转录病毒载体基因重组; Keywords Erythropoietin(EPO) Retroviral vector Gene recombination; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名腺病毒载体介导的RNAi对SK-BR-3细胞c-Met表达的影响: 6; 作者赵慧陈东袁振华王忠山吴小兵; 机构吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室广东医学院组织学与胚胎学教研室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室吉林大学基础医学院细胞生物学教研室; 出处《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期549-552,共4页; 文摘目的:通过腺病毒载体介导的RNA干扰技术抑制乳腺癌细胞HGF受体c-Met的表达,抑制乳腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。方法:PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至SK-BR-3细胞;RNA狭缝杂交检测SK-BR-3细胞c-Met mRNA水平,Western印迹检测c-Met蛋白水平。结果:获得了带有人U6启动子及c-Met反向互补靶序列的重组腺病毒载体rAdUshmet1和rAdUshmet2。转导了重组腺病毒的SK-BR-3细胞的c-Met mRNA和蛋白相对表达量均有所下降。结论:腺病毒载体rAdUshmet通过抑制HGF受体c-Met表达,能在一定程度上阻断HGF-c-Met信号转导通路,有可能成为对乳腺癌进行基因治疗的有效载体。; 关键词 c—Met 肝细胞生长因子腺病毒 RNA干扰; Keywords c-Met hepatocyte growth factor adenovirus RNA interference; 分类号 R346 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名福氏2a志贺菌301株染色质基因文库的构建: 7; 作者杨朵张笑冰朱俊萍金奇楚雍烈; 机构西安交通大学第一医院检验科西安交通大学微生物学教研室中国预防医学科学院病毒基因工程国家重点实验室; 出处《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期469-471,共3页; 基金国家高技术计划 ( 86 3)项目资助国家重大基础研究规划 ( 973)项目资助; 文摘目的　构建福氏 2a志贺氏菌 3 0 1株染色质DNA基因文库 ,为下一步全基因组序列测定打下基础。方法　Murry法提取福氏 2a志贺氏菌染色质DNA ,采用鸟枪法策略 ,分别经 8种限制性内切酶消化后克隆至载体质粒中 ,并经双脱氧链末端终止法测序后计算重组质粒重复率。结果　Murry法提取福氏 2a志贺氏菌染色质DNA大小为 3 0Kb以上 ,共构建 86 3 2个重组质粒 ,质粒重复率为 1 %。结论　本研究在国际上首次成功构建了福氏 2a志贺氏菌株染色质DNA基因文库 ,文库全长为福氏 2a志贺氏染色质的 6倍 ,已足够全基因组序列测定所需。; 关键词福氏2a志贺氏菌鸟枪法基因文库构建; Keywords Shigella Flexneri 2a shot-gun construction of gene library; 分类号 R378.25 [医药卫生—病原生物学] R394.8 [医药卫生—医学遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名2型腺伴随病毒生物安全性的初步形态学观察: 8; 作者张桐王文亮候云德杨新科王伯云; 机构西安第四军医大学病理学教研室中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室; 出处《西安医科大学学报》 CSCD 1998年第2期164-167,共4页; 基金国家863基因治疗重大关键技术项目!863-BH03-05-02; 文摘用野生型AAV－2感染宿主293细胞后对细胞进行了形态学观察，并采用AAVCap基因探针检测了感染细胞标本中的野生型AAVDNA；采用携带β-半乳糖苷酶基因，而不含AAVrep基因及其表达产物的重组AAV作对照，感染293细胞后检测细胞内β-半乳糖苷酶表达产物，同时对细胞作形态学观察。结果显示野生型AAV－2感染宿主细胞后24～48h，多数细胞胞体收缩、变形，部分细胞死亡、脱落，用Cap基因探针从病变的293细胞基因组DNA中检测到了野生AAVDNA；而被重组AAV感染的293细胞表达了β-半乳糖苷酶，而未出现细胞病变，本结果提示野生型AAV对敏感宿主细胞可表现出毒性作用，其原因可能与rep产物的作用有关。; 关键词腺伴随病毒形态学 293细胞安全性载体; Keywords adeno-associated virus 293 cells morphology safety; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	AAV载体介导的视网膜基因转移实验研究	单清张杰任华王登龙伊洪涛吴小兵钱焕文	《眼科新进展》 CAS	2001	10	在线阅读下载PDF 职称材料
2	一种通用型重组2型腺伴随病毒载体的构建及外源基因表达的研究	张桐王文亮侯云德杨新科颜子颖孙立连王伯云	《西安医科大学学报》 CSCD	1997	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	福氏志贺菌gyrA和parC基因QRDR序列的测定与同源性分析	张继瑜金奇侯云德	《动物医学进展》 CSCD	2002	5	在线阅读下载PDF 职称材料
4	肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达	周世力李琳琳何雅青	《分析科学学报》 CAS CSCD	2007	7	在线阅读下载PDF 职称材料
5	含巨细胞病毒早期启动子的EPO逆转录病毒表达载体的构建	陈广南梁希若吴淑华	《广州医学院学报》	1997	3	在线阅读下载PDF 职称材料
6	腺病毒载体介导的RNAi对SK-BR-3细胞c-Met表达的影响	赵慧陈东袁振华王忠山吴小兵	《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2006	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	福氏2a志贺菌301株染色质基因文库的构建	杨朵张笑冰朱俊萍金奇楚雍烈	《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2001	0	在线阅读下载PDF 职称材料
8	2型腺伴随病毒生物安全性的初步形态学观察	张桐王文亮候云德杨新科王伯云	《西安医科大学学报》 CSCD	1998	0	在线阅读下载PDF 职称材料