湖北省某鸽场大肠埃希氏菌的分离鉴定与耐药性分析

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作者 王娟 卢琴 +3 位作者 张记高 程伊洛 张腾飞 刘静波 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期134-138,共5页

大肠杆菌病是危害鸽养殖业的重要细菌性传染病,然而相关的流行及耐药数据却相对较少。为研究湖北省鸽场大肠埃希氏菌的流行及耐药情况,采集了肉鸽屠宰后的肝、脾、肠内容物等285份,经伊红美蓝琼脂培养基分离培养,通过PCR鉴定,分离到了19... 大肠杆菌病是危害鸽养殖业的重要细菌性传染病,然而相关的流行及耐药数据却相对较少。为研究湖北省鸽场大肠埃希氏菌的流行及耐药情况,采集了肉鸽屠宰后的肝、脾、肠内容物等285份,经伊红美蓝琼脂培养基分离培养,通过PCR鉴定,分离到了199株鸽源大肠埃希氏菌,分离率为69.82%。经过双重PCR扩增对菌株进行系统进化群鉴定,筛选出高致病群菌株60株(B2群34株,D群26株),占分离株的30.15%。采用药敏纸片法对60株高致病群菌株进行了12种抗菌药物的耐药性分析,结果表明,这些菌株对林可霉素、氟苯尼考、四环素、氨苄西林、红霉素和甲氧苄氨嘧啶的耐药率高于95%,而对大观霉素、替加环素、头孢噻肟、环丙沙星、多黏菌素B和美罗培南等较为敏感。所有菌株均耐3种以上的抗菌药物,最多可耐9种抗菌药物,其中51.67%的菌株耐6种抗菌药物,占比最多。研究结果可为湖北省鸽场大肠杆菌病的预防与合理用药提供科学数据。 展开更多

关键词 大肠埃希氏菌 分离鉴定 致病群 耐药性 鸽

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湖北省2个规模化蛋鸡养殖场环境细菌监测分析

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作者 廖卫东 张文婷 +8 位作者 刘廷江 姜博达 郭云清 张腾飞 卢琴 汪最 程伊洛 罗青平 姚敏 《中国家禽》 北大核心 2024年第7期113-118,共6页

为了解蛋鸡养殖场环境中病原菌流行情况,试验采集湖北省不同地区2个规模化蛋鸡养殖场不同位置的空气、水线和饲料样品进行病原菌检测,并采用16S rDNA测序分析样品中的优势病原菌。结果显示:饲料样品中细菌总数符合《GB 13078—2017饲料... 为了解蛋鸡养殖场环境中病原菌流行情况,试验采集湖北省不同地区2个规模化蛋鸡养殖场不同位置的空气、水线和饲料样品进行病原菌检测,并采用16S rDNA测序分析样品中的优势病原菌。结果显示:饲料样品中细菌总数符合《GB 13078—2017饲料卫生标准》,而鸡舍风机附近空气及水线中细菌总数均较高;空气中优势病原菌是芽孢杆菌和葡萄球菌,饲料和水线优势菌为芽孢杆菌。结果表明,规模化蛋鸡养殖场饲料中的芽孢杆菌易污染水线和空气,风机附近是细菌污染重点区域,应定期消毒。 展开更多

关键词 规模化蛋鸡养殖场 环境监测 细菌总数 优势病原菌

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一株鸭疫里氏杆菌的分离、鉴定与生物学特性分析

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作者 王博焘 郭云清 +5 位作者 张腾飞 张文婷 卢琴 胡巧 罗青平 翟新国 《湖北农业科学》 2024年第9期156-160,166,共6页

为确定引起2022年湖北省襄阳市某规模化鸭场的鸭急性死亡病因,对病料进行病原菌分离、对分离株进行生化特性鉴定、耐药性测定、动物回归试验及全基因组测序。结果表明,急性死亡的鸭病原菌仅有鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer)分... 为确定引起2022年湖北省襄阳市某规模化鸭场的鸭急性死亡病因,对病料进行病原菌分离、对分离株进行生化特性鉴定、耐药性测定、动物回归试验及全基因组测序。结果表明,急性死亡的鸭病原菌仅有鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer)分离鉴定为阳性。药敏结果显示分离菌株对药物敏感性较高,仅对环丙沙星、氧氟沙星耐药;动物回归试验结果显示分离菌株可引起雏鸭急性死亡,剖检可见典型的浆膜炎症状。组织病理学切片显示心脏、肝脏被膜有明显纤维性渗出,心肌细胞有炎性浸润、脾脏实质内可见淋巴细胞数量明显减少、脑组织可见较多的血管淤血扩张。毒力测定显示分离菌株的半数致死量为3.06×106CFU/mL。 展开更多

关键词 鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer) 生化特性 回归试验 病理变化 毒力

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PCV与PEDV混合感染的实验室检测 被引量：2

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作者 杨克礼 陈文杰 +6 位作者 郭锐 周丹娜 袁芳艳 刘泽文 刘威 高婷 田永祥 《江西农业学报》 CAS 2022年第2期160-165,共6页

对采自湖北省内16家规模化养猪场的650份组织样品分别进行猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)和猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的病原学检测。结果表明:除PCV4未检出阳性外,PCV1、PCV2、PCV3、PEDV单一感染... 对采自湖北省内16家规模化养猪场的650份组织样品分别进行猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)和猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的病原学检测。结果表明:除PCV4未检出阳性外,PCV1、PCV2、PCV3、PEDV单一感染的样品阳性率分别为1.08%、4.15%、2.46%和6.46%;在双重感染中,以PEDV+PCV2的阳性率最高,达3.54%,其次为PCV2+PCV3,其阳性率为1.54%;在多重感染中,以PEDV+PCV2+PCV3的阳性率最高,为2.00%。虽然PEDV、PCV感染的阳性率较前期调查结果有所下降,但它们在湖北省内流行仍较广,且以混合感染为主。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 猪流行性腹泻病毒 混合感染 检测

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山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析 被引量：1

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作者 刘威 蒋鹏程 +7 位作者 杨克礼 袁芳艳 周丹娜 刘泽文 高婷 郭锐 孙裴 田永祥 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期35-40,共6页

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761... 旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 MCCG-0521 乳酸脱氢酶 密码子改造 二级结构

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猪瘟与猪圆环病毒混合感染的实验室检测 被引量：2

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作者 杨克礼 郭锐 +7 位作者 周丹娜 段正赢 袁芳艳 刘泽文 刘威 高婷 梁婉 田永祥 《现代畜牧兽医》 2020年第5期31-35,共5页

研究利用前期建立的猪瘟病毒野毒株荧光RT-PCR检测方法、猪圆环病毒多重PCR检测方法,对2019年3~10月采自湖北省内15家养猪场的480份组织样品分别进行CSFV、PCV病原学检测。结果显示,CSFV、PCV1、PCV2或PCV3单一感染的样品阳性率分别为0.... 研究利用前期建立的猪瘟病毒野毒株荧光RT-PCR检测方法、猪圆环病毒多重PCR检测方法,对2019年3~10月采自湖北省内15家养猪场的480份组织样品分别进行CSFV、PCV病原学检测。结果显示,CSFV、PCV1、PCV2或PCV3单一感染的样品阳性率分别为0.83%、0.42%、2.71%和1.04%;双重感染中CSFV+PCV1阳性率为0.21%,CSFV+PCV2阳性率为1.67%,CSFV+PCV3阳性率为0.83%,PCV1+PCV2阳性率为8.33%,PCV2+PCV3阳性率为19.38%,PCV3+PCV1阳性率为2.92%;多重感染中CSFV+PCV1+PCV2阳性率为0.21%,CSFV+PCV2+PCV3阳性率为0.63%,CSFV+PCV1+PCV3阳性率为0.00%,PCV1+PCV2+PCV3阳性率1.88%,CSFV+PCV1+PCV2+PCV3阳性率为0.83%。表明湖北省内CSFV、PCV流行较广,且多以混合感染方式流行,其中以PCV2+PCV3阳性率最高,达19.38%。兽医工作者今后应重点关注不同病原间的混合感染。 展开更多

关键词 猪瘟 猪圆环病毒 病原学 混合感染 实验室检测

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一株多重耐药产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性的研究 被引量：2

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作者 王宁宁 李晓月 +10 位作者 刘泽文 刘威 高婷 周丹娜 杨克礼 郭锐 梁婉 陈文杰 贝为成 田永祥 袁芳艳 《湖北农业科学》 2021年第24期160-163,共4页

湖北省某猪场新生仔猪发生以剧烈腹泻、排出黄色粪便并迅速脱水死亡为主要症状的疾病,对送检病料,通过细菌培养、革兰氏染色、PCR等方法进行鉴定,确定新生仔猪病是由产肠毒素大肠杆菌感染引起。药敏试验结果表明,该分离菌株对喹诺酮类... 湖北省某猪场新生仔猪发生以剧烈腹泻、排出黄色粪便并迅速脱水死亡为主要症状的疾病,对送检病料,通过细菌培养、革兰氏染色、PCR等方法进行鉴定,确定新生仔猪病是由产肠毒素大肠杆菌感染引起。药敏试验结果表明,该分离菌株对喹诺酮类、氨基糖苷类、头孢类等药物敏感;对青霉素类、四环素类、氯霉素类、磺胺类等药物耐药,主要是阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、四环素、多西环素、磺胺异恶唑等。 展开更多

关键词 大肠杆菌(Escherichia coli) 分离鉴定 药敏试验

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一株多重耐药猪链球菌的分离鉴定与生物学特性研究 被引量：1

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作者 裴嘉琪 李晓月 +10 位作者 刘泽文 高婷 刘威 杨克礼 郭锐 李畅 周丹娜 陈文杰 田永祥 贝为成 袁芳艳 《湖北农业科学》 2022年第S01期284-289,共6页

从湖北省某猪场分离到一株猪链球菌,通过细菌培养、革兰氏染色镜检、16S rRNA序列比对、荚膜多糖抗原血清分型等方法鉴定分离菌株为猪链球菌2型,命名为SS2-XY202021。分离菌株的毒力基因型为mrp-epf-sly+orf2+fbps+gapdh+89k+。药敏试... 从湖北省某猪场分离到一株猪链球菌,通过细菌培养、革兰氏染色镜检、16S rRNA序列比对、荚膜多糖抗原血清分型等方法鉴定分离菌株为猪链球菌2型,命名为SS2-XY202021。分离菌株的毒力基因型为mrp-epf-sly+orf2+fbps+gapdh+89k+。药敏试验结果表明,分离菌株对利福平敏感;对氟苯尼考、头孢噻肟中度敏感;对氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素、多西环素、青霉素G、红霉素、万古霉素、克林霉素、磺胺甲恶唑和利奈唑胺12种药物耐药。通过PCR扩增耐药基因,结果表明,分离菌株携带四环素类抗性基因tetO与大环内酯类抗性基因ermB、ermTR。 展开更多

关键词 猪链球菌 分离鉴定 药敏试验 耐药基因 毒力

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没食子酸抑制生物被膜机制的初步研究

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作者 梁桂星 张文婷 +5 位作者 汪最 张腾飞 郭云清 卢琴 罗青平 杨玉莹 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期35-42,共8页

鸡白痢沙门菌和金黄色葡萄球菌是危害家禽养殖业和公共卫生的重要病原菌,生物被膜的形成是其持续和反复感染的重要原因。为探究没食子酸对二者生物被膜形成的影响,本研究采用微量稀释法测定没食子酸对鸡白痢沙门菌CVCC519和金黄色葡萄球... 鸡白痢沙门菌和金黄色葡萄球菌是危害家禽养殖业和公共卫生的重要病原菌,生物被膜的形成是其持续和反复感染的重要原因。为探究没食子酸对二者生物被膜形成的影响,本研究采用微量稀释法测定没食子酸对鸡白痢沙门菌CVCC519和金黄色葡萄球菌ATCC 25923的最小抑菌浓度MIC、最小杀菌浓度MBC,共孵育测定最小生物被膜抑制浓度(MBIC)和最小生物被膜清除浓度(MBEC);采用结晶紫染色和硫酸-苯酚法分别测定其对试验菌生物被膜及胞外多糖(EPS)的抑制率,并利用环境扫描电镜观察生物被膜形态;最后采用qRT-PCR方法检测其对试验菌生物被膜形成相关基因表达量的影响。结果显示,没食子酸对CVCC519和ATCC 25923的MIC分别为4 mg/mL和8 mg/mL,MBC分别为8 mg/mL和16 mg/mL,MBIC均为8 mg/mL,MBEC均为16 mg/mL。此外,没食子酸在不显著影响试验菌生长的浓度下,能有效抑制其生物被膜形成和EPS的产生。环境扫描电镜观察发现,没食子酸处理使生物被膜生成量显著减少,结构松散、变薄。qRT-PCR检测结果显示,没食子酸在不显著影响试验菌生长的浓度下,能显著抑制CVCC519菌毛基因csgA、csgD,纤维素基因bcsA、adrA,群体感应系统相关基因luxS的表达,而对ATCC 25923的ica操纵子和luxS并无显著调控作用。以上结果表明,没食子酸在不显著影响鸡白痢沙门菌生长的浓度下,可通过下调其生物被膜形成相关基因的表达,减少胞外基质的合成,产生抗生物被膜的作用;也能通过ica非依赖途径有效抑制金黄色葡萄球菌胞外多糖的分泌和生物被膜的形成。本研究为没食子酸防控鸡白痢沙门菌和金黄色葡萄球菌生物被膜提供理论基础。 展开更多

关键词 没食子酸 生物被膜 鸡白痢沙门菌 金黄色葡萄球菌 机制

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鸭疫里默氏杆菌血清2型的分离鉴定及商品化疫苗免疫保护效果研究

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作者 张蓉蓉 汪最 +8 位作者 郭云清 李国红 程伊洛 卢琴 罗聪 张腾飞 张文婷 胡巧 罗青平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4273-4283,共11页

【目的】本研究拟对从发病雏鸭中分离获得的鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)进行生物学特性研究,并通过动物攻毒试验评估当前市售的3种鸭传染性浆膜炎商品化疫苗对新分离菌株的保护效果,以期为鸭传染性浆膜炎的防控提供参... 【目的】本研究拟对从发病雏鸭中分离获得的鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)进行生物学特性研究,并通过动物攻毒试验评估当前市售的3种鸭传染性浆膜炎商品化疫苗对新分离菌株的保护效果,以期为鸭传染性浆膜炎的防控提供参考。【方法】采集病死雏鸭肝脏、脑组织分离病原菌,通过形态学观察、16S rRNA基因PCR鉴定和测序、系统进化树构建、血清型分型等方法对分离菌株进行鉴定。通过分光光度法和平板计数法测定分离菌株生长曲线,利用纸片扩散法分析其药物敏感性,通过动物试验测定其半数致死量(LD_(50))和组织载菌量,最后通过攻毒试验评估3种商品化灭活疫苗对分离菌株的免疫保护效果。【结果】试验分离获得1株RA,其为血清2型。药敏试验结果显示,分离株对氨苄西林、头孢他啶和卡那霉素等10种药物均表现耐药,对阿莫西林、头孢噻肟、氟苯尼考和链霉素表现敏感。生长曲线测定结果显示,培养6~10 h,分离株进入对数生长期,培养8 h后活菌数可达到10^(9) CFU/mL;对雏鸭的LD_(50)为7.65×10^(4.7)CFU,雏鸭感染后心脏组织载菌量最高。3种商品化灭活疫苗免疫7日龄雏鸭后2周用分离菌株进行攻毒,结果显示,1+2+7型多价RA灭活疫苗保护效果最好,保护率可达70%,而另外2种疫苗保护率<50%。【结论】本研究分离获得1株多重耐药、高致病性血清2型RA,当前市售RA商品化疫苗对其免疫保护效果有限。研究结果为当前鸭传染性浆膜炎的防控提供理论依据。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 血清2型 生物学特性 商品化疫苗

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红斑丹毒丝菌蛋白间相互作用网络的构建与分析

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作者 吴雪军 董琦 +2 位作者 周彩琴 章晓炜 刘威 《湖北农业科学》 2025年第7期137-141,共5页

病原菌编码蛋白间的相互作用研究是理解其各项生命活动、揭示信号转导机制、预测潜在药物靶标的重要途径。旨在利用DIP蛋白互作数据库和同源蛋白映射方法,构建红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)编码蛋白间的相互作用网络。结... 病原菌编码蛋白间的相互作用研究是理解其各项生命活动、揭示信号转导机制、预测潜在药物靶标的重要途径。旨在利用DIP蛋白互作数据库和同源蛋白映射方法,构建红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)编码蛋白间的相互作用网络。结果表明,所构建的互作网络共包含2113对非冗余的相互作用关系,涉及330个蛋白,并绘制了互作网络的拓扑结构图。通过全基因组内蛋白之间的互作频率分析,确定了在红斑丹毒丝菌中互作频率最高的40个蛋白,这些蛋白主要与翻译、转录、分子伴侣等功能相关。伴侣蛋白DnaK、DnaJ、GroEL以及DEAD/DEAH解旋酶的互作频率较高,能与核糖体蛋白、代谢相关、伴侣蛋白、细胞分裂蛋白等多种功能蛋白发生相互作用。若DnaK、DnaJ、GroEL、DEAD/DEAH解旋酶的功能受到抑制,则会对红斑丹毒丝菌的正常生命活动造成较大的影响。 展开更多

关键词 红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae) 蛋白间相互作用 互作网络

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恩施黄连醇提液主要成分的测定及其抑菌机制的研究

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作者 白若男 郭云清 +7 位作者 张睿 张腾飞 张文婷 卢琴 胡巧 邵华斌 罗青平 郭利伟 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期86-91,共6页

为了测定产地湖北恩施黄连醇提液的生物碱含量,研究其抑菌机制,用高效液相色谱法对湖北恩施5年生黄连醇提液主要成分进行测定,并测定了黄连醇提液对大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌、禽多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度、生... 为了测定产地湖北恩施黄连醇提液的生物碱含量,研究其抑菌机制,用高效液相色谱法对湖北恩施5年生黄连醇提液主要成分进行测定,并测定了黄连醇提液对大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌、禽多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度、生长特性、胞外碱性磷酸酶含量、呼吸代谢相关酶类活性的影响。结果显示,醇提液主要成分为小檗碱、表小檗碱、巴马汀和黄连碱,含量分别为7.48%±0.27%、3.52%±0.12%、2.21%±0.07%、2.48%±0.08%,且黄连醇提液对大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、禽多杀性巴氏杆菌的MIC值分别为0.125、0.5、0.5、0.125 mg/mL。MIC浓度的黄连醇提液可以抑制细菌生长。黄连醇提液还可增加胞外碱性磷酸酶的含量,降低琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活性。湖北恩施5年生黄连醇提液含量均高于药典规定含量,且具有广谱抑菌活性,可通过破坏细菌膜的通透性、抑制呼吸系统代谢等发挥抑菌效应。 展开更多

关键词 黄连 醇提液 生物碱 高效液相色谱 抑菌机制

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猪肺炎支原体脂蛋白LppB介导纤毛黏附功能域的鉴定

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作者 叶利颖 刘威 +5 位作者 闫安 周丹娜 杨克礼 高婷 田永祥 宋淇淇 《动物医学进展》 北大核心 2025年第6期1-6,共6页

猪肺炎支原体(Mhp)主要引起地方性肺炎,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。LppB是猪肺炎支原体的毒力因子,与纤毛的黏附和呼吸道定植密切相关,然而其具体的功能域还未见报道。利用生物信息学方法,对LppB可能的串联重复区域、disorder... 猪肺炎支原体(Mhp)主要引起地方性肺炎,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。LppB是猪肺炎支原体的毒力因子,与纤毛的黏附和呼吸道定植密切相关,然而其具体的功能域还未见报道。利用生物信息学方法,对LppB可能的串联重复区域、disorder功能域、抗原表位和高级结构进行了预测;为了保留预测功能域的完整性,将LppB分成了3个截短片段,依次为ΔLppB 27-247、ΔLppB 248-424和ΔLppB 425-604;通过原核表达系统,表达3个截短片段,获得了表达的rΔLppB 27-247、rΔLppB 248-424和rΔLppB 425-604重组蛋白;借助纤毛黏附试验,测定了截短片段黏附纤毛的能力。结果显示,LppB黏附纤毛的功能域主要位于27-247 aa和425-604 aa区域。研究结果丰富了对猪肺炎支原体致病机制的理解。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 LppB 纤毛黏附 功能域

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鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用

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作者 张蓉蓉 潘爱銮 +6 位作者 吴娟 方兵兵 汪最 卢琴 张腾飞 温国元 罗青平 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5470-5478,共9页

【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核... 【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 非结构蛋白 亚细胞定位 IFN-β信号通路

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大肠埃希氏菌疫苗生产用菌种种子批的建立与鉴定

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作者 刘泽文 袁芳艳 +8 位作者 刘威 高婷 杨克礼 郭锐 李畅 吴琼 朱佳佳 田永祥 周丹娜 《动物医学进展》 北大核心 2024年第12期39-43,共5页

为了研制仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗,以大肠埃希氏菌生产菌种C83549(k88)第2代和C83644(k99)、C83710(987p)第3代基础种子作为原始种子,建立了用于仔猪大肠杆菌病疫苗生产的大肠埃希氏菌基础种子批,分别对种子批的F1、F5... 为了研制仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗,以大肠埃希氏菌生产菌种C83549(k88)第2代和C83644(k99)、C83710(987p)第3代基础种子作为原始种子,建立了用于仔猪大肠杆菌病疫苗生产的大肠埃希氏菌基础种子批,分别对种子批的F1、F5、F10、F13代进行了全面鉴定。结果表明,各代种子的培养特性、生化特性均符合大肠埃希氏菌特征,抗原结构分别为C83549(O149∶K88)、C83644(O68∶K99)和C83710(O9∶987P);各代次菌株的菌毛抗原RIHA单位≥800,菌种免疫原性鉴定合格;各菌株经口服途径灌服1.5×10^(10)CFU/头,可引起仔猪100%发病。因此,3个菌株均可用作仔猪大肠杆菌病三价(K88+K99+987P)灭活疫苗生产的菌种。 展开更多

关键词 大肠埃希氏菌 种子批 建立 鉴定

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A、B、J亚群禽白血病病毒混合感染的鉴定及gp85基因序列分析 被引量：5

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作者 窦俊峰 汪最 +5 位作者 李丽 卢琴 金鑫鑫 凌小淳 罗青平 翟新国 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期302-311,共10页

【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组... 【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组织接种DF-1细胞进行病毒分离,通过PCR、ELISA及间接免疫荧光试验(IFA)等方法进行亚群鉴定,进一步对分离株gp85基因的相似性和变异情况进行分析。【结果】剖检结果可见病死鸡肾脏、脾脏肿大,肺脏出血,表面可见灰白色肿瘤结节;组织匀浆接种DF-1细胞后,ELISA检测发现细胞上清P27抗原呈阳性;IFA检测发现,感染细胞里有特异性绿色荧光;PCR鉴定能同时扩增出A(692 bp)、B(847 bp)和J(545 bp)亚群的特异性条带。鉴定结果表明,从该病死鸡中分离到A、B和J亚群ALV毒株,分别命名为HBYC2022-A、HBYC2022-B和HBYC2022-J。分离株gp85基因核苷酸相似性分析显示,HBYC2022-A与江苏株JS-A1201相似性最高,为99.6%;HBYC2022-B与江苏株JS-B1204相似性最高,为99.7%;而HBYC2022-J与黑龙江株PK19FA01、广西株GX20YL12 J及安徽株AHaq02相似性均为100%。此外,分离株gp85基因高突变区域(hr1、hr2)氨基酸序列并未出现特殊点突变。【结论】鸡群存在A、B和J不同亚群ALV的混合感染情况,提示国内养禽场需提高警惕并加强针对ALV各亚群的流行病学调查。 展开更多

关键词 禽白血病病毒(ALV) 分离鉴定 混合感染 GP85基因 序列分析

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鸡滑液囊支原体的分离鉴定及药敏试验 被引量：3

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作者 殷梦玉 张腾飞 +4 位作者 张文婷 胡巧 卢琴 郭云清 罗青平 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期130-135,共6页

为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。... 为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。结果显示,病原分离鉴定结果仅滑液囊支原体阳性,镜检观察到典型的“煎蛋样”菌落;16S rRNA序列与已报道的滑液囊支原体的具有高度同源性;鸡胚感染试验显示,分离株导致鸡胚发育迟缓,胚体弱小,从弱小胚体内可再次分离出滑液囊支原体;药敏试验结果显示滑液囊支原体分离株对泰妙菌素、四环素和盐酸克林霉素敏感。结果表明,从产蛋下降的鸡群中成功分离到1株滑液囊支原体,为临床该病的防治提供了科学依据。 展开更多

关键词 鸡 滑液囊支原体 分离鉴定 药敏试验

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一株A型副鸡禽杆菌的分离与鉴定 被引量：1

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作者 殷梦玉 李枫 +6 位作者 郭云清 张腾飞 张文婷 胡巧 卢琴 翟新国 罗青平 《湖北农业科学》 2024年第11期134-140,共7页

对湖北省某规模化养鸡场中肿头肿脸病料进行病原菌分离,对分离菌株进行分子生物学、生化特性、血清型和耐药性鉴定,并测定了分离菌株基因组序列,通过动物回归试验验证菌株致病性。结果表明,从病料中分离出白色圆形、边缘光滑、半透明露... 对湖北省某规模化养鸡场中肿头肿脸病料进行病原菌分离,对分离菌株进行分子生物学、生化特性、血清型和耐药性鉴定,并测定了分离菌株基因组序列,通过动物回归试验验证菌株致病性。结果表明,从病料中分离出白色圆形、边缘光滑、半透明露珠样的菌落,革兰氏染色为阴性短杆菌,卫星试验中呈典型的“卫星”现象,分离菌株的16S rRNA与已报道的副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)高度同源,血清型鉴定为A型;药敏试验结果显示分离株对甲氧苄胺嘧啶、林可霉素和阿米卡星耐药,对强力霉素、大观霉素等多种抗生素敏感;动物回归试验显示,分离菌株引起雏鸡典型的肿头肿脸症状,病理切片显示菌株造成雏鸡的肺脏、肝脏以及脾脏出现明显的病变。分离株二代全基因组测序结果显示分离株有53个耐药基因和121个毒力基因。 展开更多

关键词 副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum) 生化特性 致病力 基因组

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超氧化物歧化酶在鸡白痢沙门氏菌耐受环丙沙星中的作用分析

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作者 李艳莉 程伊洛 +2 位作者 罗青平 杨玉莹 张腾飞 《中国家禽》 北大核心 2024年第12期76-84,共9页

为研究超氧化物歧化酶对鸡白痢沙门氏菌耐受环丙沙星的影响,试验利用λ-Red同源重组系统构建鸡白痢沙门氏菌C79-3的sod1、sod2、sod3和sod4的单基因缺失株和同为Cu/Zn家族的sod1与sod3、Fe/Mn家族的sod2与sod4的双基因缺失株及其互补株... 为研究超氧化物歧化酶对鸡白痢沙门氏菌耐受环丙沙星的影响,试验利用λ-Red同源重组系统构建鸡白痢沙门氏菌C79-3的sod1、sod2、sod3和sod4的单基因缺失株和同为Cu/Zn家族的sod1与sod3、Fe/Mn家族的sod2与sod4的双基因缺失株及其互补株,比较分析亲本株、基因缺失株与互补株的生长曲线、生物被膜形成能力、过氧化氢和抗生素耐受能力的差异。结果显示:6个基因缺失株与亲本株的生长曲线无明显差别,但双基因缺失株Δsod1Δsod3和Δsod2Δsod4生物被膜形成能力显著下降(P<0.05),在环丙沙星处理后活性氧产生量显著高于亲本株(P<0.05);与亲本株、4个单基因缺失株和双基因缺失株Δsod1Δsod3相比,双基因缺失株Δsod2Δsod4在过氧化氢环境中存活率显著降低(P<0.01),且在环丙沙星处理后,其耐受能力大幅下降。以上结果表明以Fe和Mn作为辅因子的铁锰超氧化物歧化酶Sod2和Sod4通过协同作用,在鸡白痢沙门氏菌对环丙沙星的耐受中发挥关键作用,为进一步研究鸡白痢沙门氏菌耐药机制奠定理论基础。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门氏菌 超氧化物歧化酶 过氧化氢耐受 环丙沙星耐受

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鸡白痢检测方法研究进展

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作者 张记高 程伊洛 +3 位作者 汪宏才 张腾飞 罗青平 翟新国 《中南农业科技》 2024年第11期230-233,共4页

鸡白痢是由鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum)感染导致的传染性疾病。种鸡鸡白痢净化是防控该病最主要的措施。通过对传统病原学、分子生物学及免疫学三类检测方法进行概述和比较,指出各种方法的优势及不足,创造性地提出了将不同方法... 鸡白痢是由鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum)感染导致的传染性疾病。种鸡鸡白痢净化是防控该病最主要的措施。通过对传统病原学、分子生物学及免疫学三类检测方法进行概述和比较,指出各种方法的优势及不足,创造性地提出了将不同方法进行联合应用的思路,旨在为建立准确、快速的检测方法,优化净化程序及养殖业持续健康发展提供帮助。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum) 净化 细菌学 免疫学 分子生物学 检测方法

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