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差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞外泌体提取中的应用对比观察
被引量:
12
1
作者
罗靖莹
贺宏丽
+2 位作者
郭阳
黄玮玮
黄晓波
《山东医药》
CAS
2019年第12期48-52,共5页
目的观察差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体提取中的应用,筛选外泌体最佳离心提取方法。方法取BMSCs培养48 h后收集细胞上清,平均分成A、B、C组,分别使用差速离心技术、密度梯度离心技术、超滤离心...
目的观察差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体提取中的应用,筛选外泌体最佳离心提取方法。方法取BMSCs培养48 h后收集细胞上清,平均分成A、B、C组,分别使用差速离心技术、密度梯度离心技术、超滤离心技术提取外泌体;记录各组外泌体提取时间;采用负染色技术观察各组外泌体形态;使用纳米颗粒跟踪分析仪测算各组外泌体浓度及大小;采用BCA法测定外泌体总蛋白浓度;采用Western blotting法检测各组外泌体表面标志蛋白CD9、CD63、Alix。将肺微血管内皮细胞(PMVECs)分成5组,EC组上室加入PMVECs及培养基; LPS组上室加入PMVECs及含LPS的培养基(构建内皮细胞损伤模型); A、B、C组上室加入方法同LPS组,下室分别加入A、B、C组外泌体;采用葡聚糖渗漏实验检测外泌体内皮细胞通透性(观察外泌体对内皮细胞的修复作用),以内皮细胞通透指数表示。结果 A、B、C组的外泌体的提取时间分别为(180±8)、(203±10)、(40±5) min,A、B组外泌体的提取时间与C组相比,P均<0. 05。各组外泌体均为大小不等的椭圆形或圆形的膜性结构,边界清晰,但仅A组外泌体可见到典型的杯状结构。A、B、C组的外泌体浓度分别为(4. 46±0. 38)×108/m L、(5. 11±0. 16)×108/m L、(2. 18±0. 17)×108/m L,A、B组与C组外泌体浓度相比,P均<0. 05。A、B、C组的外泌体大小均为20~100 nm。A、B组外泌体总蛋白浓度及CD63、Alix的相对表达量均显著高于C组(P均<0. 05)。A、B、C、LPS、EC组的内皮细胞通透指数分别为2. 17±0. 15、1. 77±0. 32、2. 37±0. 42、2. 93±0. 15、1. 00±0. 00,A、B、C、LPS组的内皮细胞通透指数与EC组相比,P均<0. 05; A、B组的内皮细胞通透指数与LPS组相比,P均<0. 05。结论密度梯度离心技术虽耗时较长,但提取的外泌体纯度、浓度较高,对内皮细胞的修复作用较强,可以作为科研和临床研究的首选外泌体离心提取方法。
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关键词
外泌体
外泌体提取方法
差速离心技术
密度梯度离心技术
超滤离心技术
间充质干细胞
骨髓间充质干细胞
肺微血管内皮细胞
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职称材料
卧床患者静脉血栓栓塞风险的评估与预防现状
2
作者
刘佳
温贤秀
雷花
《当代护士(下旬刊)》
2021年第12期29-32,共4页
本文综述了卧床患者静脉血栓栓塞症的风险评估工具和预防措施,旨在减轻患者痛苦,提高护理质量,为节约医疗卫生资源提供文献依据。
关键词
卧床患者
静脉血栓栓塞
评估
预防
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职称材料
题名
差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞外泌体提取中的应用对比观察
被引量:
12
1
作者
罗靖莹
贺宏丽
郭阳
黄玮玮
黄晓波
机构
电子科技大学附属医院/四川省人民医院
出处
《山东医药》
CAS
2019年第12期48-52,共5页
基金
四川省医学科学院.四川省人民医院青年博士基金(2015BS07)
文摘
目的观察差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体提取中的应用,筛选外泌体最佳离心提取方法。方法取BMSCs培养48 h后收集细胞上清,平均分成A、B、C组,分别使用差速离心技术、密度梯度离心技术、超滤离心技术提取外泌体;记录各组外泌体提取时间;采用负染色技术观察各组外泌体形态;使用纳米颗粒跟踪分析仪测算各组外泌体浓度及大小;采用BCA法测定外泌体总蛋白浓度;采用Western blotting法检测各组外泌体表面标志蛋白CD9、CD63、Alix。将肺微血管内皮细胞(PMVECs)分成5组,EC组上室加入PMVECs及培养基; LPS组上室加入PMVECs及含LPS的培养基(构建内皮细胞损伤模型); A、B、C组上室加入方法同LPS组,下室分别加入A、B、C组外泌体;采用葡聚糖渗漏实验检测外泌体内皮细胞通透性(观察外泌体对内皮细胞的修复作用),以内皮细胞通透指数表示。结果 A、B、C组的外泌体的提取时间分别为(180±8)、(203±10)、(40±5) min,A、B组外泌体的提取时间与C组相比,P均<0. 05。各组外泌体均为大小不等的椭圆形或圆形的膜性结构,边界清晰,但仅A组外泌体可见到典型的杯状结构。A、B、C组的外泌体浓度分别为(4. 46±0. 38)×108/m L、(5. 11±0. 16)×108/m L、(2. 18±0. 17)×108/m L,A、B组与C组外泌体浓度相比,P均<0. 05。A、B、C组的外泌体大小均为20~100 nm。A、B组外泌体总蛋白浓度及CD63、Alix的相对表达量均显著高于C组(P均<0. 05)。A、B、C、LPS、EC组的内皮细胞通透指数分别为2. 17±0. 15、1. 77±0. 32、2. 37±0. 42、2. 93±0. 15、1. 00±0. 00,A、B、C、LPS组的内皮细胞通透指数与EC组相比,P均<0. 05; A、B组的内皮细胞通透指数与LPS组相比,P均<0. 05。结论密度梯度离心技术虽耗时较长,但提取的外泌体纯度、浓度较高,对内皮细胞的修复作用较强,可以作为科研和临床研究的首选外泌体离心提取方法。
关键词
外泌体
外泌体提取方法
差速离心技术
密度梯度离心技术
超滤离心技术
间充质干细胞
骨髓间充质干细胞
肺微血管内皮细胞
Keywords
exosomes
exosomes extracted method
differential centrifugation
density gradient centrifugation
ultrafiltration centrifugation
mesenchymal stem cells
bone marrow mesenchymal stem cells
pulmonary microvascular endothelial cells
分类号
R33 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
卧床患者静脉血栓栓塞风险的评估与预防现状
2
作者
刘佳
温贤秀
雷花
机构
电子科技大学
医学院绵阳市中心
医院
血管外科
电子科技大学附属医院/四川省人民医院
出处
《当代护士(下旬刊)》
2021年第12期29-32,共4页
文摘
本文综述了卧床患者静脉血栓栓塞症的风险评估工具和预防措施,旨在减轻患者痛苦,提高护理质量,为节约医疗卫生资源提供文献依据。
关键词
卧床患者
静脉血栓栓塞
评估
预防
分类号
R473.5 [医药卫生—护理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞外泌体提取中的应用对比观察
罗靖莹
贺宏丽
郭阳
黄玮玮
黄晓波
《山东医药》
CAS
2019
12
在线阅读
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职称材料
2
卧床患者静脉血栓栓塞风险的评估与预防现状
刘佳
温贤秀
雷花
《当代护士(下旬刊)》
2021
0
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职称材料
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