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嗜肺军团菌抑制小鼠巨噬细胞内体溶酶体融合的机制探讨
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作者 陈民佳 曹秀琴 +2 位作者 贺瑞霞 陈海霞 杨志伟 《解放军医学杂志》 北大核心 2025年第2期176-187,共12页
目的探究嗜肺军团菌感染抑制小鼠巨噬细胞内体溶酶体融合的相关致病机制。方法将12只C57BL/6J小鼠随机分为对照组与嗜肺军团菌感染组(n=6),麻醉后经鼻分别滴入相同体积的生理盐水或嗜肺军团菌液;连续3 d记录体重变化,取出整肺观察其伤情... 目的探究嗜肺军团菌感染抑制小鼠巨噬细胞内体溶酶体融合的相关致病机制。方法将12只C57BL/6J小鼠随机分为对照组与嗜肺军团菌感染组(n=6),麻醉后经鼻分别滴入相同体积的生理盐水或嗜肺军团菌液;连续3 d记录体重变化,取出整肺观察其伤情,HE和免疫组化染色观察小鼠肺组织病理特征;转录组测序分析肺组织中的差异表达基因(DEGs)和相关信号通路。提取小鼠骨髓巨噬细胞(BMDMs),与嗜肺军团菌共培养,采用免疫荧光染色鉴定感染情况,转录组测序分析感染前后的DEGs和富集的相关信号通路。筛选感染后共同参与信号通路的核心基因,用RT-qPCR验证核心基因mRNA表达水平在体内外的一致性,Western blotting检测相关蛋白的表达情况,细菌繁殖实验检测嗜肺军团菌在细胞内的繁殖情况。结果与对照组比较,感染后2 d、3 d,嗜肺军团菌感染组小鼠体重明显下降(P<0.001),左右肺组织水肿并呈红色肝样变,病变区域由肺门向肺周边蔓延;HE染色显示嗜肺军团菌感染组小鼠肺泡腔炎性细胞浸润增多、肺泡间隔增厚、纤维蛋白渗出增多;免疫组化检测结果显示,嗜肺军团菌感染组小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)阳性面积百分比明显增高(P<0.001);转录组测序共筛选出DEGs 2550个,其中上调基因1444个,下调基因1106个;KEGG富集分析显示,富集通路主要涉及肿瘤坏死因子、类风湿关节炎、Rap1、PI3K-Ak和吞噬体通路等。免疫荧光检测结果显示,嗜肺军团菌在体外小鼠BMDMs内增殖;转录组测序筛选出DEGs 2550个,其中上调基因1677个,下调基因873个;KEGG富集分析显示,富集通路涉及癌症中的转录失调、PI3K-Akt和吞噬体通路等。筛选出富集在吞噬反应集群中的DEGs,得到小鼠肺组织和BMDMs重叠的微管蛋白β1(Tubb1)等13个核心基因。RT-qPCR检测结果显示,小鼠肺组织和BMDMs感染嗜肺军团菌后,Tubb1表达水平均明显降低(P<0.001);Western blotting检测结果显示,Rab7、Tubb1、LAMP2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和MPO表达水平明显增高(P<0.05)。胞内增殖实验结果显示,随着感染时间增加,BMDMs中的嗜肺军团菌逐渐增多。结论嗜肺军团菌感染小鼠巨噬细胞的可能机制是下调Rab7/Tubb1/LAMP2,抑制内体溶酶体的融合。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 微管蛋白β1 内体溶酶体融合 转录组测序 巨噬细胞
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嗜肺军团菌重组MOMP蛋白间接ELISA方法的建立及其在血清学诊断中的应用 被引量:3
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作者 王涛 张彩霞 +1 位作者 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1322-1326,共5页
目的表达及纯化出嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)作为诊断抗原,研究其在嗜肺军团菌感染血清学诊断中的实用价值。方法将已成功构建的重组质粒pET-momp转化到大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞中,诱导重组MOMP表达,运用SDS-PAGE和亲和层析法... 目的表达及纯化出嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)作为诊断抗原,研究其在嗜肺军团菌感染血清学诊断中的实用价值。方法将已成功构建的重组质粒pET-momp转化到大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞中,诱导重组MOMP表达,运用SDS-PAGE和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG、IgM、IgA的ELISA试剂盒筛选出58份阳性血清和32份阴性血清,用纯化的MOMP蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA,同时与R&D公司军团菌的IgG、IgM、IgA ELISA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后用受试者工作特征(ROC)曲线对这2种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及检测结果的一致性,来评价重组MOMP间接ELISA的应用价值。结果成功诱导表达并纯化出相对分子质量(M r)大约为45 000的重组MOMP蛋白。重组MOMP建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与R&D公司的ELISA试剂盒进行比较,IgG抗体灵敏度90.9%,特异度91.7%,一致性Kappa值0.784(P<0.05),ROC曲线下的面积0.913;IgM抗体灵敏度91.4%,特异度90.6%,一致性Kappa值0.809(P<0.05),ROC曲线下的面积为0.910;IgA抗体灵敏度92.1%,特异度88.9%,一致性Kappa值0.793(P<0.05),ROC曲线下的面积0.905。结论成功诱导表达及纯化出重组MOMP蛋白,将其作为诊断抗原所建立的间接ELISA表现出了较好的特异性,灵敏度和一致性,为军团病的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 表达 重组蛋白MOMP ELISA
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上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能 被引量:4
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作者 郑修军 王琦 +1 位作者 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1022-1026,共5页
目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表... 目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/m L。巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关。巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关。结论调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能。 展开更多
关键词 FcγRⅡB 慢病毒诱导表达载体 抑制性受体 巨噬细胞 吞噬和趋化
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嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用 被引量:3
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作者 刘黎 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期577-580,共4页
目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG/I... 目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG/IgM/IgA的ELISA检测试剂盒筛出40份阳性血清和30份阴性血清,用纯化的MIP蛋白建立间接ELISA,同时与R&D的ELISA IgG、IgM、IgA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后对这两种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性,来评价该方法的应用价值。结果诱导相对分子质量(Mr)大约40 000的MIP融合蛋白在E.coli BL21中表达并纯化。纯化蛋白建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与国外ELISA试剂盒(R&D)进行比较,IgG抗体的灵敏度88.5%,特异度95.5%,一致性Kappa值0.846(P<0.05),ROC曲线下面积0.927。IgM抗体的灵敏度89.3%,特异度97.6%,一致性Kappa值0.88(P<0.05),ROC曲线下面积0.947。IgA抗体的灵敏度90%,特异度95.2%,一致性Kappa值0.856(P<0.05),ROC曲线下面积0.931。结论成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化,运用MIP作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 巨噬细胞感染增强蛋白 蛋白表达 血清学诊断
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人可溶型FcγRIIb的制备及其功能初步研究 被引量:3
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作者 张雷 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期952-955,共4页
目的:检测正常人和SLE患者血清中可溶型FcγRIIb(husFcγRIIb)含量,诱导表达并纯化人可溶性FcγRIIb,检测其与血清中免疫复合物结合力及对B细胞抗体分泌功能的影响。方法:ELISA法检测人血清中可溶型FcγRIIb含量,IPTG诱导含有pET-sFcγR... 目的:检测正常人和SLE患者血清中可溶型FcγRIIb(husFcγRIIb)含量,诱导表达并纯化人可溶性FcγRIIb,检测其与血清中免疫复合物结合力及对B细胞抗体分泌功能的影响。方法:ELISA法检测人血清中可溶型FcγRIIb含量,IPTG诱导含有pET-sFcγRIIb的大肠杆菌BL21,镍琼脂糖磁珠纯化目的蛋白,可溶型FcγRIIb包被ELISA板,ELISA方法检测其与血清中免疫复合物结合能力,免疫磁珠法分选B细胞,分组刺激培养,ELISA检测培养物上清中IgM含量。结果:SLE患者血清中可溶型FcγRIIb浓度低于正常人(P<0.05);诱导表达并纯化获得相对分子质量(Mr)为41 500的重组蛋白;重组可溶型FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,二者孵育后吸光度(A)值随血清中免疫复合物浓度逐渐增高,至受体结合度饱和时达最大;不同刺激条件下B细胞培养10 d,各实验组抗体浓度均高于细胞对照组(P<0.01),SPA组、SPA+husFcγRIIb组抗体浓度无显著差异(P﹥0.05),SPA+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显高于SPA组(P<0.01),SPA+husFcγRIIb+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显低于SPA+IgG型抗人IgM组(P<0.01)、SPA组(P<0.01)和SPA+husFcγRIIb组(P<0.01)。结论:SLE患者血清中可溶性FcγRIIb含量低于正常人,重组人可溶性FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,抑制免疫复合物对B淋巴细胞的激活,减少IgM型抗体的分泌。 展开更多
关键词 FCΓRIIB 可溶性 结合力 抗体分泌
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变应性鼻炎IgE高亲和力可溶型Fc段受体1α(sFcε1α)蛋白的制备及血清中相应抗体的检测 被引量:2
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作者 邢慧慧 邵辉 +1 位作者 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期650-654,共5页
目的构建人可溶型Fc段受体1α(s FcεR1α)的原核表达载体,诱导表达并纯化重组FcεR1α胞外区段蛋白,检测其与血清中Ig E的结合力及相应抗体的含量。方法应用巢式PCR技术获得人FcεR1α胞外区段基因,构建原核表达载体p ETs Fcε1α,最... 目的构建人可溶型Fc段受体1α(s FcεR1α)的原核表达载体,诱导表达并纯化重组FcεR1α胞外区段蛋白,检测其与血清中Ig E的结合力及相应抗体的含量。方法应用巢式PCR技术获得人FcεR1α胞外区段基因,构建原核表达载体p ETs Fcε1α,最佳诱导条件表达出s FcεR1α,采用亚胺二乙酸His标签纯化树脂纯化并进行Western blot法鉴定。ELISA检测人s FcεR1α与血清中Ig E的结合力及血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E及抗FcεR1α自身抗体的含量。结果扩增出人FcεR1α胞外区段基因,大小为600 bp左右。p ET-s FcεR1α经PCR、双酶切、测序鉴定正确。诱导表达、纯化出人s FcεR1α,相对分子质量(Mr)大小约为42 000。Western blot法鉴定为人s FcεR1α。人s FcεR1α可以与人血清中Ig E结合。变应性鼻炎(AR)患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。结论获得人s FcεR1α,s FcεR1α与人血清中Ig E有较强的结合力,AR患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。 展开更多
关键词 IG E高亲和力Fc段受体1α(FcεR1α) 可溶型 结合力 自身抗体
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嗜肺军团菌MOMP通过激活NOD2/RIP2信号通路抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能并增强其趋化能力 被引量:4
7
作者 甄庆洁 曹秀琴 +1 位作者 卢敬敬 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期488-494,共7页
目的探讨嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)对RAW264. 7巨噬细胞吞噬功能和趋化功能的影响并探讨其机制。方法采用MOMP与RAW264. 7巨噬细胞进行体外共培养,用CCK-8法检测MOMP对RAW264. 7巨噬细胞的毒性,确定半数抑制浓度(IC50)。采用(1. 14... 目的探讨嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)对RAW264. 7巨噬细胞吞噬功能和趋化功能的影响并探讨其机制。方法采用MOMP与RAW264. 7巨噬细胞进行体外共培养,用CCK-8法检测MOMP对RAW264. 7巨噬细胞的毒性,确定半数抑制浓度(IC50)。采用(1. 14、0. 57、0. 28)μg/m L MOMP分别处理RAW264. 7巨噬细胞,并设细胞对照组。RAW264. 7巨噬细胞处理24、48、72 h,收集细胞和培养上清,用中性红吞噬实验检测巨噬细胞的吞噬功能;用TranswellTM小室检测巨噬细胞的趋化功能; ELISA检测细胞培养上清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和白细胞介素10(IL-10)的含量;实时定量PCR检测巨噬细胞核苷酸结合寡聚结构域1(NOD1)、NOD2、受体相互作用蛋白2(RIP2) mRNA水平,Western blot法检测NOD1、NOD2、RIP2的蛋白水平。结果 CCK-8法检测MOMP对RAW264. 7巨噬细胞的IC_(50)为5. 69μg/m L;与对照细胞相比,MOMP处理引起RAW264. 7巨噬细胞吞噬功能降低且呈剂量和时间依赖性;随着MOMP剂量的增加,巨噬细胞的趋化能力及细胞培养上清中MCP-1、IL-10的分泌水平增加,并在36 h达到峰值; NOD2、RIP2的mRNA和蛋白表达水平也增加,NOD2和RIP2的mRNA水平在12 h达到高峰,蛋白水平在24 h达到峰值。结论 MOMP抑制RAW264. 7巨噬细胞的吞噬功能并增强其趋化功能,与激活NOD2/RIP2信号通路有关。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 主要外膜蛋白(MOMP) 巨噬细胞 吞噬功能 趋化功能 NOD样受体(NLR)
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嗜肺军团菌激活Nrf2-Keap1通路抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞自噬 被引量:4
8
作者 盛琳琳 曹秀琴 +2 位作者 甄庆洁 杨晓辰 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期878-885,共8页
目的观察嗜肺军团菌(LP)对RAW264.7巨噬细胞自噬流及其自噬相关因子表达水平的影响并探讨其作用机制.方法活的LP和灭活的LP[感染复数(MOI)=10,50,100]分别处理RAW264.7巨噬细胞1、2、3h,通过筛选得出MOI=50,处理2h为其最佳作用条件.用... 目的观察嗜肺军团菌(LP)对RAW264.7巨噬细胞自噬流及其自噬相关因子表达水平的影响并探讨其作用机制.方法活的LP和灭活的LP[感染复数(MOI)=10,50,100]分别处理RAW264.7巨噬细胞1、2、3h,通过筛选得出MOI=50,处理2h为其最佳作用条件.用雷帕霉素(RAPA)处理RAW264.7巨噬细胞12 h后,再加入活的和灭活的LP共培养2 h,并设正常对照组、RAPA处理组、活LP组、RAPA处理的活LP组、灭活LP组和RAPA处理的灭活LP组.用携带双荧光标记蛋白基因和微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)基因的真核过表达质粒pmCherry-C1-EGFP-LC3B转染巨噬细胞,监测巨噬细胞自噬流的变化;用基因芯片在处理的最佳时间点筛选出LP影响巨噬细胞自噬的相关因子溶酶体/内体膜跨膜蛋白封闭蛋白(CLN3)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、G蛋白信号传导调节蛋白19(RGSI9)、肿瘤坏死因子(TNF)、组织蛋白酶B(CTSB)、GABAA型受体相关蛋白类似物2(GABARAP12)、P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3);实时荧光定量PCR验证基因芯片结果并检测相关信号通路因子核因子E2相关因子2(Nrf2)、beclin1和Kelch样环氧氯丙烧相关蛋白1(Keapl)的mRNA水平;Western blot法验证基因芯片结果并检测Nrf2、beclinl和Keapl的蛋白水平.结果与对照组相比,活LP组和灭活LP组的自噬流受到抑制;与RAPA处理组相比,活LP组和灭活LP组自噬流受到抑制.基因芯片检测显示活LP组和灭活LP组LC3的表达下调,Pb2的表达上调.实时定量PCR、Western blot验证结果与基因芯片一致.Keap1、beclin1的mRNA和蛋白水平明显下降,Nrf2 mRNA和蛋白的水平明显增加.结论LP可抑制巨噬细胞自噬,可能与激活Nrf2-Keapl信号通路有关. 展开更多
关键词 嗜肺军团菌(LP) 巨噬细胞 自噬 抑制作用
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含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达 被引量:2
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作者 刘慧宇 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期561-564,568,共5页
目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导... 目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表达病毒滴度达106TU/mL,可诱导病毒滴度达105TU/mL,感染性良好。HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关。结论成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达。 展开更多
关键词 FcγRⅡB 慢病毒诱导表达载体 调控表达
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上调小鼠骨髓来源树突状细胞FcγRⅡb表达可抑制其抗原提呈功能 被引量:2
10
作者 孙卉 马海峰 +1 位作者 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期664-667,671,共5页
目的构建FcγRⅡb慢病毒载体,感染小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),观察BMDC抗原提呈功能变化。方法小鼠骨髓细胞中提取RNA,反转录后进行PCR扩增得到FcγRⅡb目的基因,将FcγRⅡb基因插入慢病毒表达载体TRE中构建FcγRⅡb重组慢病毒载体。... 目的构建FcγRⅡb慢病毒载体,感染小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),观察BMDC抗原提呈功能变化。方法小鼠骨髓细胞中提取RNA,反转录后进行PCR扩增得到FcγRⅡb目的基因,将FcγRⅡb基因插入慢病毒表达载体TRE中构建FcγRⅡb重组慢病毒载体。HEK293T细胞包装慢病毒,体外进行小鼠BMDC的诱导培养及鉴定。将慢病毒感染BMDC后,实时定量PCR检测BMDC中FcγRⅡb mRNA水平,Western blot法检测BMDC中FcγRⅡb蛋白水平,流式细胞术分析BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的变化。结果成功构建FcγRⅡb重组慢病毒载体,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定成功。体外诱导培养BMDC,可见细胞表面大量树枝样突起形成。包装慢病毒感染BMDC后,FcγRⅡb mRNA和蛋白水平均较未感染BMDC增高。流式细胞术分析感染后BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHC II的表达量均较未感染BMDC下降。结论DC上FcγRⅡb的过表达能够下调其抗原提呈功能。 展开更多
关键词 FcγRⅡb 慢病毒 树突状细胞
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嗜肺军团菌mip基因联合疫苗诱导的小鼠免疫应答 被引量:1
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作者 吴静 惠英华 +1 位作者 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期45-47,共3页
军团病主要由嗜肺军团菌引起,嗜肺军团菌共有15个血清型,其中血清1型在人军团菌病中最常见,约占80%[1],可引起严重肺炎[2]。军团菌污染的水源通过加湿器、喷雾器、淋浴器、水龙头等载体形成气溶胶。人体吸人气溶胶后引起军团菌感染... 军团病主要由嗜肺军团菌引起,嗜肺军团菌共有15个血清型,其中血清1型在人军团菌病中最常见,约占80%[1],可引起严重肺炎[2]。军团菌污染的水源通过加湿器、喷雾器、淋浴器、水龙头等载体形成气溶胶。人体吸人气溶胶后引起军团菌感染[3-4]。随着人们生活水平的提高,人工冷热水系统、空调等现代化设施进入千家万户,军团菌爆发的机率也随之增大。因此军团菌的预防显得尤为重要。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 MIP蛋白 DNA疫苗 DNA初次免疫-蛋白加强免疫
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化疗可增加肺鳞状细胞癌患者外周血中FcγRⅡB含量 被引量:1
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作者 卢敬敬 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期220-224,共5页
目的检测肺鳞状细胞癌患者化疗前后外周血单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB表达水平、血清中可溶性FcγRⅡB(s FcγRⅡB)及其抗体的含量。方法免疫荧光技术检测鳞状细胞癌患者化疗前后单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB的表达和定位、实时定... 目的检测肺鳞状细胞癌患者化疗前后外周血单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB表达水平、血清中可溶性FcγRⅡB(s FcγRⅡB)及其抗体的含量。方法免疫荧光技术检测鳞状细胞癌患者化疗前后单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB的表达和定位、实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA水平,Western blot法检测s FcγRⅡB蛋白水平;ELISA检测鳞状细胞癌患者化疗前后、健康人血清中s FcγRⅡB总量、与Ig G结合的s FcγRⅡB(s FcγRⅡB-Ig G)、抗FcγRⅡB自身抗体的含量变化。结果与健康人相比,鳞状细胞癌患者化疗前单核细胞和B细胞FcγRⅡB的水平、s FcγRⅡB总量及抗FcγRⅡB自身抗体的含量明显降低,化疗后高于化疗前;s FcγRⅡB-Ig G含量高于健康人,化疗后低于化疗前。结论鳞状细胞癌患者FcγRⅡB含量减少,化疗后FcγRⅡB表达有所增加。 展开更多
关键词 鳞状细胞癌 FcγRⅡB B细胞 单核细胞
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂tubastatin A促进嗜肺军团菌感染RAW264.7细胞自噬的机制 被引量:1
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作者 杨晓辰 曹秀琴 +1 位作者 盛琳琳 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期693-701,共9页
目的探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用及机制。方法采用(10、5、2.5)μmol/L tubastatin A(TubA)处理RAW264.7巨噬细胞,CCK-8法检测RAW264.7巨噬细胞的增殖活性确定TubA的半数抑制浓度(IC50)。建立嗜... 目的探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用及机制。方法采用(10、5、2.5)μmol/L tubastatin A(TubA)处理RAW264.7巨噬细胞,CCK-8法检测RAW264.7巨噬细胞的增殖活性确定TubA的半数抑制浓度(IC50)。建立嗜肺军团菌感染RAW264.7巨噬细胞感染模型,实验分为无TubA组(每组设细胞对照组、灭活菌组、活菌组),(10、5、2.5)μmol/L TubA处理组(每组均设细胞对照组、灭活菌组、活菌组)。嗜肺军团菌感染6、12、24、48 h,收集各组细胞。细菌增殖实验检测嗜肺军团菌在RAW264.7巨噬细胞内增殖的情况;pmCherry-C1-EGFP-LC3B质粒转染RAW264.7小鼠巨噬细胞检测各组内自噬流变化;实时定量PCR和Western blot法检测组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、α微管蛋白(α-tubulin)、含缬酪肽蛋白(p97/VCP)、热休克蛋白90(HSP90)、HSP70、热休克转录因子1(HSF1)和纤维型肌动蛋白(F-actin)的mRNA及蛋白表达水平。结果TubA的IC50为50μmol/L。与RAW264.7细胞正常对照组相比,加入TubA后,嗜肺军团菌在小鼠巨噬细胞内增殖明显减少。在无HDAC6抑制剂组中,与正常对照组相比,活菌组比灭活菌组对自噬流的抑制作用更强。在HDAC6抑制剂TubA组中,活菌组的绿色荧光亮点均减少,自噬流增加。嗜肺军团菌的灭活菌和活菌分别作用于RAW264.7巨噬细胞6、12、24、48 h,与正常对照RAW264.7细胞相比,TubA嗜肺军团菌干扰组HDAC6、α-tubulin、p97/VCP、P62 mRNA和蛋白表达均降低。结论嗜肺军团菌干扰RAW264.7巨噬细胞自噬与HDAC6/P62/LC3B和HDAC6/p97/HSF1信号通路有关。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6) Tubastatin A(TubA)
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