生物转化液下游预处理工艺开发 被引量：1

1

作者 许贤恩 王仁凤 王亚军 《发酵科技通讯》 CAS 2014年第3期11-15,共5页

生物转化液中大量菌体细胞、蛋白、细胞碎片的存在导致产物回收困难,本文考察了运用混凝技术、破乳技术去除转化液中的菌体及蛋白质的可行性。实验结果揭示,添加铝盐、铁盐及其高聚物有助于去除转化液中的菌体及蛋白质;对于已发生乳化... 生物转化液中大量菌体细胞、蛋白、细胞碎片的存在导致产物回收困难,本文考察了运用混凝技术、破乳技术去除转化液中的菌体及蛋白质的可行性。实验结果揭示,添加铝盐、铁盐及其高聚物有助于去除转化液中的菌体及蛋白质;对于已发生乳化现象的转化液,则需要添加少量表面活性剂如十二烷基硫酸钠后再进行混凝处理。处理过的生物转化液,蛋白质、菌体去除率接近100%,方便后续产物回收。工作为工业生物催化过程下游产品回收提供借鉴。 展开更多

关键词 生物转化液 乳化 混凝 破乳

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硫模块启动子对提高L-甲硫氨酸的生物合成的影响及发酵培养条件的优化 被引量：2

2

作者 金利群 金伟熔 柳志强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期8-16,共9页

研究生物合成硫模块对L-甲硫氨酸产量的影响并优化了发酵条件。利用实验室构建的重组菌株,用trc启动子替换基因组上cysK的组成型启动子,在质粒pA*H上插入glpE和nrdH基因;通过构建PG3启动子文库,获得转录强度最高的p32启动子,进一步优化... 研究生物合成硫模块对L-甲硫氨酸产量的影响并优化了发酵条件。利用实验室构建的重组菌株,用trc启动子替换基因组上cysK的组成型启动子,在质粒pA*H上插入glpE和nrdH基因;通过构建PG3启动子文库,获得转录强度最高的p32启动子,进一步优化硫模块,最后通过对培养基的优化提高了硫代硫酸盐的供给,从而提高L-甲硫氨酸产量。结果表明:使用构建得到的E.coli W3110 JAHFEBL trc-cysK/pA*H-p32-nrdH-glpE菌株,发酵48 h后L-甲硫氨酸摇瓶水平产量达到1.3 g/L,较对照组提升了41.5%;通过对培养基的进一步优化,L-甲硫氨酸产量最终达到2.3 g/L,相比未优化的发酵水平提高了77.0%,且该研究为其他含硫氨基酸的生物合成提供了基础。 展开更多

关键词 L-甲硫氨酸 启动子优化 硫同化模块 生物合成 硫代硫酸盐

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转氨酶的固定化及酶学性质研究 被引量：3

3

作者 董正伟 朱芳莹 +2 位作者 朱文渊 田宋奎 柳志强 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第2期81-87,共7页

利用环氧树脂载体进行固定化转氨酶的研究,通过单因素优化确定了较优的酶固定化条件:ES-103b树脂载体、转氨酶和辅酶磷酸吡哆醛最佳质量比为50∶6∶5,在p H为7.0的1mol/L磷酸钾缓冲液介质中吸附25 h。将得到的固定化颗粒重新置于pH为9.0... 利用环氧树脂载体进行固定化转氨酶的研究,通过单因素优化确定了较优的酶固定化条件:ES-103b树脂载体、转氨酶和辅酶磷酸吡哆醛最佳质量比为50∶6∶5,在p H为7.0的1mol/L磷酸钾缓冲液介质中吸附25 h。将得到的固定化颗粒重新置于pH为9.0的100 mmol/L磷酸钾缓冲液中,30℃保温30 h。取出后置于pH为8.5的3 mol/L甘氨酸-NaOH缓冲液中,25℃保温12 h,制得固定化转氨酶,其比活力为52.7 U/g(湿载体),酶活回收率达到49.3%。酶学性质研究表明:固定化转氨酶催化反应最适pH、温度分别为7.0、50℃;固定化酶热稳定性及p H稳定性明显提高,50℃条件下的半衰期为20.2 d;在pH 8.0的三乙醇胺缓冲液中(4℃),10 d后酶活仍保持初始酶活的82.3%。 展开更多

关键词 转氨酶 固定化 磷酸吡哆醛 比酶活 酶学性质

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阿卡波糖结构类似物组分A形成机制研究及其制备 被引量：3

4

作者 黄剑川 王超儿 王亚军 《发酵科技通讯》 CAS 2014年第4期1-6,共6页

本文初步探究了阿卡波糖结构类似物组分A的形成机制,并首次尝试制备克级样品。实验数据揭示,阿卡波糖异构化是组分A形成的原因,该过程不依赖菌丝体的参与。建立了利用阿卡波糖异构化反应合成组分A的方法,在60°C、pH 11条件下反应3... 本文初步探究了阿卡波糖结构类似物组分A的形成机制,并首次尝试制备克级样品。实验数据揭示,阿卡波糖异构化是组分A形成的原因,该过程不依赖菌丝体的参与。建立了利用阿卡波糖异构化反应合成组分A的方法,在60°C、pH 11条件下反应3 h,组分A得率最高(33.6%)。利用强酸型阳离子交换层析和中性氧化铝层析,从阿卡波糖异构化反应液中制备到纯度达95.4%(w/w)的组分A,为后续系统研究发酵液中杂质组分A的分离去除提供材料。 展开更多

关键词 阿卡波糖 异构化反应 纯化 层析

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模拟移动床色谱技术分离果糖研究进展 被引量：8

5

作者 姜夏伟 王亚军 郑裕国 《发酵科技通讯》 CAS 2015年第4期55-60,共6页

主要综述了模拟移动床(Simulated Moving Bed,SMB)色谱分离技术从果葡糖浆中分离果糖的应用研究进展。从工作原理、固定相、阀系统、自动化控制、数学模型及工艺参数优化等方面对SMB技术进行了系统介绍,为我国的高纯果糖浆和结晶果糖的... 主要综述了模拟移动床(Simulated Moving Bed,SMB)色谱分离技术从果葡糖浆中分离果糖的应用研究进展。从工作原理、固定相、阀系统、自动化控制、数学模型及工艺参数优化等方面对SMB技术进行了系统介绍,为我国的高纯果糖浆和结晶果糖的产业发展提供参考意见。 展开更多

关键词 果葡糖浆 SMB 色谱分离

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腈水解酶固定化的研究进展 被引量：3

6

作者 黄季维 邹树平 郑裕国 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第2期114-117,共4页

腈水解酶在医药及其中间体、农药及其中间体、食品、饲料添加剂等精细化学品工业生产中具有十分广泛的应用。固定化腈水解酶便于贮存和重复利用,有利于产物分离和连续化生产。介绍了常用的腈水解酶固定化方法,如包埋法、吸附法、共价法... 腈水解酶在医药及其中间体、农药及其中间体、食品、饲料添加剂等精细化学品工业生产中具有十分广泛的应用。固定化腈水解酶便于贮存和重复利用,有利于产物分离和连续化生产。介绍了常用的腈水解酶固定化方法,如包埋法、吸附法、共价法、交联法以及新型固定化方法,如膜截留固定化法、定向固定化法。这些固定化方法对提高腈水解酶稳定性和重复使用批次起着重要的作用。 展开更多

关键词 腈水解酶 固定化 研究进展

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代谢工程改造Escherichia coli生产3-羟基丙酸

7

作者 程秀丽 秦海彬 +1 位作者 熊涛 牛坤 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期35-41,共7页

以提高3-羟基丙酸的产量为目标,对实验室构建的基因工程大肠杆菌进行改造,敲除形成副产物1,3-丙二醇的主要酶基因——乙醛脱氢酶基因yqh D,得到E.coli W3110Δyqh D(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),该工程菌摇... 以提高3-羟基丙酸的产量为目标,对实验室构建的基因工程大肠杆菌进行改造,敲除形成副产物1,3-丙二醇的主要酶基因——乙醛脱氢酶基因yqh D,得到E.coli W3110Δyqh D(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),该工程菌摇瓶发酵产量达到2.53 g/L,相比未敲除yqh D基因的菌株,产量提高了5.8倍。另外,敲除了甘油代谢途径中的抑制因子glpR基因,得到E.coli W3110ΔglpR(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),该工程菌摇瓶发酵产量达到2.86 g/L,相比未敲除glpR基因的菌株,产量提高了6.7倍。后经5 L罐发酵培养后,3-羟基丙酸的产量提升到15.4 g/L。该实验为进一步利用大肠杆菌工程菌发酵生产3-羟基丙酸提供了研究基础。 展开更多

关键词 3-羟基丙酸 甘油代谢 基因敲除 重组大肠杆菌

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反-Prelog规则羰基还原酶产生菌Debaryomyces castellii ZJB-12032产酶条件优化研究

8

作者 姚震 罗希 +1 位作者 王亚军 郑裕国 《发酵科技通讯》 CAS 2014年第2期1-5,共5页

6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯是合成阿托伐他汀的关键手性前体。实验室保藏菌株Debaryomyces castellii ZJB-12032能够不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯β羰基,生成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯,该生物还原反应符合... 6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯是合成阿托伐他汀的关键手性前体。实验室保藏菌株Debaryomyces castellii ZJB-12032能够不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯β羰基,生成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯,该生物还原反应符合反-prelog规则。通过优化D.castellii ZJB-12032发酵产酶条件,包括碳源、氮源、磷源、接种量、接种时间、发酵时间,获得其最佳培养基配方:麦芽糖50 g/L、NaNO315 g/L、NaH2PO4·2H2O 0.5 g/L、Na2HPO4·12H2O 0.5 g/L,最适发酵条件:接种量10%,种龄8 h,培养温度30℃,发酵时间24h。在上述最佳发酵条件下,发酵液体积酶活达到10.2 U/L,比酶活1.20 U/g dcw,产物d.e.值99.6%,D.castellii ZJB-12032表现出高差向选择性。 展开更多

关键词 6-氰基-(3R 5R)-二羟基己酸叔丁酯 羰基还原酶 反-Prelog规则

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糖尿病治疗药物及其合成进展 被引量：19

9

作者 朱芳莹 董正伟 +1 位作者 朱文渊 柳志强 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第3期175-181,共7页

糖尿病是一种严重威胁人类健康的慢性疾病,而且患病率呈逐年上升趋势,糖尿病的治疗已成为全球性的重大公共卫生问题。介绍了糖尿病治疗药物及其分类,重点介绍了格列美脲、二甲双胍、罗格列酮、吡格列酮、阿卡波糖、伏格列波糖、瑞格列... 糖尿病是一种严重威胁人类健康的慢性疾病,而且患病率呈逐年上升趋势,糖尿病的治疗已成为全球性的重大公共卫生问题。介绍了糖尿病治疗药物及其分类,重点介绍了格列美脲、二甲双胍、罗格列酮、吡格列酮、阿卡波糖、伏格列波糖、瑞格列奈、那格列奈、西他列汀和维格列汀等重要降糖药物的作用机理、合成路线及应用等,以期为更加安全、有效、合理地选择降糖药物提供一定的依据。 展开更多

关键词 糖尿病 降糖药 合成 化学法 生物法

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产S-腺苷蛋氨酸酵母菌的诱变选育 被引量：3

10

作者 秦海彬 牛坤 王远山 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期23-27,共5页

以选育产S-腺苷蛋氨酸的高产酿酒酵母菌株为目标,利用常温常压等离子体和137 Csγ-射线对菌株进行诱变。通过5轮常温常压等离子体诱变和4轮γ-射线诱变,结合乙硫氨酸、制霉菌素抗性筛选,获得突变株AC-10,摇瓶发酵48 h,其S-腺苷蛋氨酸产... 以选育产S-腺苷蛋氨酸的高产酿酒酵母菌株为目标,利用常温常压等离子体和137 Csγ-射线对菌株进行诱变。通过5轮常温常压等离子体诱变和4轮γ-射线诱变,结合乙硫氨酸、制霉菌素抗性筛选,获得突变株AC-10,摇瓶发酵48 h,其S-腺苷蛋氨酸产量达到1.15 g/L,与出发菌株相比提高了130.0%。摇瓶发酵最适条件为30℃、初始pH 5.5。经5 L发酵罐分批补料发酵68 h,S-腺苷蛋氨酸产量达到5.62 g/L。 展开更多

关键词 S-腺苷蛋氨酸 酿酒酵母 诱变选育

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琥珀酸半醛脱氢酶GabD4的表达、纯化及酶学性质分析 被引量：1

11

作者 贾东旭 刘东 郑裕国 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期97-101,共5页

人工合成琥珀酸半醛脱氢酶Gab D4基因,经蛋白表达和纯化,对其酶学性质进行研究。结果表明,Gab D4的最适反应温度为37℃;最适p H为7.5（磷酸盐缓冲液）或9.0（甘氨酸-氢氧化钠缓冲液）;金属离子中,Cu2＋对Gab D4酶活力的影响较大;Gab D4... 人工合成琥珀酸半醛脱氢酶Gab D4基因,经蛋白表达和纯化,对其酶学性质进行研究。结果表明,Gab D4的最适反应温度为37℃;最适p H为7.5（磷酸盐缓冲液）或9.0（甘氨酸-氢氧化钠缓冲液）;金属离子中,Cu2＋对Gab D4酶活力的影响较大;Gab D4对3~5个碳的醛底物具有更高的催化效率;以乙醛为底物,计算得到米氏常数（Km）、最大反应速率（Vmax）分别为6.86 mmol/L和20.6μmol/（min·mg protein）。该结果为深入了解Gab D4的酶学性质提供参考。 展开更多

关键词 醛脱氢酶 重组表达 分离纯化 酶学性质

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不同醛脱氢酶对重组克雷伯氏菌生产3-羟基丙酸的影响

12

作者 贾东旭 陈铁男 +3 位作者 周佳锋 牛坤 秦海彬 金利群 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期15-21,共7页

PCR扩增Cupriavidus necator Gab D4和Azospirillum brasilense KGSADH醛脱氢酶基因,分别与经改造获得卡那霉素抗性的p UC19质粒(p UC19Kan)连接,再转化至Klebsiella pneumoniae DSM2026,获得重组菌KpKan/KGSADH和KpKan/Gab D4。经摇瓶... PCR扩增Cupriavidus necator Gab D4和Azospirillum brasilense KGSADH醛脱氢酶基因,分别与经改造获得卡那霉素抗性的p UC19质粒(p UC19Kan)连接,再转化至Klebsiella pneumoniae DSM2026,获得重组菌KpKan/KGSADH和KpKan/Gab D4。经摇瓶发酵,KpKan/KGSADH和KpKan/Gab D4的最高3-羟基丙酸(3-HP)产量分别为3.66与2.56 g/L,与未导入醛脱氢酶的K.pneumoniae对照菌相比,分别提高了352%与216%。对其他产物的研究表明,2株重组菌的1,3-丙二醇(1,3-PDO)的产量低于对照菌,而2,3-丁二醇(2,3-BD)和乙酸产量高于对照菌。该研究首次将C.necator Gab D4醛脱氢酶基因导入K.pneumoniae,并对比了KpKan/KGSADH与KpKan/Gab D4的3-HP产量,实验中确定的性能优良的发酵菌株为继续提高3-HP产量提供了帮助。 展开更多

关键词 克雷伯氏菌 甘油 醛脱氢酶 3-羟基丙酸

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定点饱和突变提高L-脯氨酸-4-羟化酶的酶活 被引量：2

13

作者 周海岩 李会帅 +1 位作者 王培 柳志强 《发酵科技通讯》 CAS 2018年第4期193-198,共6页

为了提高L-脯氨酸-4-羟化酶(P4H)合成反式-4-羟基-L-脯氨酸(4-Hyp)的能力,首先对实验室前期构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-28b-p4h的P4H进行三维结构模拟和"热点"氨基酸分析,选择了7个位于"疏水口袋"附... 为了提高L-脯氨酸-4-羟化酶(P4H)合成反式-4-羟基-L-脯氨酸(4-Hyp)的能力,首先对实验室前期构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-28b-p4h的P4H进行三维结构模拟和"热点"氨基酸分析,选择了7个位于"疏水口袋"附近的氨基酸残基(Y205,K207I241,F137,T142,V53和R45)进行定点饱和突变,得到P4H酶活力明显提高的突变型酶F137R和Y205K。采用F137R和Y205K催化转化0.35g/L L-脯氨酸产物4(Hyp质量浓度分别为55.09mg/L和52.29mg/L),比野生型酶分别提高了58%和50%。经过分子对接比较发现,突变型P4H的活性中心没有发生显著变化,酶活的提高可能是由于突变作用使蛋白构型发生了轻微改变,增加了该酶与底物或辅底物的亲和力引起的。该结果为进一步利用P4H生物合成4-Hyp提供了重要的理论基础。 展开更多

关键词 L-脯氨酸4-羟化酶 反式-4-羟基-L-脯氨酸 生物催化 定点饱和突变

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