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实时荧光环介导等温扩增技术检测土壤中的类鼻疽伯克霍尔德菌
被引量：
3
1
作者
李子微
宾蕾
+6 位作者
尹艳
高琦
赵勇
张平平
潘纹玉
陆沙
邓仲良
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期216-222,共7页
目的结合荧光染料EvaGreen与环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)探索快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的可行性。方法根据类鼻疽伯克霍尔德菌filc基因片段设计了LAMP引物,利用荧光染料EvaGreen建立实时荧光环...
目的结合荧光染料EvaGreen与环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)探索快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的可行性。方法根据类鼻疽伯克霍尔德菌filc基因片段设计了LAMP引物,利用荧光染料EvaGreen建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RealAmp),优化反应条件,扩增产物经电泳鉴定。通过类鼻疽伯克霍尔德菌和其他致病菌验证特异性,比较RealAmp与普通LAMP技术的敏感度,并测定人工污染土壤模拟样本的检出限。结果恒温63℃条件下,20～60 min即可完成RealAmp检测;利用该方法检测类鼻疽伯克霍尔德菌为阳性,其余致病菌如鼠疫杆菌、布鲁氏杆菌、大肠杆菌等13株参考菌株及蜱虫的DNA(含大量假单胞菌属细菌)呈扩增阴性;RealAmp技术检测类鼻疽伯克霍尔德菌核酸的灵敏度为10~2 CFU/mL,检测克隆株质粒的灵敏度可达10~1 copies/μL,比普通LAMP技术的灵敏度高10倍;人工污染土壤模拟样本RealAmp的检出限为4.4×10~1 CFU/g,且20 min左右即可判定结果;直接检测24份浓度为4.4×10~1 CFU/g～4.4×10~8 CFU/g的类鼻疽伯克霍尔德菌人工污染土壤样本,在检出限以上,检出率同荧光定量PCR一致。结论该方法特异性强、灵敏度高,且可实时监测类鼻疽伯克霍尔德菌,有望成为快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的有效方法,增强抵御生物恐怖战争的能力。
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关键词
类鼻疽伯克霍尔德菌
filc基因
快速检测
环介导等温扩增技术
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职称材料
题名
实时荧光环介导等温扩增技术检测土壤中的类鼻疽伯克霍尔德菌
被引量：
3
1
作者
李子微
宾蕾
尹艳
高琦
赵勇
张平平
潘纹玉
陆沙
邓仲良
机构
南华大学公共卫生学院
生物
应急与
临床
poct
北京市
重点
实验室
(
bz
衡阳市健康危害因子检验检疫新技术研究
重点
实验室
北京
热景
生物
技术股份有限公司
军事医学研究院微
生物
流行病研究所
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期216-222,共7页
基金
国家重点研发计划(No.2017YFC1601503)
中国载人航天预先研究项目(No.010101)
+3 种基金
湖南教育厅重点课题(No.15A165)
南华大学大学生研究性学习与创新性实验计划(No.20164890101)
南华大学自然科学基金项目资助(No.2018KYY266)
衡阳市重点实验室项目(No.2018KJ110)联合资助~~
文摘
目的结合荧光染料EvaGreen与环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)探索快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的可行性。方法根据类鼻疽伯克霍尔德菌filc基因片段设计了LAMP引物,利用荧光染料EvaGreen建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RealAmp),优化反应条件,扩增产物经电泳鉴定。通过类鼻疽伯克霍尔德菌和其他致病菌验证特异性,比较RealAmp与普通LAMP技术的敏感度,并测定人工污染土壤模拟样本的检出限。结果恒温63℃条件下,20～60 min即可完成RealAmp检测;利用该方法检测类鼻疽伯克霍尔德菌为阳性,其余致病菌如鼠疫杆菌、布鲁氏杆菌、大肠杆菌等13株参考菌株及蜱虫的DNA(含大量假单胞菌属细菌)呈扩增阴性;RealAmp技术检测类鼻疽伯克霍尔德菌核酸的灵敏度为10~2 CFU/mL,检测克隆株质粒的灵敏度可达10~1 copies/μL,比普通LAMP技术的灵敏度高10倍;人工污染土壤模拟样本RealAmp的检出限为4.4×10~1 CFU/g,且20 min左右即可判定结果;直接检测24份浓度为4.4×10~1 CFU/g～4.4×10~8 CFU/g的类鼻疽伯克霍尔德菌人工污染土壤样本,在检出限以上,检出率同荧光定量PCR一致。结论该方法特异性强、灵敏度高,且可实时监测类鼻疽伯克霍尔德菌,有望成为快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的有效方法,增强抵御生物恐怖战争的能力。
关键词
类鼻疽伯克霍尔德菌
filc基因
快速检测
环介导等温扩增技术
Keywords
Burkholderia pseudomallei
filc
rapid detection technology
LAMP
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
实时荧光环介导等温扩增技术检测土壤中的类鼻疽伯克霍尔德菌
李子微
宾蕾
尹艳
高琦
赵勇
张平平
潘纹玉
陆沙
邓仲良
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
3
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